一种构建改形单域抗体的方法(英文)

为验证一种构建改形单域抗体的实用新方法 ,与以往方法不同的是 ,该方法不需要对抗体进行空间结构模拟 ,以确定人源抗体的FRs接受序列及在人源FRs接受序列中哪些氨基酸残基需要突变 ,并且该方法将抗体的改形与亲和力成熟于同一过程完成。利用该方法构建了改形抗CD2 8重链单域抗体。根据一种鼠源抗CD2 8重链单域抗体的氨基酸序列 ,于GenBank中查得两条与之最同源的人源抗体序列 ,利用其中一条的FRs作为改形抗体的主框架进行改形构建。将鼠源抗体的CDR区插入到人源FR区后 ,对人源FR区的一些氨基酸残基进行替换突变 ,替换的氨基酸残基数及替换原则主要是根据对查到的人源抗体序列、鼠源抗体序列 ,以及这些序列与Kabat分类中的种属序列进行的比较。为了增加改形抗体基因的多样性 ,对要被替换的氨基酸残基在基因合成中采用简并的方式 ,使要被替换的氨基酸残基和替换的氨基酸残基都有机会出现 ,二者出现的几率各为 5 0 %。同时 ,在将大小不同的合成核苷酸片段采用重叠PCR扩增以获得完整改形抗体基因时 ,采用高Mg2 + 浓度下和使用TaqDNA聚合酶 ,以进一步随机引入突变。利用重叠PCR产物构建了一个噬菌体抗体库 ,经过 3轮淘选后 ,获得了几个具有较高免疫学活性的改形抗体。对其中的两个抗体进行了进一步研究 ,将?