白细胞介素-17基因多态性与山西东南地区汉族人群2型糖尿病的相关性

目的 研究山西省东南地区汉族人群白细胞介素-17(IL-17)基因单核苷酸多态性及其与2型糖尿病(T2DM)的相关性。方法 收集健康对照组和T2DM组受试者基本信息及临床资料,提取全血DNA,采用聚合酶链反应-高温连接酶反应对IL-17基因4个位点(rs2275913、rs3819024、rs4711998和rs8193036)进行多态性检测。结果 两组IL-17基因4个SNP位点基因型和等位基因频率分布差异均无统计学意义(P> 0.05),在校正年龄、BMI、WC和血脂异常等因素后,两组研究对象在不同遗传模型下的基因型及等位基因频率分布差异亦无统计学意义(P> 0.05)。进一步分析显示,T2DM组rs2275913位点AA基因型FPG和HOMA-IR显著低于AG和GG基因型,三组间差异有统计学意义(P <0.05);而三组间BMI、FINS、HbA1c水平差异无统计学意义(P> 0.05)。此外,T2DM组rs3819024位点AA基因型WC、HOMA-IR显著高于GG基因型,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 IL-17基因rs2275913、rs3819024、rs4711998、rs8193036多态性与山西省东南地区汉族人群T2DM可能无关,IL-17 rs2275913位点AA基因型、rs3819024位点GG基因型分别与山西东南地区汉族T2DM患者FPG和HOMA-IR、WC和HOMA-IR相关,可能是IL-17影响糖代谢的潜在基因型。

老年舒张性心力衰竭合并肌少症患者可溶性生长刺激表达基因2蛋白、肌红蛋白、白细胞介素-6水平与心功能的相关性

目的 探讨老年舒张性心力衰竭(DHF)合并肌少症患者外周血可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、肌红蛋白(Myo)、白细胞介素-6(IL-6)水平与心功能的相关性。方法 将122例DHF患者根据有无肌少症分为DHF合并肌少症组60例和DHF组62例,另将健康体检者58例、单纯肌少症患者60例分别纳入对照组、单纯肌少症组,检测各组外周血sST2、Myo、IL-6水平和心功能指标[左室射血分数(LVEF)、心排血量(CO)、心率(HR)、每搏输出量(SV)和心脏指数(CI)]。采用Pearson相关分析法分析sST2、Myo、IL-6与各心功能指标的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析sST2、Myo、IL-6单独及联合诊断DHF合并肌少症的效能。结果 与对照组、单纯肌少症组相比,DHF组、DHF合并肌少症组sST2、Myo、IL-6水平和HR均升高,LVEF、CO、SV和CI均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与DHF组相比,DHF合并肌少症组sST2、Myo、IL-6水平和HR均升高,LVEF、CO、SV和CI均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。sST2、Myo、IL-6均分别与LVEF、CO、SV、CI呈负相关(P<0.001),均与HR呈正相关(P<0.001);sST2、Myo、IL-6、LVEF、SV是DHF合并肌少症的独立影响因素(P<0.05);sST2、Myo、IL-6联合诊断DHF合并肌少症的曲线下面积为0.936,诊断效能优于三者单独检测。结论 老年DHF合并肌少症患者外周血sST2、Myo、IL-6水平显著升高,且sST2、Myo、IL-6均与心功能指标显著相关,三者联合检测对DHF合并肌少症的诊断效能较高。

白细胞介素-2治疗肿瘤的研究进展

白细胞介素-2(IL-2)是最早发现且研究较为深入的细胞因子之一,通过与其受体相互作用发挥功能,激活多种信号转导通路,促进免疫细胞生长、活化与增殖;亦可促进其他细胞因子表达,具有显著的抗肿瘤作用。溶瘤病毒可靶向感染和裂解肿瘤细胞,IL-2武装的溶瘤病毒能够进一步增强机体的抗肿瘤免疫反应,提高抗肿瘤效果。为减少IL-2治疗产生的不良反应,可通过基因工程改造优化IL-2使其半衰期延长、毒性降低并提高抗肿瘤活性。本文就IL-2治疗肿瘤的研究进展做一综述,并重点阐述IL-2武装溶瘤病毒及改造优化的IL-2基因在肿瘤治疗中的作用。

NKX2-5基因多态性联合血清白细胞介素-6、正五聚蛋白3浓度对风湿性心脏病合并心房颤动患者的预测价值

目的探讨NKX2-5基因多态性联合血清白细胞介素(interleukin,IL)-6、正五聚蛋白3(pentraxin 3,PTX3)浓度对风湿性心脏病(rheumatic heart disease,RHD)合并心房颤动(atrial fibrillation,AF)患者的预测价值。方法选取成都医学院第三附属医院2017年1月至2020年12月收治的156例RHD患者作为研究对象,根据患者病程中是否出现AF,分为AF组(81例)和非AF组(75例)。对两组患者NKX2-5基因多态性及血清IL-6、PTX3浓度进行比较分析,采用Logistic回归分析对RHD患者并发AF的危险因素进行分析,并通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析各因素的预测能力。结果AF组患者NKX2-5基因rs251253位点AG型(37.0%vs.18.7%,χ^(2)=6.490,P=0.011)和AA型(11.1%vs.2.7%,χ^(2)=4.237,P=0.040)患者比例明显高于非AF组,差异有统计学意义;AF组患者A等位基因分布频率明显高于非AF组,差异有统计学意义(28.4%vs.13.3%,χ^(2)=14.513,P<0.001)。相对于非AF组患者,AF组患者血清IL-6和PTX3浓度明显升高,差异具有统计学意义[IL-6:(17.00±4.61)ng/L vs.(10.80±4.01)ng/L,t=8.931,P<0.01;PTX3:(2.50±0.67)mg/L vs.(1.23±0.46)mg/L,t=13.695,P<0.01]。二元Logistic回归分析提示,血清IL-6(OR=1.360,95%CI:1.189~1.555)和PTX3(OR=4.896,95%CI:2.237~10.716)浓度升高及NKX2-5基因rs251253位点突变(OR=12.777,95%CI:4.576~35.677)是RHD患者合并AF的独立危险因素。ROC分析结果提示IL-6、PTX3和NKX2-5基因多态性的曲线下面积分别为0.778、0.751和0.723,而三者联合预测概率的曲线下面积为0.902,相较于单个指标显著提升,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论采用CNKX2-5基因多态性联合血清IL-6、PTX3浓度可显著提升对RHD患者合并AF的预测价值,值得临床进一步推广。

藏猪白细胞介素-2基因的克隆及序列分析

将藏猪外周血淋巴细胞在伴刀豆球蛋白 A(Con A)的刺激下体外培养 70 h后 ,提取激活淋巴细胞总 RNA,应用RT- PCR技术扩增出藏猪淋巴细胞白细胞介素 - 2 c DNA (TPIL - 2 ) ,克隆到 p MD- T载体上并测序。测序结果显示 ,克隆的TPIL- 2 c DNA全长为 5 0 3个碱基 ,开放阅读框 (ORF)为 4 6 5个碱基 ,编码 15 4个氨基酸 ,分子量为 17.4 kd,等电点为 5 .38;疏水氨基酸 4 0 .3% ,亲水氨基酸 37.0 % ,碱性氨基酸 11% ,酸性氨基酸 11.7%。此 c DNA与报道猪的 IL - 2同源性为 10 0 % ,证实克隆到了藏猪白细胞介素 - 2基因 c DNA。

猪白细胞介素-2基因的克隆及其重组禽痘病毒载体的构建

采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2),RT-PCR产物进行T-A克隆并测序,获得了猪IL-2基因序列。将BamHⅠ酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamHⅠ酶切并去磷酸化的pSY538载体上,通过PCR、酶切和测序鉴定,筛选正向插入的重组质粒pSY538/pIL-2。NotⅠ酶切pSY538/pIL-2后,得到含有双启动子LP2和EP2的猪IL-2基因片段,将其亚克隆到含有LacZ基因的pSY681载体上,筛选正向插入的重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2。测序结果表明,克隆的豫南黑猪IL-2基因长482 bp,包含1个完整读码框(465 bp),与GenBank中其他5条猪IL-2基因核苷酸同源性为99.9%。重组质粒pSY681/pIL-2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。成功构建了重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2,为猪IL-2生物学功能的进一步研究和开发奠定基础。

猪白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达及其生物学活性测定

【目的】在大肠杆菌中表达猪白细胞介素-2(pIL2),并鉴定其生物学活性。【方法】以含猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增IL-2基因。将猪IL-2基因定向克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下表达融合蛋白GST-pIL2,并应用甲基噻唑基四唑(MTT)试验测定融合蛋白的生物学活性。【结果】以含有猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增出1条约420bp的带。所获重组质粒pGEX-pIL2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。SDS-PAGE电泳结果显示,可检测到相对分子质量约为42ku的GST-pIL2,Western-blot证实GST-pIL2能与兔抗猪IL-2单克隆抗体发生特异性反应。表达蛋白经薄层层析扫描分析,表达量约占菌体总蛋白的40%。MTT试验证实,表达产物经变性、复性后能极显著促进猪脾淋巴细胞增殖。【结论】猪IL-2基因在大肠杆菌中得到表达,表达的蛋白具有一定的生物学活性。

重型再生障碍性贫血患者异基因造血干细胞移植前后血清IL-2、TNF-α、sIL-2R水平变化及其与急性移植物抗宿主病的关系

目的 探讨重型再生障碍性贫血(SAA)患者异基因造血干细胞移植前后血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)水平变化及其与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系.方法 选取2020年5月~2022年6月在本院行异基因造血干细胞移植的78例SAA患者作为研究组,选取同期进行体检的72例健康者为对照组,比较两组血清IL-2、TNF-α、sIL-2R水平及研究组aGVHD的发生情况,并探讨其临床意义.结果 研究组移植前后血清IL-2、TNF-α及sIL-2R水平组内比较及其与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);研究组有32例患者发生aGVHD(aGVHD组),aGVHD组血清IL-2、TNF-α及sIL-2R水平明显高于无aGVHD组和对照组(P<0.05);单因素分析显示,aGVHD组与无aGVHD组的患者年龄、患者体重、患者文化程度、供受者性别、供受体亲缘关系、ABO血型比较,差异无统计学意义(P>0.05),IL-2、TNF-α、sIL-2R水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,IL-2、TNF-α、sIL-2R是aGVHD发生的危险因素(P<0.05).结论 SAA患者移植前后血清IL-2、TNF-α及sIL-2R水平无明显变化,但aGVHD患者血清IL-2、TNF-α及sIL-2R水平变化明显,临床中检测其水平有助于预测aGVHD的发生.

荣昌猪白细胞介素-2基因的原核表达

应用DNA重组技术,将克隆的荣昌猪白细胞介素-2基因亚克隆到PET-32a(+)表达载体上,构建重组表达载体。酶切鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21,用1 mM的HPTG诱导表达重组蛋白。RT-PCR方法检测表明白细胞介素-2基因得到了转录;对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳,发现在相对分子质量约37 Ku处有明显的蛋白质条带,而对照组无相应条带产生。最后用MTT法检测表达蛋白的生物学活性,表明所获得的重组蛋白具有较好的生物学活性,这为利用该蛋白及其基因研制高效抗病免疫制剂和基因工程疫苗奠定了良好的基础。

猪白细胞介素-2在甲醇酵母中的表达

将猪白细胞介素-2(pIL-2)的完整cDNA序列克隆到甲醇酵母(Pichiapastoris)表达载体pPIC3 5K中,在E.coli体系中鉴定得到阳性克隆子pPIC3 5K-IL2。将pPIC3 5K-IL2经SacI线性化后,转化入经LiC1致敏的P.PastorisGS115菌株中,得到的重组菌株经1%浓度甲醇诱导后,利用SDS-PAGE电泳,斑点杂交及去糖基化酶消化证实,在培养上清中获得了分泌型表达的猪白细胞介素-2(蛋白分子量约为20KD),其表达量可达到80mg/L。用CTLL-2细胞进行活性检测,生物学活性可达2×106IU/ml。对其表达情况进行时间梯度分析,确定第5天表达量达到最高点,为最佳诱导时间;分析连续4个批次的重组菌株表达情况,结果表明重组菌株在适当菌体浓度下连续培养均能稳定、高效的表达外源蛋白pIL-2。本实验为进一步大规模生产pIL-2提供了理论依据。

猪α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究

为了研究高效广谱的猪基因工程抗病毒制剂,作者采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将猪α干扰素(Porcine interferon alpha,PoIFN-α)与猪白细胞介素2(Porcine interleukin-2,PoIL-2)成熟肽基因连接,构建成PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因,并克隆入pGEM-T Easy载体,将PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体进行原核表达。通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rPoIFN-α-linker-PoIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白中的PoIFN-α在不同细胞系上对不同病毒增殖活性的抑制作用;分别采用MTT法和PoIL-2 ELISA试验方法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白中PoIL-2的生物学活性。结果表明成功构建并克隆PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中得到高效表达,表达的rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白相对分子质量约36.7 ku,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在细胞上具有与单一rPoIFN-α蛋白相近的抑制病毒增殖活性,其中在PK-15细胞上抗VSV的活性单位为1.891×104I U.mL-1,在Marc-145细胞上抑制高致病性PRRSV增殖的活性单位为905 U.mL-1;rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白具有与单一rPoIL-2蛋白对照相近的生物学活性,可明显促进CTLL-2细胞的增殖,并可与抗PoIL-2单抗发生特异性免疫反应。这表明rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白具有rPoIFN-α和rPoIL-2蛋白双重的生物学活性,为基因工程抗病毒制剂的开发以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征等病毒性疾病的预防和治疗等研究奠定了基础。

猪白细胞介素-6基因的原核表达及其活性研究

用DNA重组技术 ,将已克隆的猪IL - 6cDNA片段插入pGEX 1λT质粒 ,转化大肠杆菌 ,以BamHI和PstI酶切鉴定重组子 ,以IPTG诱导融合蛋白表达 ,并作RT PCR及SDS PAGE分析表达情况 ,从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收融合蛋白 ,用MTT法测定重组蛋白刺激小鼠脾淋巴母细胞增殖反应的活性 ,并免疫家兔制备高免血清 ,得到高效表达猪IL 6的质粒pGPIL 6 ,RT PCR确证 pGPIL 6在大肠杆菌中能正确转录 ,经SDS PAGE分析表达蛋白分子量为 4 9kD ,融合蛋白具有较高的促小鼠淋巴细胞增殖反应活性 ,以此免疫家兔 ,可制备滴度为 1∶12 80 0

猪淋巴细胞白细胞介素-6(PIL-6)基因的克隆和序列分析

将猪外周血淋巴细胞进行体外培养 ,在ConA的刺激下培养 4 8h后 ,提取培养的淋巴细胞总RNA ,应用RT PCR扩增猪淋巴细胞白细胞介素 6基因 (PIL 6 ) ,并克隆到pUC18载体测序 .结果发现 ,PIL 6的cDNA长度为 74 1bp ,开放阅读框为 6 36bp ,编码 2 12个氨基酸 ,分子量2 4kD ,等电点 5 .5 ;其 4 6～ 12 9bp编码PIL 6的信号肽序列 ,130～ 6 81编码PIL

成华猪淋巴细胞白细胞介素-4基因的克隆及序列分析

将猪外周淋巴细胞进行体外培养 ,在伴刀豆球蛋白A(ConA)的刺激下培养 48h ,提取培养的淋巴细胞总RNA ,应用RT PCR扩增猪淋巴细胞白细胞介素 4(IL 4)基因 ,并克隆到pMD T载体测序。测序结果表明 ,IL 4基因的cDNA长度为 413bp ,开放阅读框为 40 2bp ,编码 13 4个氨基酸 ,分子量 15 .0ku ,等电点 8.2 4;与人和小鼠的IL 4基因编码的氨基酸序列的同源性分别为 60 %和 42 %。

鸡白细胞介素-2基因的克隆与酵母表达质粒的构建

从经ConA活化的4周龄岭南黄鸡脾脏淋巴细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT PCR)扩增出鸡白细胞介素 2(IL 2)cDNA片断.PCR产物克隆至pGEM TEasy载体,重组质粒命名为IL 2 T,经菌落PCR与限制酶切鉴定,然后测序,结果表明克隆片断长度为432bp,与预期大小一致,为鸡IL 2基因的编码区全长.将IL 2 T克隆重组质粒进行双酶切(ClaI与XbaI),回收IL 2片断插入同样酶切的毕赤酵母表达质粒pPICZα C,构建重组IL 2 C表达质粒,为鸡IL 2在毕赤酵母中的表达奠定基础.

鸡白细胞介素-2基因在Pichia methanolica酵母中的表达

鸡白细胞介素-2(chIL-2)是近年来新发现的一种禽类细胞因子.为建立用甲醇型酵母Pichiamethanolica(P.methanolica)表达鸡白细胞介素-2基因(chIL-2)的新途径,将chIL-2基因插入到P.methanolica分泌型表达载体pMETαA构建了重组PMAD11表达菌株(pMETαA/rchIL-2).经SDS-PAGE、Western印迹测定,证实chIL-2基因在P.methanolica中表达成功,rchIL-2的分子量约为16kDa,其表达量占分泌总蛋白的35%.

影响农杆菌介导白细胞介素-2基因转化番茄的因素研究

利用农杆菌介导法将白细胞介素-2基因(il-2)导入番茄中,对影响其转化的因素进行了分析。结果表明:农杆菌菌种(EHA105和C58C1)、外植体类型(子叶和下胚轴)、带有不同筛选标记(Kanr、PPTr、Hygr)的载体质粒几个因素对芽诱导分化及转化均有影响。实验共接种转化2018个子叶和下胚轴外植体,获得了47株抗性再生株,对其进行il-2的PCR扩增检测,有44株呈阳性。PCR-Southern杂交证实PCR结果可靠,显示il-2基因已导入到番茄中。

猪白细胞介素-12的分子克隆与序列测定

为研究白细胞介素－１２在机体免疫应答中的作用，从猪外周血提取单个核细胞（ＰＢＭＣｓ），用含ＬＰＳ的培养基培养细胞，从培养２ ｈ和１２ ｈ的活化细胞中分别提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出编码猪ＩＬ－１２两个亚基的基因，其大小分别为７２０ ｂｐ（Ｐ３５）和１ ０４４ ｂｐ（Ｐ４０），将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，回收纯化，用ＳａｃＩ和ＳａｌＩ双酶切后，分别将其连接至ｐＵＣ１８质粒上，进行质粒ＰＣＲ和ＳａｃＩ、ＳａｌＩ双酶切鉴定后筛选阳性克隆，并进行序列测定和分析。序列分析表明Ｐ３５基因开放阅读框含有６６９个核苷酸，序列与人、小鼠和羊同源性分别为７９．２％，３７．６％ ，８６．１％，Ｐ４０基因开放阅读框含有９７５个核苷酸，与人和小鼠、羊基因序列的同源性分别为７９．５％，５３．１％，８４．３％。结果表明克隆到了猪白细胞介素－１２ Ｐ３５和Ｐ４０两个亚基的基因，得到的Ｐ３５基因序列与国外报道完全一致，Ｐ４０基因序列与发表的序列有４个碱基差异，提示Ｐ４０基因可能存在多态性。

2型糖尿病与白细胞介素-10及其基因多态性的关系

糖尿病前期患病率约为24.5%〔1〕。同时糖尿病又可增加严重的老年性疾病风险,比如糖尿病能够增加卒中风险2~5倍〔2〕,而2型糖尿病(T2DM)患者血糖波动也可以增加动脉粥样硬化斑块风险〔3〕。T2DM发病机制尚未完全阐明,近年来研究认为T2DM可能是细胞因子介导的炎症反应,炎症在糖尿病的发病机制中起媒介作用。血浆中白细胞介素(IL)-10主要来自Th2细胞的分泌,它参与机体的慢性炎性反应。

猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究

用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经过变性溶解和复性后用酶联免疫吸附试验(ELISA)做定性定量检测。ELISA结果证实了所表达的蛋白为猪IL-6,复性后具有一定活性,并测出了复性后活性蛋白的浓度。