细胞培养实验中条件培养基相关问题探讨

目的:通过LX-2人肝星状细胞条件培养基(CM)对HepG2人肝癌细胞增殖活性的影响,探讨CM各影响因素在离体实验中的作用。方法:收集LX-2细胞第24小时、48小时、72小时条件培养基,设100%、50%、25%共3个浓度,并设1%DMEM组为对照,培养24小时、48小时、72小时;并将收集的第24小时条件培养基分装分别保存至4℃1周、-20℃1周、-80℃3个月、-20℃3个月,采用MTT法检测各组条件培养基对HepG2细胞增殖活性的影响。结果:①收集时间:第24小时、第48小时LX-2CM具有明显的促增殖作用(P<0.01);培养24小时后,各收集时间点的LX-2CM的促增殖作用为:第24小时>第48小时>第72小时(P<0.01);培养48小时后,第48小时>第72小时(P<0.01)。②添加浓度:培养24小时后,第24小时CM100%浓度、第24小时CM50%浓度、第24小时CM25%浓度、第48小时CM100%浓度均有明显的促增殖作用(P<0.01);第24小时CM各浓度比较,100%优于50%(P<0.05);第48小时CM各浓度,100%优于50%(P<0.05)、25%(P<0.01)。③多元线性回归分析,条件培养基收集时间与HepG2细胞增殖呈负相关,浓度与其呈正相关。④保存条件:-20℃1周CM优于-80℃3个月CM、-20℃3个月CM(P<0.01);-80℃3个月CM优于-20℃3个月CM(P<0.01)。结论:LX-2CM对HepG2细胞具有明显的促进增殖活性作用,其作用随着收集时间点延长、浓度减小,增殖效果逐渐降低;CM的保存条件对其作用效果有影响。