热量限制对大鼠血清支链氨基酸、芳香族氨基酸、甘氨酸水平的影响及意义

目的观察热量限制(CR)对大鼠血清支链氨基酸[缬氨酸(Val)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)]、芳香族氨基酸[酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)]及甘氨酸(Gly)水平的影响,并探讨其与胰岛素敏感性的关系。方法将20只雄性SD大鼠随机分为观察组和对照组各10只,对照组给予自由饮食,观察组限制热量摄入为对照组的60%。喂饲12周后称取两组体质量及附睾旁脂肪垫质量;行胰岛素耐量试验,绘制血糖值曲线并计算曲线下面积。采用液相色谱串联质谱法检测两组血清Val、Ile、Leu、Tyr、Phe及Gly。结果观察组体质量、附睾旁脂肪垫质量均低于对照组,P均<0.01。观察组血糖值曲线下面积为728.1±65.7,对照组为955.1±39.0,P<0.01。观察组血清Ile、Leu、Tyr水平均低于对照组,Gly水平高于对照组,P均<0.05。两组血清Val、Phe水平比较,P均>0.05。结论 CR可能通过升高大鼠血清Gly水平,降低Ile、Leu、Tyr水平而提高其胰岛素敏感性。

血清支链和芳香族氨基酸同位素稀释质谱检测法的建立和应用研究

目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC/MS/MS）同时测定血清五种支链和芳香族氨基酸（即缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸）的方法,分析其与糖尿病及心血管病危险因素的关系.方法 采用同位素标记被测物作内标,沉淀蛋白后LC/MS/MS分离检测,标准曲线定量;对不同水平血清样本进行五次重复分析,每次每种血清重复分析3份,以考察方法的精密度;测定血清样本添加不同浓度标准品的加样回收率.收集2010年10～12月111例健康志愿者空腹静脉血,离心分离血清,测定血清支链和芳香族氨基酸及传统危险因素指标水平,进行相关性分析.结果 五种氨基酸在该试验条件下分离良好,分析时间约4 min;测定不同血清水平的批内变异系数（CV）为1.56%（1.07%～2.02%）,总CV为2.03%（1.14%～3.01%）;多次试验的加样回收率范围为98.34%～103.25%.测定111例健康人血清支链和芳香族氨基酸水平与体重指数、空腹血糖、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇酯化速率、肌酐、尿酸、载脂蛋白CII和CIII以及超敏C反应蛋白显著正相关（t=0.000 02～0.046,P值均〈0.05）;与高密度脂蛋白胆固醇显著负相关（t=0.000 5～0.048,P值均〈0.05）.结论 该研究建立了简便精密的ID-LC/MS/MS测定血清支链和芳香族氨基酸的方法,有望在糖尿病和心血管病危险分析中发挥作用.

血清支链和芳香族氨基酸水平与颈动脉内膜中膜厚度的关系

目的最近基于代谢组学的研究发现，血清支链氨基酸（BCAA）和芳香族氨基酸（AAA）水平升高与肥胖以及胰岛素抵抗密切相关，是糖尿病发病的早期预测指标。由于血糖升高、胰岛素抵抗多伴随脂代谢异常，进而增加动脉粥样硬化性心血管疾病（CVD）的风险，因此BCAA和AAA与CVD的关系尚待证实。本研究拟通过测定老年体检人群的血清BCAA和AAA水平，分析其与颈动脉内膜中膜厚度（clMT）以及CVD传统危险因素指标的关系。方法采用横断面调查方法，收集老年体检人群472例，年龄70．07±6．58岁，男性272例，女性200例。对收集的老年体检人群进行问卷调查、体格检查和血液检查。颈动脉B型超声检测clMT，并作为评价亚临床动脉粥样硬化的指标。同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清5种BCAA和AAA（包括缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸），分析它们与clMT和传统危险因素的关系。结果472例老年体检人群血清5种氨基酸浓度均呈偏态和尖态分布，

同步荧光法对三种芳香族氨基酸的测定

建立同时测定混合体系中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的同步荧光分析方法。以波长差Δλ=70nm进行同步荧光扫描,色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的同步特征峰(以激发波长表示)分别位于280、228、206nm。酪氨酸和苯丙氨酸可直接由同步特征峰的信号强度进行定量;色氨酸的同步特征峰略受酪氨酸的弱峰影响,采用一阶导数处理后,即可消除干扰,实现定量分析;检出限分别为6.9×10-9、3.8×10-8、4.2×10-7mol/L。该方法无需预分离过程,用于啤酒及氨基酸注射液样品的测定,结果满意。

非衍生芳香族蛋白氨基酸对映体的毛细管电泳手性拆分

以羟丙基_α_环糊精为手性选择剂 ,对苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸3种非衍生芳香族蛋白氨基酸的毛细管电泳分离和对映体手性拆分进行了研究 ;结果表明 ,背景电解质的 pH值、手性选择剂的浓度和柱温对分离效果影响较大 ;经过一系列实验优化 ,在选定的条件下 ,3种未衍生氨基酸混合物 ,不仅达到了相互之间的完全分离 ,而且每种氨基酸对映体均达到了完全手性拆分。

高效液相色谱法快速测定血清中的芳香族氨基酸

采用高效液相色谱 紫外检测法分离测定了血清中的芳香族氨基酸。采用的色谱柱为WatersNova PakC18柱(4μm,150mm×3 9mmi d ),流动相为乙腈 水(体积比为6∶94,pH3 4)溶液,流速为1 0mL/min,检测波长为215nm。血清标本经5%(体积分数)高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液直接进样,10min内完成测定。探讨了流动相的pH及其有机相的比例、蛋白质沉淀剂以及检测波长等因素对分离度和灵敏度的影响。考察了其他10余种氨基酸、多巴胺类等物质对目标组分检测的干扰。该方法的日内、日间测定的相对标准偏差均小于5%,芳香族氨基酸测定的线性范围、检测限、回收率等均满足临床检验的要求。结果表明:该方法简便、快速、准确、可靠,适用于临床和科研工作。

同步导数荧光光谱法测定食品中3种芳香族氨基酸

提出了同步导数荧光光谱法同时测定食品中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的方法。试验表明:为排除干扰,色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的特征同步导数荧光波长宜选定279,224,256 nm,波长差Δλ为55,70,25 nm条件下进行同步扫描。3种芳香族氨基酸的浓度分别在一定范围内与其导数荧光强度呈线性关系,检出限(3s/k)分别为6.3×10^(-9),1.6×10^(-8),4.0×10^(-7)mol·L^(-1)。方法用于蜂蜜、羊奶粉和啤酒样品中3种芳香族氨基酸的测定,回收率在92.3%～103%之间。

7-羟基香豆素与三种芳香族氨基酸作用的荧光光谱研究

运用荧光光谱和紫外光谱研究7-羟基香豆素UBM分别与色氨酸Trp,酪氨酸Tyr和苯丙氨酸Phe三种芳香族氨基酸的相互作用。结果表明在模拟人体生理条件下,UMB能引起上述氨基酸发生荧光猝灭,最大猝灭波长依次为347,303和282nm,猝灭机制均为静态猝灭,相互之间均以摩尔比1:1形成了复合物,且得到两种温度下UMB与Trp,Tyr和Phe反应的表观平衡常数Kc分别为298.15K时2.993×106,7.858×104和1.186×103 L.mol-1,310.15K时2.702×104,1.063×105和8.352×103 L.mol-1。热力学函数变化表明UMB与以上三种氨基酸结合作用较强,其中UMB-Trp相互作用力是氢键或范德华力,UMB-Tyr和UMB-Phe相互作用主要以疏水作用为主,同时都可能存在偶极-偶极之间的相互作用。

支链氨基酸/芳香氨基酸(BCAA/AAA)值在病毒性肝炎的临床意义

目的探讨BCAA/AAA比值在病毒性肝炎各临床类型中的变化及其相关性,进一步分析其在肝性脑病发生机制中的作用.方法从1999年9月至2001年4月,总结病毒性肝炎患者154例,年龄32～68岁,平均(54.2±21.0)岁.男104例,女50例,男:女为2.1:1.其中急性肝炎22例,慢性肝炎65例,重型肝炎20例,肝硬化47例.按血清病原学检测,甲型11例,乙型106例,丙型1例,戊型8例,重叠感染16例,病原未明12例.肝硬化Child-Pugh分级为A、B及C.BCAA及AAA用液相色谱法测定,BCAA/AAA正常值为3.0～3.8.结果BCAA/AAA比值在急性肝炎基本正常,慢性肝炎轻度低于急性肝炎(P＞0.05);慢性肝炎重度显著低于慢性肝炎中度(P＜0.001);重型肝炎或肝硬化低于慢性肝炎重度(P＜0.05),各组相比,差异有显著性或非常显著性.在Child-Pugh分级中,BCAA/AAA比值C级＜B级＜A级,各组间相比,差异有非常显著性(P＜0.001或P＜0.02).在重型肝炎或肝硬化中,发生肝性脑病组的BCAA/AAA比值显著低于未发生肝性脑病组(P＜0.001);死亡组的BCAA/AAA比值显著低于存活组(P＜0.01或P＜0.005).结论BCAA/AAA值的测定,在一定程度上能反映肝脏受损情况.其比值越低,肝脏受损越严重,且容易出现肝性脑病.该值对于患者的预后判断也有一定的参考价值.

生物合成芳香族氨基酸及其衍生物的研究进展

现代生物化工主要以廉价可再生资源为底物生产高附加值的精细化学品、大宗化学品、药品及营养品。合成生物学研究是生物化工领域的重要发展方向和支撑体系之一,是在功能基因组学、计算生物学和系统生物学等基础上,将工程化理念应用在生物学中,定向创造新型生物产品和生物过程整体优化的新的研究方向。合成生物学发展十几年以来,创造出了很多强有力的工具被应用于微生物、植物及动物的研究。以微生物生产芳香族氨基酸及其衍生物为主要内容,系统的综述合成生物学在以微生物生产高附加值产物方面的研究进展。

人芳香族氨基酸脱羧酶基因的克隆及测序

【目的】用RT PCR法获得人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶 (AADC)基因全序列 ,并建立优化方法。【方法】从人嗜铬细胞瘤中提取组织总RNA ,自行设计引物 ,采用两步RT PCR法扩增出长约 15 5 0bp的基因片断 ,凝胶回收后与高效克隆PCR产物的新型载体T 载体连接 ,并转化入大肠杆菌 ,通过蓝白斑反应筛选出重组体 ,质粒提取后进行重组体的酶切鉴定及基因测序。【结果】BamHⅠ和HindⅢ酶切证实了目的基因同克隆载体进行了有效的连接 ,基因测序证实了所克隆的片断为人AADC基因。【结论】本实验通过对引物 ,Taq酶的选择及反应条件的优化 ,保证了扩增的有效性和特异性。新型的克隆载体明显提高了克隆效率。基因测序证实了AADC基因扩增的成功。本研究为AADC基因治疗帕金森病等多巴胺能缺乏疾病的研究打下了基础。

反相高效液相色谱法直接检测芳香族氨基酸

用反相高效液相色谱-变波长紫外检测法直接测定了芳香族氨基酸。流动相为磷酸盐缓冲溶液(pH6)和甲醇的混合溶液,其体积配比为7030,流速为0.6ml/min,变波长紫外检测,10min内完成。酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸的线性范围分别为50～500μg·mL-1、200～20000μg·mL-1、20～2000μg·mL-1,三者的检测限分别为10μg·mL-1、150μg·mL-1、5μg·mL-1。

芳香族氨基酸对运动性疲劳的影响

氨基酸与运动性疲劳的关系,已往文献仅涉及甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸及γ-氨基丁酸。近年来国外学者研究表明:长时间大强度运动使血浆内芳香族氨基酸(aromatic aminoacids,AAA)含量升高,支链氨基酸(branc-hed-chain amino acids,BCAA)含量下降,促进AAA转运入脑。

高效毛细管电泳法直接测定红豆杉悬浮培养细胞中游离芳香族氨基酸

建立了红豆杉悬浮培养细胞中游离芳香族氨基酸的高效毛细管电泳的分离直接紫外吸收测定方法。在优化的实验条件下 ,以间苯二酚为内标 ,未涂层融硅毛细管 (75 μmi.d .,总长 37cm ,有效分离长度 30cm)为分离通道 ,40mmol/L磷酸缓冲液 (pH10 .46 )为电泳介质 ,3sec(0 .5 psi)压力进样 ,15kV恒压电泳 ,2 0 0nm检测 ,在 9min内三种氨基酸得到分离测定。色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的线性范围分别为 2 .5 0～ 2 5 0 μmol/L(r =0 .996 2 ,RSD =2 .5 2 % )、1.2 5～ 2 5 0 μmol/L(r =0 .996 6 ,RSD =2 .12 % )和 2 .5 0～ 2 5 0 μmol/L(r=0 .9940 ,RSD =2 .93% ) ,苯丙氨酸回收率为 96 .8%± 1.37% ,酪氨酸回收率为 99.2 %± 3.0 4%。

米曲霉氨基酰化酶酶法拆分制备D型芳香族氨基酸

以DL-苯丙氨酸为起始原料,乙酸酐乙酰化后得到N-乙酰DL-苯丙氨酸,利用米曲霉氨基酰化酶立体结构专一催化水解N-酰基-L-氨基酸的酰胺键的特点,分别得到L-苯丙氨酸和N-乙酰D-苯丙氨酸.通过结晶法分离两者后,N-乙酰D-苯丙氨酸经6mol/LHCl水解得到D-苯丙氨酸.由此拆分DL-苯丙氨酸得到光学纯度分别为98%的L-苯丙氨酸(收率84.8%,以原料N-乙酰-DL-苯丙氨酸的0.5倍摩尔量为理论产率)和92.3%的D-苯丙氨酸(收率89.5%).

水溶液中几种芳香族氨基酸π-π自堆叠作用

利用精密的流动混合微量热法测定了298.15K时D/L-色氨酸、L-色氨酸、L-组氨酸和L-苯丙氨酸四种天然芳香族氨基酸水溶液的稀释焓,根据所建立的拟等步自堆叠作用的化学模型对实验数据进行了处理,计算得到模型参数KΔHm.该化学作用参数与McMillan-Mayer理论模型中的焓对作用系数具有高度一致性,即hxx=KΔHm.结合文献报道的结果,认为芳核π-π自堆叠作用在本质上是一种特殊的疏水-疏水作用,一般表现为吸热效应;取代基空间位阻、芳核以外部分的静电。

芳香族氨基酸对沼泽红假单胞菌合成CoQ_(10)的影响(英文)

CoQ10具有呼吸链电子传递者、抗氧化性、调控基因表达等多种生理生化功能，目前不仅用作药物也用作食品添加剂。微生物发酵法是当前生产CoQ10的主要方法。在细菌中．芳香族氨基酸和CoQ10的苯核环都是通过莽草酸途径合成；它们在生物体中各自的合成存在着相互调控作用。本试验通过在培养过程中添加芳香族氨基酸来考察了其对沼泽红假单胞菌J001合成CoQ10的影响。结果表明：当色氨酸添加量≥15mg／L时对CoQ10的合成具有强列的抑制作用；苯丙氨酸添加量≥50mg／L时对CoQ10的合成具有一定的抑制作用但当添加量≥75mg/L后对CoQ10的合成变为一定的促进作用；酪氨酸添加量为75～175mg/L时对CoQ10的合成具有一定的促进作用．但当添加量≥200mg／L后对CoQ10的合成变为一定的抑制作用。当添加苯丙氨酸100mg/L＋酪氨酸150mg/L时．CoQ10含量达最高（25．6±1．3mg CoQ10/g干细胞）．比不添加对照提高52．2％。以上结果说明：该菌株CoQ10的合成受到3种芳香族氨基酸的调控，3-脱氧-D-阿拉伯己酮糖-7-磷酸合成酶是同工酶系统并主要受色氨酸调控．无色氨酸培养基及在培养期间添加适量的苯丙氨酸与酪氨酸对该菌株合成CoQ10有利，

芳香族L-氨基酸脱羧酶缺乏症2例报告及文献复习

目的报道芳香族L-氨基酸脱羧酶缺乏症(AADCD)患儿的临床表现及基因特征。方法分析2例AADCD患儿的临床资料及基因结果,并复习相关文献。结果2例女性患儿,均为新生儿期起病,表现为喂养困难、运动发育落后、眼球震颤、痉挛发作。2例患儿均于1岁余行基因检测,发现DDC基因第13外显子的杂合突变c.1234C>T,例1来源于母亲,例2来源于父亲;同时例1和例2也均携带新的杂合突变c.170A>G(p.I57T)和c.179T>C(p.V60A),临床意义不明。结论2例AADCD患儿均有典型临床表现,早期基因检测识别确诊有助于改善预后。

耐力训练对长时间负荷芳香族氨基酸引起的运动性中枢疲劳的适应性影响

笔者通过对普通小学生男生和男游泳运动员进行90min踏车功量计上50％Vo2max的持续性定量负荷运动,观察血清中芳香族氨基酸和支链氨基酸水平的变化。结果表明:两组芳香族氨基酸/支链氨基酸和色氨酸/支链氨基酸的比值升高,提出存在运动性中枢疲劳的物质基础;同时,在色氨酸/支链氨基酸的比值上,专业游泳组显著低于学生组,可能与它们对支链氨基酸的依赖程度的差异有关。结论:长期耐力训练对缓解由于长时间运动的芳香族氨基酸变化所引起的运动性中枢疲劳有适应性变化。