麻黄碱抑制支气管平滑肌细胞增殖的机制

BK通道(large-conductance Ca2+-activated K+ channel)是一种大电导、电压和钙离子依赖的钾通道,存在于哺乳动物几乎所有的组织中。β1亚基是首次从平滑肌细胞中分离到的一种BK通道辅助亚基。麻黄作为一种β肾上腺素受体激动剂,是一味治疗哮喘的常用中药。利用RT-PCR和膜片钳等技术,研究麻黄治疗哮喘的作用机制。结果表明:麻黄碱(ephedrine,Eph)作为麻黄的一种主要成分,显著抑制支气管平滑肌细胞(bronchial smooth muscle cells,BSMCs)的增殖和BK通道β1亚基的表达,但是对BK通道的电流没有显著影响。

细胞外信号调节激酶1／2信号通路在慢性哮喘模型大鼠支气管平滑肌细胞迁移功能变化中的调控作用

本研究旨在探讨细胞外信号调节激酶1／2(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)信号通路在慢性哮喘模型大鼠支气管平滑肌细胞(bronchial smooth muscle cells,BSMCs)迁移能力改变中的调控作用。应用卵清蛋白致敏和雾化方法制备大鼠慢性哮喘模型,体外培养大鼠BSMCs,采用免疫荧光细胞化学、Western blot和RT-PCR方法检测ERK1／2信号通路的表达,分别用平面迁移实验和跨膜迁移实验来评价BSMCs的活动和趋向迁移能力,并比较用和不用ERK1／2信号通路干预剂的差异。Western blot结果显示慢性哮喘模型大鼠BSMCs中总ERK1／2(9．13±0．87)较对照组(4．68±0．59)明显增加,磷酸化ERK1／2(p-ERK1/2)占总ERK1／2的比值(0．55±0．05)较对照组(0．48±0．04)显著提高(n=10,P<0．01)。慢性哮喘组ERK1和ERK2 mRNA的表达(1．83±0．24和1．07±0．11)较对照组(0．58±0．14和0．51±0．12)明显增高(n=10,P<0．01)。在平面迁移实验中,慢性哮喘大鼠BSMCs的迁移最远距离是对照组的(2．9±0．1)倍,在ERK1／2激动剂表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)刺激下增加到(5．0±0．2)倍,而在30μmol／L PD98059的作用后下降到(1．7±0．2)倍。正常对照大鼠BSMCs平面迁移能力对PD98059的反应较慢性哮喘组弱,仅在100μmol／L PD98059的作用下下降到(0．8±0．1)倍。跨膜迁移实验中,慢性哮喘大鼠BSMCs的跨膜迁移细胞是对照组的(1．9±0．1)倍,在EGF刺激下增加到(3．1±0．2)倍,而在30μmol/L PD98059作用后下降到(1.45±0.2)倍。这些结果表明慢性哮喘模型大鼠BSMCs的迁移能力明显增强,ERK1／2信号通路在该功能变化的调控中可能发挥了重要作用。

肺、支气管平滑肌瘤的外科治疗

目的观察肺、支气管平滑肌瘤不同的治疗方法及疗效。方法6例不同部位肺、支气管平滑肌瘤患者,5例行不同术式手术切除、1例行气管镜下切除。结果6例患者均完全切除肿瘤,临床症状消失,无复发。结论对于不同部位的肺、支气管平滑肌瘤应采取不同的诊断及治疗方式,均可取得良好疗效。

JAK/STAT3信号通路参与白细胞介素-17诱导的支气管平滑肌细胞增殖与迁移

【目的】探讨白介素-17(IL-17)促进支气管平滑肌细胞(BSMC)的增殖与迁移作用及JAK/STAT3相关信号通路在其中的作用机制。【方法】使用不同浓度IL-17处理BSMC不同时间,以确定最佳实验条件。随后使用MTT检测细胞活力,BrdU染色观察细胞增殖状态,并使用PI染色流式细胞仪检测细胞周期。进一步利用细胞迁移实验检测细胞迁移能力。使用Western blot实验检测IL-17处理后BSMC的JAK、p-JAK、STAT3、p-STAT3蛋白表达量。利用JAK/STAT3信号通路特异性阻断剂AG490来特异性阻断JAK/STAT3信号通路,检测阻断JAK/STAT3信号后IL-17对细胞增殖、迁移以及JAK/STAT3信号通路蛋白表达量的影响。【结果】IL-17可促进BSMC增殖(P <0.05),促进细胞周期进程(P <0.05)并使细胞迁移能力增强(P <0.05)。这一过程伴随着BSMC的JAK/STAT3信号通路的增强(P <0.05)。抑制JAK/STAT3信号通路缓解了IL-17对BSMC的促进增殖和迁移的作用(P <0.05)。【结论】JAK/STAT3信号通路参与了IL-17诱导的BSMC增殖与迁移作用,AG490对IL-17引起的BSMC JAK/STAT3信号通路的增强起到了抑制作用。

乙酰胆碱对豚鼠支气管平滑肌细胞膜钙、钾通道的影响

目的 从电生理角度探讨乙酰胆碱 (Ach)在哮喘发病中的作用 ,为哮喘发病机制及治疗寻找理论依据。方法 用膜片钳技术观察了钙钾离子通道特性变化。结果 (1 )静息跨膜电位差值降低。 (2 )钾通道开放时间常数的快慢成分下降到正常对照组的 30 1 7% ,1 9 1 7% ,开放概率下降到正常的 1 6 44%。 (3)钙通道开放时间延长到正常的 1 73倍 ,开放概率增加了 41 67%。结论 支气管平滑肌细胞的钙钾离子通道特性在炎性介质的作用下发生改变 ,是气道高反应性支气管痉挛的重要环节。

加减射麻止喘汤对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞生长周期的干预作用

目的探讨加减射麻止喘汤对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞(ASMC)生长周期的干预作用。方法以卵清蛋白(OVA)致敏并激发制造大鼠哮喘模型,提取ASMC进行细胞传代培养;高、中、低剂量的加减射麻止喘汤分别灌胃大鼠以制备含药血清,以含药血清、蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波醇-12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA),PKC抑制剂马来酰亚胺甲磺酸盐(Ro-31-8220)分别干预3～5代ASMC,空白组不予药物干预。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组ASMC增加、流式细胞术检测ASMC各周期分布。结果与空白组、PMA组相比,加减射麻止喘汤高、中、低剂量组的D值显著降低,加减射麻止喘汤高剂量组的G1期、G2/M期细胞百分比显著升高,S期细胞百分比显著降低(P<0.05);与Ro-31-8220组相比,加减射麻止喘汤高低剂量组的D值显著增加,加减射麻止喘汤高剂量组的G1期细胞百分比显著降低,S期细胞百分比显著升高(P<0.05)。结论加减射麻止喘汤可抑制哮喘大鼠ASMC的细胞增殖,从而影响气道重构。

中药川贝含药血清对支气管平滑肌细胞及血管内皮细胞生长因子的影响

目的观察中药川贝含药血清对支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖,管道形成及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法卵蛋白(OVA)复制哮喘小鼠模型,制备川贝含药血清。体外培养BSMC,随机分为空白血清组,低剂量组和高剂量组。检测BSMC增殖率,管道形成长度,VEGF及VEGF m RNA的表达。结果与空白血清组比较,低剂量组和高剂量组显著降低BSMC增殖,管道形成长度,VEGF和VEGF m RNA的表达(P<0.05)。结论中药川贝含药血清可抑制BSMC增殖,管道形成长度,其机制可能与其抑制VEGF的表达有关。

支气管平滑肌瘤1例

支气管平滑肌瘤极为少见肿瘤,我们遇一例患者报道如下。病例资料患者,女性,50岁。主因咳嗽、咳痰3个月于2014年12月2日第2次入院。住院号1429751。患者有类风湿性关节炎3年,3个月前因乳腺纤维瘤手术治疗。患者于3个月前无明显诱因出现咳嗽、咳痰,为黄痰,发热,体温达39℃,伴胸闷、憋气,在当地治疗无好转,去沧州市中西医结合医院查胸部CT报右下叶肺炎,于2014年11月10日住我院。

氯胺酮和γ-羟基丁酸钠对家兔支气管平滑肌腺苷酸环化酶和磷酸二酯酶活力的影响

目的 :研究氯胺酮和γ 羟基丁酸钠对支气管平滑肌腺苷酸环化酶 (AC)和磷酸二酯酶 (PDE)活力的影响。方法 :离体实验 ,分为对照组、氯胺酮组和γ 羟基丁酸钠组 ,每组 8只家兔。氯胺酮和γ 羟基丁酸钠的实验浓度分别为2 3× 10 -4 M和 3 0× 10 -3 M。结果 :氯胺酮和γ 羟基丁酸钠对AC活力无明显影响 ,但均可显著抑制PDE的活力。两组PDE活力分别为 2 42± 0 6 3U和 3 6 0± 0 87U ,与对照组 4 5 8± 0 42U相比 ,分别P <0 0 1和P <0 0 5。结论 :氯胺酮和γ 羟基丁酸钠均可减少支气管平滑肌中cAMP的降解 ,这可能是氯胺酮和γ 羟基丁酸钠在麻醉中使支气管平滑肌张力下降的原因之一。

马布特罗对豚鼠支气管平滑肌松弛作用和平喘作用的影响

目的 :观察马布特罗对豚鼠的平喘作用和离体豚鼠支气管平滑肌的松弛作用。方法 :用 2 %氯化乙酰胆碱和 0 .1 %组胺等容积混合液喷雾诱发哮喘 ,观察马布特罗 (0 .0 6～ 1mg·kg-1)平喘作用的半数有效量(ED50 )及对引喘潜伏期的影响。用离体豚鼠肺支气管灌流法观察马布特罗 (1 0 -9,1 0 -7,1 0 -3 kg·L-1)对组胺 1 0 -4kg·L-1引起肺支气管灌流量减少的影响。结果 :马布特罗对致痉剂诱发豚鼠哮喘有明显抑制作用 ,减少哮喘诱发抽搐动物数 ,其ED50 为 0 .2mg·kg-1及 95 %可信限为 0 .0 8～0 .49mg·kg-1;马布特罗可剂量依赖性对抗组胺减少肺支气管灌流量作用 ,并显著缩短组胺灌流达固定流量时间。结论 :马布特罗对药物致豚鼠哮喘具有明显平喘作用 ,此作用与其松弛支气管平滑肌作用有关。

露蜂房蛋白抑制大鼠支气管平滑肌细胞体外增殖的可能机制

目的观察露蜂房蛋白[NVP(1)]对大鼠支气管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法用原代细胞培养、MTT法、流式细胞术和免疫印迹法检测细胞增殖。结果6.4×10-3g/L的NVP(1)明显抑制支气管平滑肌细胞增殖,并且阻断在细胞周期的G1期(对照组G1期为64.6%,NVP(1)处理组为90.5%)。NVP(1)能增强细胞周期蛋白激酶抑制剂(P21)蛋白的表达,降低细胞周期蛋白激酶(cdk2)蛋白的表达。结论NVP(1)阻断支气管平滑肌细胞增殖于细胞周期的G1期。

激光针疗改善过敏性豚鼠支气管平滑肌功能的实验研究

本实验以呼吸道过敏豚鼠为实验模型 ,观察了激光针疗对支气管哮喘的作用。结果表明 ,激光针疗可降低过敏性豚鼠血液组胺量 ,并改善支气管平滑肌的收缩功能。提示此疗法可能通过经络系统 ,调节机体免疫功能 ,从而产生治疗效果。

吗啡对豚鼠支气管平滑肌Kv通道的影响

目的探讨吗啡对豚鼠支气管平滑肌(guinenpigbron-chialsmoothmuscle,GPBSM)Kv通道的影响。方法用全细胞膜片钳技术研究吗啡对急性分离GPBSMKv(电压依赖性延迟整流钾通道)活性的影响,用Westernblot和RT-PCR技术,通过图像分析系统和凝胶成像系统分析吗啡对体外培养GPBSM的Kv1·5mRNA及蛋白质表达的影响。结果吗啡能抑制急性分离GPBSM的Kv通道电流和抑制抑制培养GPBSMKv1·5mRNA及蛋白质的表达,吗啡受体阻断剂盐酸纳洛酮和PKC阻断剂Ro31-8220能明显阻止这种效应。结论吗啡收缩支气管平滑肌可能是活化支气管平滑肌细胞膜的PKC,从而抑制其cAMP介导的Kv通道电流活性,下调Kv1·5mRNA及蛋白质表达水平完成的。

TNF-α和IL-1β通过MAPK通路上调人支气管平滑肌细胞的缓激肽受体和内皮素受体

目的支气管平滑肌对气道收缩剂的高反应性是哮喘的主要病理表现,但这种现象背后的分子机制尚未明确。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的释放对气道高反应性的发生起重要作用。研究旨在考察促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β对缓激肽、内皮素-1和血栓素A2的G蛋白偶联受体(GPCR)在人支气管平滑肌细胞(HBSMCs)中mRNA水平的影响。方法将HBSMCs与炎性细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-13以及MAPK信号通路抑制剂共同培养后,检测缓激肽受体B1和B2、内皮素B受体、血栓素A2受体和β2肾上腺素受体mRNA水平的变化。结果 TNF-α增加了HBSMCs中缓激肽B1和B2受体的mRNA水平,IL-1β增加了HBSMCs中的内皮素B受体的mRNA水平。P38 MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125降低了TNF-α上调的缓激肽受体mRNA水平,MEK1/2抑制剂U0126和IκB激酶抑制剂TPCA-1消除了由IL-1β引起的内皮素B受体的mRNA水平增加。结论 TNF-α通过p38 MAPK和JNK信号通路在转录水平上调缓激肽B1和B2受体,IL-1β通过MEK1/2和下游NF-κB通路在转录水平上调HBSMCs中内皮素B受体。

三子养亲汤对哮喘小鼠支气管平滑肌细胞CysLTR1mRNA表达的影响

目的:观察三子养亲汤对哮喘小鼠支气管平滑肌细胞Cys LTR1mRNA表达的影响。方法:培养小鼠平滑肌细胞至3~5代,进行分组。空白组为正常小鼠平滑肌,试验组分别为三子养亲汤高、中、低剂量组,孟鲁司特钠组,哮喘模型组。哮喘模型组为造模成功的哮喘小鼠支气管平滑肌细胞,各药物组分别取不同药量灌胃下的小鼠支气管平滑肌细胞,药量分别为10.8 g/kg·d、5.4 g/kg·d、2.7 g/kg·d的三子养亲汤中药汤剂,孟鲁司特钠0.004 g/kg·d。以1∶9的比例配置含药血清及培养基,加入细胞培养液,空白组用常规培养基。培养结束后,取上清液,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR法)进行Cys LTR1mRNA的检测,每组均检测7孔。比较各组小鼠支气管平滑肌细胞Cys LTR1mRNA表达。结果:哮喘模型组Cys LTR1mRNA表达明显升高,中药高剂量组Cys LTR1mRNA表达下降显著,与哮喘模型组相比,具有显著的统计学差异(P<0.01),中药中剂量组、孟鲁司特组与哮喘模型组相比,具有统计学差异(P<0.05),"三子养亲汤"低剂量组与哮喘模型组相比,Cys LTR1mRNA表达下降不显著(P>0.05),无统计学差异。结论:Cys LTR1为哮喘的重要炎性通路,抑制Cys LTR1炎性通路是三子养亲汤的作用机制之一。

p38蛋白激酶抑制剂SB239063对TNF-α介导支气管平滑肌收缩性增强的影响

目的研究p38MAPK抑制剂SB239063对TNF-α介导的支气管平滑肌收缩性增强的影响。方法显微镜下分离C57/BL6小鼠的支气管,并随机分为空白对照组、TNF-α处理组、TNF-α+p38MAPK抑制剂处理组,培养24小时后,利用肌动描记技术检测5-羟色胺(5-HT)、乙酰胆碱(ACh)诱导的支气管平滑肌等长收缩张力,比较预测收缩张力最大值(Emax)、产生50%最大收缩张力激动剂有效浓度的负对数(pEC50)。结果空白对照组、TNF-α+SB239063处理组5-HT、ACh诱导Emax小于TNF-α组。TNF-α+SB239063处理组对ACh诱导的收缩反应的pEC50小于TNF-α组。空白对照组与TNF-α+SB239063处理组之间Emax无差别,pEC50无差别。结论 p38MAPK抑制剂可抑制TNF-α介导支气管平滑肌对5-羟色胺、乙酰胆碱的收缩性增强。

经支气管镜介入治疗支气管平滑肌瘤1例

患者,男性,30岁,因“反复咳嗽咳痰8月余,再发伴发热3天”于2017年6月14日入院。患者于8个月前无明显诱因下出现咳嗽,咳少量白痰,感胸部不适,右侧卧位时明显,曾到当地医院就诊,予抗感染治疗(具体不详),症状仍有,咳痰有所减少。3天前患者再次出现咳嗽、咳痰,伴有发热,来我院就诊,门诊查胸部CT示右肺下叶支气管开口软组织密度影伴右肺下叶阻塞性不张、阻塞性肺气肿,右肺炎性病变,右肺多发肺大疱,建议增强检查,门诊气管镜检查提示右肺中间段新生物(图1),为求进一步诊治收住入院。查体:体温36.5℃,心率86次/min,呼吸20次/min,血压131/84mmHg,神志清,精神软,气管居中,浅表淋巴结未触及肿大,唇不绀,颈静脉无怒张,右肺语颤减弱,右下肺叩诊偏浊,右下肺呼吸音低,右肺可闻及少许湿啰音,心律齐,无杂音,双下肢无水肿。

不同产地前胡对氧化应激后支气管平滑肌细胞增殖影响研究

目的:探讨H2O2氧化应激刺激后,前胡有效成分及不同产地前胡粗提物干预对支气管平滑肌细胞(HBSMSCs)增殖影响。方法:检测不同产地前胡药材中前胡甲素及乙素含量。利用CCK-8分别对前胡甲素、前胡乙素单体及不同产地前胡粗提物对H2O2诱导支气管平滑肌增殖的影响进行考察。结果:HBSMSCs用25μM H2O2作用24h后,白花前胡甲素在12.5、25、50μM浓度下对其增殖有较明显的抑制作用,且与空白对照0μM相比,差异有统计学意义。而白花前胡乙素抑制作用较弱,差异无统计学意义(P>0.05)。通过比较12个产地前胡提取物对于HBSMSCs增殖的抑制作用,发现来自浙江淳安、浙江临安昌化、浙江磐安和安徽宁国4个产地的抑制作用最佳。结论:道地产区浙江和安徽的前胡药材对于支气管平滑肌细胞增殖有较好的抑制作用,具有较好的消除气道炎症的效果。