丁三醇合成关键酶的筛选、酶学性质及体外催化

为了提高1,2,4-丁三醇的生物合成效率,利用分子模拟技术从数据库中筛选1,2,4丁三醇合成关键酶——α酮酸脱羧酶,并将所选目标酶的基因构建到质粒pGEX 6p 1中,转入大肠杆菌DH5α,使目标酶在宿主菌中成功表达。通过比较目标酶的酶活力大小,找到1个催化效率比现有报道中所使用的苯甲酰甲酸脱羧酶(MDLC)更高的脱羧酶——支链α酮酸脱羧酶(KDCA),利用镍柱亲和层析的方法,将KDCA纯化,并对其酶学性质进行研究,测得KDCA最适温度为30℃,最适pH为6.5,在20 mmol/L的底物条件下,利用纯KDCA催化木糖酸生产1,2,4丁三醇的产量是对照酶MDLC的1.93倍。这为1,2,4丁三醇的生物合成提供了高效的新酶源。