改良保存液处理红细胞对糖尿病小鼠创面愈合的影响

目的研究改良处理红细胞回输对糖尿病小鼠伤口愈合的影响,并探讨其可能的作用机制。方法建立糖尿病小鼠模型,随机分为献血组和实验组。采集献血组小鼠血液,分别用标准和改良保存液保存,在7、14、21和28 d检测红细胞(RBC)携氧能力及变形能力。在实验组小鼠背部制作伤口愈合模型,并将保存7 d的血液回输给实验组小鼠,再分为标准组及改良组,每组6只,在0、1、4、7和14 d观察小鼠伤口愈合情况,第14天处死小鼠,取创面皮肤组织进行HE、Masson染色,免疫组化方法对伤口组织的纤维化程度进行分析,Western blot检测伤口组织PI3K/AKT、MEK/ERK及其磷酸化蛋白水平。结果与标准组比较,改良组游离血红蛋白(fHb)含量降低,而P50、pH、2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)和红细胞变形性(RCD)升高(P<0.05);改良组创面面积显著减小、皮肤组织和血管面积增加、胶原纤维的表达和纤维化程度升高(P<0.05)。小鼠伤口组织中HIF-1α、VEGF和EGF浓度水平增加(P<0.05)。PI3K/AKT、MEK/ERK表达增加,PI3K/AKT和MEK/ERK磷酸化显著增强(P<0.05)。结论改良保存液处理的红细胞可能通过激活HIF-1α信号通路促进糖尿病小鼠的伤口愈合。

改良保存液处理自体血对糖尿病小鼠伤口成纤维细胞的影响

目的评价经改良保存液处理的自体血对糖尿病小鼠伤口成纤维细胞的影响,并初步探讨其机制。方法诱导建立糖尿病模型小鼠40只,随机分为献血组和实验组,每组20只。实验组小鼠于伤口模型建立后,剔除死亡小鼠3只,将剩余小鼠随机分为标准组(n=6)、改良组(n=6)和供皮组(n=5),标准组和改良组于术后第1、2和3天分别回输在不同保存液中贮存7 d的自体血,用透明膜示踪法记录并计算伤口愈合面积百分比、RT-qPCR检测伤口组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA表达量。供皮组于伤后3 d收集创面和边缘的全层皮肤,将皮肤成纤维细胞分离培养后,随机分为四组:细胞标准组(S组)和标准+siRNA-HIF-1α组(S+siRNA组)、细胞改良组(M组)、改良+siRNA-HIF-1α组(M+siRNA组),在细胞灌流培养系统中使用不同方法保存的自体血灌注培养。细胞计数KIT-8(CCK-8)、EdU、Transwell、流式细胞仪评价成纤维细胞细胞存活、增殖和迁移能力及其细胞周期分布;Western blot测定各组成纤维细胞中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白相对含量。结果与标准组比较,改良组小鼠术后伤口愈合面积和HIF-1αmRNA相对表达量明显升高(P<0.05)。与S组比较,M组的细胞存活力增强,增殖细胞及迁移细胞数量明显升高,而S+siRNA组的细胞存活力减弱,增殖细胞及迁移细胞数量明显下降(P<0.05);与M组比较,M+siRNA组细胞存活力、增殖细胞及迁移细胞数量明显降低(P<0.05)。与S组比较,S+siRNA组HIF-1α、VEGF和MMP-2蛋白相对含量明显降低,而M组蛋白相对含量明显增高(P<0.05);与M组比较,M+siRNA组HIF-1α、VEGF和MMP-2蛋白相对含量明显降低(P<0.05)。结论改良处理自体血可增强糖尿病小鼠成纤维细胞的存活、增殖和迁移能力,可能参与伤口的愈合。