支气管上皮-肌上皮瘤—附1例报道及文献复习

目的 探讨支气管上皮 -肌上皮瘤的病理组织学特点、诊断及鉴别诊断。方法 应用光镜、免疫组化染色及电镜等方法对 1例支气管上皮 -肌上皮瘤的手术切除标本进行组织学观察。结果 支气管上皮 -肌上皮瘤组织学特点为肿瘤细胞的多样化。免疫组化染色显示cytokeratin、S 10 0蛋白、Vimentin、MSA(muscle specialactin)等不同程度的阳性反应。电镜下显示瘤细胞胞浆内大量的肌微丝或微丝及不规则分布的致密体。细胞周围连续或中断的基板等。结论 支气管上皮 -肌上皮瘤是一种罕见的肿瘤 ,根据组织学特点 ,结合免疫组化染色及电镜下特征 。

气管-支气管肺肌上皮瘤临床分析

目的探讨气管-支气管肺肌上皮瘤临床表现、诊断及治疗。方法回顾性分析本院1例、近15年国内外报道的10例确诊的气管-支气管肺肌上皮瘤病例资料、随访记录。结果发现气管-支气管肺肌上皮瘤多表现咳嗽、气促、咯血;确诊及治疗依靠手术。结论气管-支气管肺肌上皮瘤是一种罕见的肺部肿瘤,手术切除是治愈本病的主要手段。

上皮-间充质转化在高氧诱导大鼠支气管肺发育不良模型中的作用及机制研究

目的探讨上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在大鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型中的作用及机制。方法实验分为两部分。(1)将48只早产大鼠随机分为常氧组和高氧组,每组24只。高氧组暴露于85%氧气中建立早产大鼠BPD模型,常氧组置于同一室内常压空气中,于实验第1、4、7、14天收集早产大鼠肺组织标本。(2)将大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系(RLE-6TN)随机分为常氧组(常规空气中培养)和高氧组(在95%氧气中培养),分别于高氧暴露后12 h、24 h、48 h收集细胞标本进行检测。使用苏木精-伊红染色法观察早产大鼠肺泡化情况,免疫荧光检测早产大鼠肺组织和RLE-6TN细胞肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SPC)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的共定位。实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测早产大鼠肺组织和RLE-6TN细胞EMT相关mRNA和蛋白表达水平。结果(1)与常氧组相比,高氧暴露7 d开始高氧组早产鼠可见肺泡化阻滞和肺泡结构简单化改变;肺组织中SPC和α-SMA存在明显共定位现象,高氧暴露7 d、14 d时,与常氧组比较,高氧组SPC表达减少,α-SMA表达增加;高氧暴露7 d、14 d时,与常氧组比较,高氧组TGF-β1、α-SMA、N-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),SPC、E-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。(2)高氧暴露24 h、48 h时,与常氧组比较,高氧组SPC表达减少,α-SMA表达增加;高氧暴露48 h时,与常氧组比较,高氧组SPC、E-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),TGF-β1、α-SMA、N-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论EMT破坏了BPD早产大鼠肺泡上皮细胞之间的紧密连接,造成肺泡结构简单化和发育异常,参与了BPD的发生发展。

LncRNA XIST调节miR-574-5p/TLR4轴对呼吸道合胞病毒感染的支气管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码(long non-coding,Lnc)核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)X-非活性特异性转录本(X-inactive specific transcript,XIST)调节微小RNA(microRNA,miR)-574-5p/Toll样受体(Toll-like receptor 4,TLR4)轴对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染的支气管上皮细胞凋亡的影响。方法将人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial,16HBE)分为阴性对照(negative control,NC)组、RSV感染(RSV infection,RSV)组、小干扰RNA阴性对照(small interfering RNA negative control,si-NC)组、XIST小干扰RNA(XIST small interfering RNA,si-XIST)组、siXIST+抑制剂阴性对照(inhibitor negative control,inhibitor-NC)组、si-XIST+miR-574-5p抑制剂(miR-574-5p inhibitor)组,实时荧光定量聚合酶链反应检测LncRNA XIST、miR-574-5p表达;5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)染色、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β的分泌;双荧光素酶报告基因实验验证miR-574-5p与LncRNA XIST和TLR4的关系;蛋白质印迹检测TLR4、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(B lymphoblastoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteine aspartate proteolytic enzyme 3,Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果相较于NC组,RSV组、si-NC组LncRNA XIST、凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、TLR4、Bax、Cleaved Caspase-3表达升高,EdU阳性率、miR-574-5p、PCNA、Bcl-2表达降低(P均<0.05);相较于si-NC组,si-XIST组LncRNA XIST表达、凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、TLR4、Bax、Cleaved Caspase-3表达降低,EdU阳性率、miR-574-5p、PCNA、Bcl-2表达升高(P均<0.05);下调miR-574-5p可逆转敲低LncRNA XIST对RSV感染的16HBE细胞凋亡和炎症反应的抑制(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-574-5p与LncRNA XIST、miR-574-5p与TLR4存在靶向调控关系(P<0.05)。结论LncRNA XIST在RSV感染的16HBE细胞中上调表达,敲低LncRNA XIST可能通过上调miR-574-5p来下调TLR4表达,抑制RSV感染后的16HBE细胞凋亡。

气管镜诊断气管-支气管肺低度恶性肌上皮瘤2例并文献复习

目的:探讨气管镜诊断气管-支气管肺肌上皮瘤的要点及肌上皮瘤的治疗方案。方法:回顾性分析本院2例及国内外报道的气管-支气管肺肌上皮瘤病例资料和随访记录。结果:气管-支气管肺肌上皮瘤多表现为咳嗽、气促、咯血;确诊及治疗需依靠手术。结论:气管-支气管肺低度恶性肌上皮瘤是一种非常罕见的肿瘤,气管镜标本量少,需要仔细观察标本组织形态并结合免疫组化明确诊断。

Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体miR-21-5p靶向SKP2缓解支气管肺发育不良

目的探讨来源于Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC-Ⅱ)外泌体(exosomal,Exos)-miR-21-5p(简称miR-21)靶向S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,SKP2)对支气管肺泡发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的保护效应及作用机制。方法使用60只6~8周龄的SD大鼠,其中30只通过差速贴壁离心法提取原代AEC-Ⅱ并进行培养。密度梯度离心法用于获得AEC-Ⅱ来源的外泌体,密度梯度离心法用于提取AEC-Ⅱ培养基中囊泡,并通过透射电镜及粒径分析对其验证,双荧光素报告基因实验以确认miR-21与SKP2的靶向关系。剩余的30只大鼠按照3∶1的雌雄比例混合,以便于进行怀孕检测。将这些新生小鼠随机分为4个不同的实验组:空气对照组(Con组)、高氧处理组(BPD+PBS组)、接受高氧和外泌体治疗的小鼠(BPD+Exos-miR-21组),以及高氧联合外泌体miR-21抑制剂处理组(BPD+Exos-AV-miR-21组)。新生SD大鼠将暴露于85%的氧气环境中,以此建立BPD模型。经过14 d高氧处理后,使用RTq-PCR技术检测肺组织和外泌体中miR-21的表达水平。肺组织经HE染色观察其病理学变化,并计算了平均肺泡线性截距(MLI)和放射状肺泡计数(RAC)。分光光度法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)的水平,荧光分光光度法测定活性氧簇(ROS)水平。此外,利用Western blot技术检测了SKP2、NR2F2和VEGF-A蛋白的表达水平。结果电镜及粒径分析结果显示AEC-Ⅱ细胞提取的小泡结构物质属于外泌体,miR-21在外泌体中表达显著上调(P<0.01),双荧光素酶基因报告实验证实SKP2为miR-21的作用靶标。与Con组比较,BPD+PBS组及BPD+Exos-AVmiR-21组肺组织HE可见肺组织结构紊乱,肺泡增大、简化,ROS、MDA、MLI增高及SKP2蛋白表达升高(P<0.01);而RAC、SOD、T-AOC、miR-21下调及NR2F2、VEGF-A蛋白表达降低(P<0.01);与BPD+PBS组比较,BPD+Exos-miR-21组肺组织HE可见无肺泡数目增加,肺泡简化程度好转,同时MLI、ROS、MDA降低及SKP2蛋白表达降低(P<0.01);而ROC、SOD、T-AOC、miR-21上调及NR2F2、VEGF-A蛋白表达升高(P<0.01)。结论AEC-Ⅱ来源的Exos-miR-21可能靶向SKP2通过促进NR2F2、VEGF-A蛋白表达抑制氧化应激促进肺泡发育改善BPD。

蒙药十一味丁香散对支气管哮喘小鼠气道重塑和上皮-间质转化的干预研究

目的:探讨蒙药十一味丁香散对屋尘螨诱导的支气管哮喘小鼠气道重塑和气道上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transformation,EMT)的影响。方法:40只雄性BALB/c小鼠被随机分为4组,每组10只,分别为空白组、模型组、蒙药一十味丁香散组、布地奈德组。采用屋尘螨滴鼻法复制支气管哮喘模型。测定醋甲胆碱激发下的小鼠基础增强呼气间歇(Penh)值进行气道高反应性(AHR)检测,HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态学变化,Western blot及RTPCR法检测小鼠肺组织中E-钙黏素(E-cadherin)、N-钙黏素(N-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(a-SMA)蛋白及mRNA的表达水平。结果:1.AHR检测与空白组相比较,模型组Penh值明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比较,布地奈德组、蒙药十一味丁香散组中Penh值均降低,差异具有统计学意义(P<0.01);而蒙药十一味丁香散组与布地奈德组相比较,二者无统计学意义(P>0.05)。2.肺组织病理形态与空白组相比较,模型组肺组织结构重度异常,大量肺泡萎缩;与模型组相比较,蒙药十一味丁香组和布地奈德组气道炎症、气道粘膜厚度明显减轻。3.E-cadherin、N-cadherin、a-SMA检测与空白组相比较,模型组E-cadherin蛋白及E-cadherin mRNA表达显著降低,N-cadherin蛋白表达及Ncadherin mRNA显著升高,a-SMA蛋白表达及a-SMA mRNA显著增加,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比较,蒙药十一味丁香散组和布地奈德组N-cadherin蛋白表达及N-cadherin mRNA降低,E-cadherin蛋白及E-cadherin mRNA表达增加,a-SMA蛋白表达及a-SMA mRNA表达降低,差异具有统计学意义(P<0.01);蒙药十一味丁香散组和布地奈德组两组比较,两者无统计学意义(P>0.05)。结论:蒙药十一味丁香散能降低哮喘小鼠气道高反应性、改善气道重塑状态,其作用机制可能与调控EMT相关。

肺内调节肽对支气管上皮细胞ICAM-1表达及NF-κB活性的调控(英文)

细胞间粘附分子 1(ICAM 1)是介导细胞与细胞之间粘附的重要生物分子 ;核因子 κB (NF κB)是体内普遍存在、能迅速对刺激产生反应的重要核转录因子。越来越多的证据显示 ,ICAM 1表达与NF κB激活是炎症反应的重要步骤。我们应用免疫组化、RT PCR、凝胶阻滞电泳 (EMSA)等多种实验方法 ,观察了肺内调节肽对支气管上皮细胞ICAM 1表达及NF κB活性的影响 ,以及NF κB抑制剂MG 13 2对ICAM 1表达的影响。实验结果发现 ,VIP、EGF可使臭氧应激BECs的ICAM 1表达降低 ;ET 1、CGRP可使未受应激BECs的ICAM 1表达增加。NF κB抑制剂MG 13 2可阻断O3、ET 1、CGRP引起的ICAM 1表达 ,提示NF κB在调控ICAM 1表达中起重要作用。EM SA结果显示 ,BECs中NF κB在臭氧应激下反复激活 ,CGRP与ET 1可促进NF κB的激活 ;VIP与EGF可抑制臭氧应激的BECs中NF κB的激活。以上结果说明 ,VIP、EGF可通过下调ICAM 1转录及NF κB激活减轻炎症反应 ,而ET 1、CGRP可通过上调ICAM 1转录及NF κB激活、加大炎症反应。ICAM 1与NF

大鼠气管-支气管上皮细胞的分离、鉴定和培养

目的探讨大鼠气管-支气管上皮细胞的分离、鉴定和培养的方法。方法采用链酶蛋白酶消化联合细胞刷刷洗气管-支气管分离上皮细胞,激光共聚焦显微镜下鉴定,于无血清完全F12培养基中培养。结果实验中可得到大约106个细胞/鼠,并且有较高的成活率和细胞纯度,在无血清完全F12培养基中细胞生长良好。结论消化后刷洗法是一种实用的大鼠气管-支气管上皮细胞提取方法,无血清完全F12培养基是一种可行的培养体系。

呼吸道合胞病毒感染支气管上皮细胞介导IL-8致Th17/Treg失衡

目的:探讨呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染导致哮喘易感性增加的机制,观察人支气管上皮细胞感染RSV后IL-8的表达,以及IL-8对Th17/调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Treg)分化的调节作用。方法:将人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)分为对照组和RSV感染组,构建并验证RSV持续感染HBECs模型,real-time PCR检测对照组和RSV感染组中IL-8 m RNA的表达;ELISA检测感染细胞上清液中IL-8的浓度。提取健康人外周血淋巴细胞并将其分为空白对照组和IL-8作用组,参照ELISA检测到的浓度将IL-8作用于淋巴细胞24 h,采用流式细胞仪检测淋巴细胞中Th17和Treg亚群的分布情况。结果:本实验成功构建RSV持续感染HBECs模型,感染后的细胞仍能够继续分裂传代,并可检测到RSV持续存在的证据。免疫荧光显示细胞内有RSV致病蛋白的荧光表达;电镜下观察到感染细胞的线粒体水肿和内质网扩张,出现核周裂隙以及合胞现象,细胞核、胞浆内有病毒颗粒分布。Real-time PCR和ELISA分别检测到RSV感染组细胞内IL-8 m RNA表达和上清液中IL-8的分泌水平均高于对照组(均P<0.05)。进一步将IL-8作用于淋巴细胞,流式细胞学结果表明IL-8作用组淋巴细胞中Th17亚群比率增高(P<0.05),但Treg亚群比率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:RSV感染气道上皮细胞后可通过过度分泌IL-8而引起Th 17/Treg亚群分化异常。

烟曲霉菌提取物对人支气管上皮细胞粒-巨噬细胞集落刺激因子表达的影响

目的:探讨烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达的影响及其可能机制。方法:分别应用不同浓度(0、8、16、20 mg/L)的烟曲霉菌提取物(Aspergillus fumigatus extract,AFE)作用体外培养人支气管上皮细胞16HBE-14o不同的时间(12、24、48、72 h)。同时还应用热处理的AFE(heat-treated AFE,HT-AFE)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(抑肽酶)、蛋白激酶激活受体-2(PAR-2)激动剂(SLIGLV-NH2)和PAR-2阻断剂(FSLLRY-NH2)作用16HBE-14o细胞。应用ELISA法检测细胞上清液GM-CSF含量,同时应用RT-PCR法检测GM-CSF mRNA的表达。结果:正常培养条件下的对照组细胞仅表达分泌少量GM-CSF,而给予不同浓度的AFE作用后,细胞合成和分泌GM-CSF的量较对照组明显增加(P<0.05),并呈明显的时间和浓度依赖性。PAR-2激动剂同样可以促进细胞合成分泌GM-CSF。丝氨酸蛋白酶抑制剂和PAR-2阻断剂几乎完全抑制AFE的上述作用。HT-AFE的蛋白酶活性完全灭活,不能促进细胞GM-CSF表达增加。结论:AFE依赖其蛋白酶活性激活PAR-2受体,促进呼吸道上皮细胞GM-CSF合成和分泌,从而促进哮喘的发生和发展。

支扩宁合剂对人支气管上皮细胞肿瘤坏死因子-α表达影响的体外研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在支气管扩张症发病机制中的作用及支扩宁合剂的疗效机理。方法应用支气管扩张症患者痰液刺激分组体外培养的人支气管上皮细胞,检测、分析各组细胞TNF-α表达水平及中药支扩宁合剂的干预效果。结果在支气管扩张症患者的痰液刺激下,支气管上皮细胞TNF-α表达活化;中药支扩宁合剂可抑制支气管上皮细胞TNF-α的表达。结论支气管上皮细胞TNF-α表达在支气管扩张症发病中可能起到重要的作用;中药支扩宁合剂可抑制支气管上皮细胞TNF-α的表达,从而抑制支气管扩张症气道炎症反应,这可能是其疗效机理之一。

大承气汤含药血清对内毒素刺激的人支气管上皮细胞表达CAV-1、eNOS及NF-κB的影响

目的观察大承气汤含药血清对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)刺激的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)表达小凹蛋白-1(caveolin-1、CAV-1),内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)及核转录因子κB(nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB)的影响。方法制备大承气汤及大承气汤含药血清。将体外培养的HBECs分为7组进行处理(正常血清组,单纯LPS干预组,低剂量大承气汤含药血清组,中剂量大承气汤含药血清组,高剂量大承气汤含药血清组,西药对照组,空白血清对照组),采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、Real-timePCR、免疫细胞化学及Westernblot法检测不同剂量的大承气汤含药血清对内毒素刺激HBECs表达CAV-1、eNOS及NF-κBmRNA水平及蛋白的影响。结果正常血清组HBECs有基础量的CAV-1、eNOS及NF-κBmRNA及蛋白的表达,经LPS刺激后,单纯干预组CAV-1、eNOS及NF-κBmRNA及蛋白表达较正常血清组显著增加(P<0.01),而不同剂量大承气汤含药血清均可抑制CAV-1、eNOS及NF-κBmRNA及蛋白表达。结论大承气汤含药血清能抑制LPS刺激的HBECs中CAV-1、eNOS及NF-κB的表达。

蛙皮素受体亚型-3对人支气管上皮细胞的抗损伤保护作用

目的：研究蛙皮素受体亚型-3（bombesin receptor subtype-3，BRS-3）激活对人支气管上皮细胞（human brochial epithelial cells，HBECs）增殖的影响及对HBECs抗损伤的保护作用，并探讨其初步机制。方法：应用MTT法[噻唑蓝3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyl tetrazolium bromide]观察BRS-3特异性激动剂P3513对HBECs增殖的影响；在O3应激作用下，观察HBECs的^3H-Udr漏出率、乳酸脱氢酶释放活性、过氧化氢酶活性，以及P3513对其影响；观察P3513对HBECs上皮钙黏素（epithelial cadherin，E-cd）、整合素蛋白表达的影响。结果：（1）P3513能显著促进HBECs增殖（10^-9～10^-7mol／L），其作用呈剂量依赖性。（2）O3应激使^3H—Udr漏出率增加，LDH释放活性增加；P3513可显著降低O3应激的HBECs ^3H—Udr漏出率、LDH释放活性，但能增加过氧化氢酶活性；（3）钙调素抑制剂W7，酪氨酸激酶抑制剂PD98059和蛋白激酶A抑制剂H89能阻断P3513的促增殖和抗损伤保护效应；（4）P3513可使03应激的HBECs钙黏素、整合素蛋白的表达增强。结论：P3513介导的BRS-3激活对O3应激的HBECs有抗损伤保护作用，其信号途径可能与Ca^2＋通路、MEK和PKA有关。

1,4-萘醌老化黑碳对人支气管上皮细胞活性氧和DNA链断裂的影响

目的:研究1,4-萘醌老化黑碳(1,4-naphthoquinone aged black carbon,BC/1,4-NQ)对人支气管上皮细胞(16HBE)活性氧水平和DNA链断裂的影响。方法:分别用BC/1,4-NQ及相对应质量浓度的BC和1,4-NQ(BC/1,4-NQ的质量浓度分别为:10.0/0.2、20.0/0.4、40.0/0.8、80.0/1.6、160.0/3.2 mg/L,BC的质量浓度分别为:10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 mg/L,1,4-NQ的质量浓度分别为:0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/L)染毒16HBE细胞24、48、72 h,通过cell counting kit-8(CCK-8)法检测细胞毒性。再以不同剂量的BC/1,4-NQ(20.0/0.4、40.0/0.8、80.0/1.6 mg/L)、BC(20.0、40.0、80.0 mg/L)、1,4-NQ(0.4、0.8、1.6 mg/L)染毒16HBE细胞24 h,采用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐探针(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,通过单细胞凝胶电泳实验,以Olive尾距为指标,评价DNA链断裂遗传毒性。结果:除10.0/0.2 mg/L剂量染毒24 h后BC/1,4-NQ未见明显的细胞毒性,在各染毒时间点、各剂量BC/1,4-NQ的细胞存活率均显著低于对照组(P<0.05),并表现出一定的剂量依赖效应。当BC/1,4-NQ≥80.0/1.6 mg/L时,BC/1,4-NQ的细胞存活率要低于BC单独处理组、高于1,4-NQ处理组(P<0.05)。此外,各剂量BC/1,4-NQ均可引起16HBE胞内ROS含量及Olive尾距增加,并显著大于对照组(P<0.05),表现出一定的剂量依赖效应;当BC/1,4-NQ为80.0/1.6 mg/L时,BC/1,4-NQ的胞内ROS含量和Olive尾距显著大于BC单独处理组、小于1,4-NQ处理组(P<0.05)。结论:以BC/1,4-NQ处理16HBE细胞,可诱导细胞内ROS水平升高,并产生细胞毒性和遗传毒性,且在较高剂量下,BC/1,4-NQ的细胞毒性、胞内ROS水平和遗传毒性要高于BC单独处理组,低于1,4-NQ单独处理组。

支气管上皮细胞IL-6和IL-8的表达

目的以支气管上皮细胞株BEAS-2B细胞为研究对象,观察在Th2型细胞因子和促炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNFα)的作用下,IL-8和IL-6的表达变化。方法通过RT-PCR方法测定Th2型细胞因子IL-4、IL-13以及促炎症因子TNFα单独和协同刺激下BEAS-2B细胞IL-8和IL-6的基因表达;通过ELISA方法测定细胞培养上清液中蛋白质的表达。结果在IL-4、IL-13和促炎症因子TNFα的单独刺激下,IL-6和IL-8的基因和蛋白质表达均较未刺激组显著增高;但IL-4、IL-13和TNFα协同刺激后,IL-8的基因和蛋白质表达进一步增高,而IL-6反而降低。结论支气管上皮细胞在TNFα和Th2型细胞因子的协同刺激下,通过调节IL-6和IL-8的表达,进一步调节嗜酸粒细胞性和非嗜酸粒细胞性炎症。

异钩藤碱上调miR-192-5p对TNF-α诱导的人支气管上皮细胞凋亡和炎症因子释放的作用及其机制

目的:探讨异钩藤碱(IRN)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人支气管上皮细胞(16HBE)凋亡和炎症因子释放的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:采用不同浓度[(0(对照组)、2.5、5.0、10.0、20.0、30.0和40.0μmol·L^(-1)]IRN处理16HBE细胞24 h后,采用20 mg·L^(-1)TNF-α处理细胞18 h。将16HBE细胞分为对照组、TNF-α组(20 mg·L^(-1))、IRN组(20μmol·L^(-1))、TNF-α+IRN组(20 mg·L^(-1)TNF-α和20μmol·L^(-1)IRN)、TNF-α+IRN+miR-192-5p inhibitor组(20 mg·L^(-1)TNF-α、20μmol·L^(-1)IRN和50 nmol·L^(-1)miR-192-5p inhibitor)以及TNF-α+IRN+pcDNA3.1 CXCR5组[20 mg·L^(-1)TNF-α、20μmol·L^(-1)IRN和2μmol·L^(-1)pcDNA3.1-C-X-C趋化因子受体5(CXCR5)]。采用CCK-8法检测各组16HBE细胞活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组16HBE细胞中miR-192-5p和CXCR5 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组16HBE细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、Bcl-2、Cleaved-Caspase3、CXCR5以及磷酸化的p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、c-Jun和核因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达水平,ELISA法检测各组16HBE细胞上清液中IL-1β和MCP-1水平,流式细胞术检测各组16HBE细胞凋亡率,TargetScan7.1网站预测靶基因并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p与CXCR5之间的靶向结合关系。结果:与对照组比较,不同浓度TNF-α组细胞活性明显降低(P<0.05);与对照组组比较,5.0、10.0、20.0和30.0μmol·L^(-1)IRN组细胞活性升高(P<0.05)。与对照组比较,TNF-α组16HBE细胞中miR-192-5p和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),IL-1β、MCP-1、Cleaved-Caspase-3、p-p38、p-JNK、p-c-Jun和p-NF-κBp65蛋白表达水平,细胞凋亡率以及上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05);与TNF-α组比较,TNF-α+IRN组16HBE细胞中miR-192-5p和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),IL-1β、MCP-1、Cleaved-Caspase-3、p-p38、p-JNK、p-c-Jun和p-NF-κBp65蛋白表达水平,细胞凋亡率以及上清液中IL-1β和MCP-1水平明显降低(P<0.05);与TNF-α+IRN+NC inhibitor组比较,TNF-α+IRN+miR-192-5p inhibitor组16HBE细胞中miR-192-5p和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),IL-1β、MCP-1、Cleaved-Caspase-3、p-p38、p-JNK、p-c-Jun和p-NF-κBp65蛋白表达水平,细胞凋亡率以及上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05)。与NC mimic和NC inhibitor组比较,miR-192-5p mimic组16HBE细胞中CXCR5 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),miR-192-5p inhibitor组16HBE细胞中CXCR5mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,TNF-α组16HBE细胞中CXCR5蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05);与TNF-α组比较,TNF-α+IRN组16HBE细胞中CXCR5蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞活性明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),上清液中IL-1β和MCP-1水平明显降低(P<0.05);与TNF-α+IRN+pcDNA3.1组比较,TNF-α+IRN+pcDNA3.1 CXCR5组16HBE细胞中CXCR5蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05)。结论:IRN能减轻TNF-α诱导的人支气管上皮细胞凋亡和炎症因子释放,其作用机制可能与miR-192-5p/MAPKs/NF-κB信号通路有关。

普仑斯特对人支气管上皮细胞表达嗜酸性粒细胞趋化因子-3的影响

目的研究白三烯D4(LTD4)是否参与调节人支气管上皮细胞表达嗜酸性粒细胞趋化因子-3(Eot-3),探讨白三烯受体拮抗剂普仑斯特对此调节效应的影响。方法用LTD4预处理人支气管上皮细胞1h,用IL-4刺激细胞24h,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清中Eot-3蛋白水平;用不同水平普仑斯特预处理细胞,重复上述步骤。结果未经处理的人支气管上皮细胞仅表达微量Eot-3;用IL-4刺激细胞并培养24h后,Eot-3表达明显增强;LTD4预处理细胞1h,可使IL-4的诱导作用加强;普仑斯特可完全逆转LTD4的上调作用。结论上调IL-4诱导Eot-3在上皮细胞的表达可能是白三烯参与支气管哮喘嗜酸性粒细胞炎症的机制之一;普仑斯特对LTD4上调效应的逆转,可能是白三烯受体拮抗剂治疗哮喘的作用机制之一。