改良手工免疫组化方法和改良原位杂交方法的应用研究

目的探讨改良手工免疫组化染色和原位杂交方法的实用价值和推广意义。方法免疫组化:选取本院近期病例80例,每例分别进行常规手工和改良手工染色及全自动免疫组化仪染色,进行结果对比;原位杂交:选取本院近期原位杂交EBER阳性病例15例和HPV阳性病例18例,每例分别进行传统和改良手工原位杂交染色方法,并比较染色结果。改良手工染色方法为:省去一抗后的清洗步骤,直至显色前充分清洗。结果三种免疫组化染色方法均定位准确,无非特异性染色,待测目的组织与内对照的表达情况一致,复染清晰,染色评分无差异(P=0.985),但全自动免疫组化仪的染色背景更加干净。三种方法的脱片率分别为18.1%、17.8%和10.0%,传统手工和改良手工免疫组化方法之间脱片率差异无统计学意义(P=0.911),传统手工与全自动免疫组化仪染色方法之间、改良手工与全自动免疫组化仪染色方法之间脱片率差异有统计学意义(P=0.009,P=0.012)。传统手工方法和改良手工方法原位杂交染色的结果完全一致。结论免疫组化和原位杂交的改良手工染色法可以代替传统手工染色法。

全自动免疫组化与手工染色标记胸腺瘤TdT表达的对比观察

目的:对比观察胸腺瘤Td T在全自动免疫组织化学染色技术(automatic immunohistochemical staining techniques,AIST)和手工染色方法(manual staining method,MSM)中表达的差异性。方法:收集2015年-2016年大坪医院胸腺瘤手术标本21例,经石蜡包埋、切片、染色,显微镜下观察胸腺瘤Td T在AIST和MSM表达的差异。AIST采用Ventana公司生产的BenchM ark XT,二抗检测系统分别采用UltraV iew Universal DAB Detection kit(简称UV)和Optiview DAB IHC Detection kit(简称OV)。结果:手工染色TdT阳性表达定位准确,染色强度强,背景清晰;AIST中采用UV二抗检测系统TdT染色虽然阳性定位准确,但TdT染色强度偏弱,背景不清晰,两者比较具有显著性差异(P<0.01)。优化染色方案后,改用OV二抗检测系统,TdT染色各项指标优于UV二抗检测系统,染色效果和手工相比,染色强度和阳性率一致。结论:任何抗体指标在行免疫组化前均需进行最适条件的摸索与优化,从而获得该抗体指标最佳的染色方案。

加味圣愈汤对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响

目的:研究加味圣愈汤对脑外伤大鼠海马结构神经细胞凋亡的影响,探讨其抑制创伤性脑损伤后继发性脑损伤的作用机制。方法:采用改良的Feeney法建立脑外伤模型,将动物随机分为假手术组、脑外伤组、加味圣愈汤治疗组。72h处死后行尼氏染色,光镜下观察损伤侧海马细胞形态并计数,分别用凋亡细胞原位末端标记(TUNEL)法和免疫组织化学法观察海马神经细胞凋亡及凋亡相关基因caspase-3的蛋白表达情况。结果:加味圣愈汤治疗组与脑外伤组比较,损伤侧海马神经细胞损害减轻,细胞数明显增加,神经细胞凋亡减少,caspase-3表达减少(P<0.01)。结论:加味圣愈汤治疗可减轻脑外伤后的继发性损伤,其机制可能与抑制caspase-3的表达,减少TBI后神经细胞的凋亡有关。