三维试验的改良及对鲍曼不动杆菌的产酶现状和耐药性分析

目的了解我院鲍曼不动杆菌产β-内酰胺酶的现状及对临床常用12种抗菌药物的耐药性。方法对我院临床感染标本分离的120株鲍曼不动杆菌使用Cefinase纸片法进行β-内酰胺酶初筛检测;采用改良三维试验大平皿法进行β-内酰胺酶分型;药敏试验采用琼脂平板倍比稀释法测定MIC,按CLSI/NCCLS标准进行。结果除亚胺培南外,120株鲍曼不动杆菌对其余11种抗菌药物的耐药率均超过50%。Cefinase纸片法检测到114株产β-内酰胺酶(95%),其中63株(55.24%)经改良三维试验大平皿法进行酶分型。在63株鲍曼不动杆菌中,单产碳青霉烯酶4株(3.51%)、产ESBLs15株(13.16%)、产AmpC酶5株(4.39%)及产耐酶抑制剂β-内酰胺酶(IRTs)18株(15.78%);同时产碳青霉烯酶和ESBLs的有5株(4.39%);产AmpC酶和ESBLs的分别有9株(7.89%),同时产碳青霉烯酶和IRTs的有7株(6.14%)。结论我院鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物耐药性较高,可能与产多型β-内酰胺酶有关。三维试验结果以产ESBLs最多且复杂,其次是IRTs。本研究建立的改良三维试验大平皿法能在同一平板上进行几种常见β-内酰胺酶的筛选分型,取得了很好的效果。

改良三维试验与PCR法检测川东北地区产“超-超广谱”β-内酰胺酶革兰阴性杆菌

目的:调查川东北地区临床分离革兰阴性杆菌的耐药情况,建立筛选产超-超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)细菌的实验室方法。方法:收集自2008年1月-2009年6月从川北医学院附属医院临床分离的革兰阴性杆菌237株,采用琼脂二倍稀释法测定14种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)值,筛选出对头孢西丁和头孢他啶耐药的革兰阴性杆菌,采用改良三维试验与质粒结合实验筛选产SSBLs菌株,运用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测SSBLs中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型与AmpC基因型。结果:237株革兰阴性菌对多种抗生素存在较高的耐药率。对头孢西丁与头孢他啶同时耐药的革兰阴性杆菌共105株,对这105株革兰阴性杆菌进行改良三维试验与质粒结合实验,筛选出产SSBLs菌株共2株,包括1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌,其质粒编码的ESBLs基因型为SHV、TEM、CTX-M,AmpC基因型为ACT。结论:川东北地区首次发现产SSBLs革兰阴性杆菌;改良三维试验与PCR法可以用于确证耐药菌是否产SSBLs。

1831株宋内志贺菌耐药性调查及其产ESBLs的研究

目的了解分离自腹泻患者的1831株宋内志贺菌的流行趋势及耐药情况,探讨宋内志贺菌多重耐药机制。方法采用志贺菌及沙门菌琼脂培养基培养及K-B法检测14种抗生素的耐药率。多重耐药菌用纸片确认试验检测产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs),改良三维试验检测ESBLs和AmpCβ内酰胺酶(AmpC β-lactamase,AmpC酶)。结果1831株宋内志贺菌感染腹泻患者中,男女比例为1.25∶1。高发季节为7～9月。1～20岁发病人数占总发病人数的71.0%。宋内志贺菌对复方磺胺甲噁唑、氨苄西林和头孢曲松的耐药率较高,分别达87.7%、23.0%和9.5%,且增高趋势明显;对氟喹诺酮类,头孢吡肟、头孢美唑、氯霉素、磷霉素和庆大霉素的耐药率较低,明显低于头孢曲松、头孢噻肟(P<0.05)。43株多重耐药菌均为ESBLs阳性株,未发现产AmpC酶株。结论在北京地区,宋内志贺菌感染腹泻患者发病年龄以青少年为主。其在志贺菌属感染的比例中有增高的趋势,对头孢曲松、头孢噻肟、复方磺胺甲噁唑、氨苄西林的耐药率较高且有上升趋势。宋内志贺菌耐头孢菌素者以产ESBLs为主。

铜绿假单胞菌临床感染分布特征及耐药性分析

目的了解川北地区铜绿假单胞菌医院感染分布特征及耐药情况。方法分离自川北医学院附属医院医院感染感染患者各标本的细菌,采用法国生物梅里埃(API)公司生产的Bio-Merieux VITEK-32全自动细菌鉴定系统对细菌进行鉴定,回顾性分析铜绿假单胞菌的临床分布特征,琼脂稀释法进行药物敏感试验,改良三维试验检测产AmpC和ESBLs菌株,结果用美国临床实验室标准化协会(CSLI)2006公布的标准判定。结果在分离鉴定得到的238株铜绿假单胞菌中,以痰液标本和重症监护病房为主,分别占60.5%和59.7%。238株铜绿假单胞菌对复方磺胺甲噁唑、头孢噻肟、哌拉西林、头孢曲松、替卡西林、替卡西林/克拉维酸、妥布霉素、头孢哌酮、庆大霉素耐药率高,达57.6%～95.6%,对其它10种抗菌药物的耐药率较低,在9%～34.8%之间。238株细菌中,检出产酶菌株69株,其中,单产AmpC、单产ESBLs、同产AmpC和ESBLs分别占15.1%,9.7%,4.2%。结论川北地区铜绿假单胞菌以引起危重患者的呼吸道和泌尿道感染为主,且β-内酰胺酶的检出率较高,多重耐药严重。

ICU脓毒症革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的产酶率和耐药性

目的:调查重症监护中心(ICU)脓毒症(Sepsis)患者的革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的产酶率和耐药性。方法:收集本单位2003年1月至2004年10月重症监护中心113例Sepsis住院患者的下呼吸道分泌物,做细菌培养,采用Vitek32系统鉴定菌种和Kirby-Bauer法进行药敏试验,以及通过超声波裂解法制备酶粗提物和改良三维试验检测产ESBLs菌株。结果:共203株非重复革兰氏阴性杆菌,位于前四位依次是嗜麦芽窄食单胞菌23．6％(48株)、铜绿假单胞菌22．2％(45株)、肺炎克雷伯氏菌15．3％(31株)、鲍曼士不动杆菌 12．8％(26株)。ESBLs总检出率51．7％,其中鲍曼氏不动杆菌检出率最高(80．8％),其它依次为:大肠埃希氏菌(66．7％)、肺炎克雷伯氏菌(64．5％)、嗜麦芽窄食单胞菌(41．7％)和铜绿假单胞菌(33．3%),其他菌株 (50．0％)。产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株对常用8种抗生素的耐药率比不产ESBLs菌株高,呈多重耐药。结论:引起脓毒症重症患者革兰阴性杆菌中,非发酵菌占大多数,非发酵菌的ESBLs产酶率高,产ESBLs菌株对常用抗生素的耐药率比不产ESBLs菌株高,呈多重耐药,应加强产ESBLs菌的监测。

山东地区产CMY-2型β-内酰胺酶鸡源大肠杆菌的出现及相关特性研究

从山东省不同地区分离到126株鸡源大肠杆菌,利用PCR对CMY-2基因进行检测,其中15株呈CMY-2阳性;核苷酸序列分析结果表明,除JN10外,其余序列与GenBank中已发表的CMY-2序列完全相同;采用K-B法检测15株大肠杆菌对抗生素的敏感性,结果发现,菌株均耐头孢噻吩、头孢唑啉、头孢克洛、头孢克肟、氨苄西林、链霉素、四环素、氯霉素和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑,其中3株(JN5、JN9和HZ9)耐头孢曲松和头孢他啶,但所有菌株对头孢吡肟敏感;改良三维试验证实,15株大肠杆菌均产AmpCβ-内酰胺酶,其中4株同时产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs);接合试验表明,携带CMY-2基因的质粒能在大肠杆菌间传递;脉冲场凝胶电泳(PFGE)排除了所有菌株来源于同一大肠杆菌克隆的可能性。本研究为探讨和解决细菌耐药性问题提供了重要的理论依据和研究基础,同时对了解山东地区大肠杆菌的耐药状况和耐药性散播情况提供了重要的信息。

三种常用检测肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶方法的分析与研究

目的评估三种检测产ESBLs肺炎克雷伯菌株常用方法的可靠性。方法选取2014年9月至2016年12月从收集三家医院PICU住院患儿深部痰液、血液、胸腹腔积液、创面分泌物等标本,排除同一患者同一部位重复分离的标本,分离非重复肺炎克雷伯菌207株。分别采用双纸片法、改良三维试验和自动仪器VITEK 2Compact,对分离菌株进行ESBLs检测。检测结果采用SPSS19.0软件进行统计和分析,两种方法之间不一致部分采用McNemarχ~2检验,用Kappa检验两种检测结果之间是否有一致性,P<0.05为差异有统计学意义。结果双纸片法、自动仪器法和改良三维试验ESBLs检出率分别是58.5%(121/207)、61.4%(127/207)和66.7%(138/207)。对三种方法检测结果进行两两间一致性检验,提示一致性较好(K>0.4,P<0.05))。双纸片法与自动仪器法检测结果中不一致部分之间的差异无统计学意义(P>0.05);改良三维试验与双纸片法检测结果中不一致部分之间的差异有统计学意义(P<0.05),改良三维试验的检出率高于双纸片法;改良三维试验与自动仪器法检测结果中不一致部分之间的差异有统计学意义(P<0.05),改良三维试验的检出率高于自动仪器法。结论纸片法和自动仪器法具有操作快速简便、结果可靠的特点,适合于临床微生物实验室常规开展检测ESBLs;改良三维试验可扩大ESBLs产酶菌株的检测范围,对表型试验起到重要补充作用。

张家口地区木糖氧化无色杆菌耐药性的相关基因分析

目的：了解张家口地区木糖氧化无色杆菌耐药性的相关基因的基因型别,为临床合理使用抗生素提供实验依据。方法：应用改良三维试验法筛选耐β-内酰胺类药物的菌株,再结合PCR技术和序列测定检测耐药菌ESBLs和AmpC酶的基因型别,最后进行统计学分析。结果：2010年12月~2011年12月本地区临床分离的48株木糖无色杆菌菌株中有32株对β-内酰胺类药物耐药,检出率高达66.7%,其中14株单产ESBLs,5株单产AmpC酶,9株同时产ESBLs和AmpC酶,4株为未知型菌株;筛选出的耐药菌中有24株PCR结果阳性,分属于不同耐药基因型并发现存在多重耐药基因。ESBLs以TEM型检出率最高,均为TEM-1亚型;AmpC酶检出率也较高,均为DHA-1型;多重耐药基因TEM＋CTX-M-1＋AmpC检出率最高。结论：张家口地区木糖氧化无色杆菌的耐药现象严重,临床上应严格掌握头抱菌素类药物的使用以取得更好的治疗效果。