支链氨基酸和胰岛素对大鼠骨骼肌细胞蛋白质代谢的分子调控机制研究

[目的]研究支链氨基酸(BCAA)对大鼠骨骼肌细胞蛋白质代谢的影响,探讨氨基酸转运载体在BCAA调控细胞蛋白质代谢途径中的作用机制。[方法]用缺失支链氨基酸(Leu-,Ile-,Val-)的无血清高糖型DMEM培养液培养L6肌管细胞,先后在培养基质中添加100 nmol·L-1雷帕霉素、支链氨基酸(Leu+,Ile+,Val+)和胎牛胰岛素,RT-PCR法检测细胞表面氨基酸转运载体LAT1、CD98和SNAT2以及氨基酸调控因子GCN2和ATF4 mRNA表达,并结合Western-blot法考察蛋白合成关键因子磷酸化S6K1蛋白表达量及蛋白降解关键因子MuRF1和MAFbx mRNA表达水平。[结果]BCAA依赖于m TOR途径显著促进磷酸化S6K1(Thr389)蛋白表达(P<0.05),此过程与提高LAT1和CD98的mRNA表达水平(P<0.05)有关。SNAT2在胰岛素参与下,其表达量显著增加(P<0.05),并依赖于m TOR途径;BCAA对GCN2和ATF4 mRNA水平没有产生显著影响,但能够依赖m TOR途径显著提高ATF4蛋白表达量(P<0.05);在没有胰岛素参与下,BCAA未能够引起MuRF1和MAFbx表达发生变化,但在胰岛素协同下,BCAA能够使MAFbx表达显著下降(P<0.05),但该抑制效应并不能被雷帕霉素所阻断;无胰岛素下MuRF1和MAFbx表达量显著高于胰岛素参与下的表达量(P<0.05)。[结论]BCAA不依赖胰岛素调控蛋白质合成代谢,通过细胞膜氨基酸转运受体(LAT1、CD98和SNAT2)介导,作用于m TOR途径发挥促进蛋白合成作用;胰岛素使BCAA的促蛋白合成作用更加明显;BCAA调控蛋白质分解代谢过程依赖胰岛素,与胰岛素协同抑制蛋白降解。

广东梅毒螺旋体临床株存在TP0265非同义单核苷酸多态性突变

目的比较广东地区梅毒螺旋体(Tp)临床株(GD1)与美国Nichols标准株和全球密螺旋体属的支链氨基酸转运系统Ⅱ载体蛋白(TP0265)的非同义单核苷酸多态性(nsSNPs)差异。方法将GD1在兔睾丸中进行连续传代培养并制备Tp菌悬液,提取GD1 DNA后经TP0574 qPCR定量检测GD1基因组浓度;采用TP0548对GD1 DNA进行PCR检测和基因分型;采用PCR检测对GD1 TP0265与美国Nichols标准株和全球密螺旋体属的nsSNPs进行多重序列比对分析。结果BioEdit多重序列比对证实TP0548为f亚型。与美国Nichols株比较,GD1 TP0265碱基发生G175A突变,从而导致TP0265蛋白第230位的脯氨酸(P)突变为亮氨酸(L)。比较全球密螺旋体属中的不同密螺旋体种,发现除美国Nichols、Dal-1和Nichols Houston外,其余均出现TP0265突变。结论GD1存在TP0265 nsSNPs突变,该突变涉及全球大范围、多种密螺旋体属。

小肽吸收机制研究进展

小肽作为蛋白质的消化产物,在氨基酸的消化、吸收和代谢中起着重要作用。小肽与游离氨基酸的吸收是两个相互独立的转运系统,与游离氨基酸相比,小肽具有吸收速度快、耗能低、不易饱和,且各种肽之间转运无竞争性与抑制性等特点。本文综述了小肽在单胃和反刍动物体内的转运机制的特点,介绍了小肽转运载体(Peptidestransporter)分子生物学特性和其转运肽的过程.分析了对小肽吸收的影响因素。