改良碱变性法抽提冷冻山羊肝脏组织线粒体DNA

通过实验建立了一种简便、快捷地从冷冻山羊肝脏组织中制备高质量线粒体DNA(mtDNA)的方法.以差速离心法分离线粒体,用碱性SDS法裂解线粒体膜,释放线粒体DNA后用酚/氯仿抽提.与其他方法相比较,该方法具有对组织新鲜度要求不高,快速、简便、经济、产品产量高以及稳定性好等特点,其得率和纯度均能满足mtDNA多样性分析的要求.

6种食用香辛料基因组DNA提取方法比较

采用TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法、TIANGEN DNAsecure新型植物基因组DNA提取试剂盒法、QIAGEN DNeasy plant kit法、Nucleospin®Food kit法、改良十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)法和十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)-CTAB法6种方法对来自植物根、茎、叶、花蕾、果实及种子的19种常见食用香辛料的DNA进行提取,并比较各方法的提取效果。结果表明,QIAGEN DNeasy plant kit法和TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法所得DNA的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增成功率最高,但QIAGEN DNeasy plant kit法提取的DNA质量浓度低,不利于后续研究。本研究建议将TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法作为食用香辛料基因组DNA提取的优选方法,并用该方法进行市售香辛料粉的DNA提取。结果显示,所有市售香辛料粉的DNA质量浓度、纯度及PCR扩增效率均符合实验要求。表明TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法适合食用香辛料DNA提取,而对于皮类及坚硬的食用香辛料应增加样品量及裂解时间。

8种肉类线粒体DNA的提取及貂源性成分PCR检测方法的建立

目的研究肉类线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的提取方法,对8种生肉中貂源性成分进行检测,建立生肉中貂源性成分PCR检测方法.方法应用改良SDS碱变性法和盐析法提取肉类mtDNA,设计貂肉细胞色素b(cytochromeb,cytb)特异性引物,应用PCR对8种生肉中貂源性成分进行鉴别.结果两种方法提取肉类mtDNA的浓度和纯度均能保证PCR要求,改良SDS碱变性法提取的貂DNA样品纯度和产率较高;貂引物可以从8种生肉中鉴别出貂源性成分;经过多次重复试验证明了貂肉引物的特异性.结论该方法快速简便,为肉制品质量监控提供了实验基础.

中药全蝎快速鉴定方法的开发与应用

目的构建一种能够可视化快速鉴定中药全蝎及其伪混品的方法。方法应用改良十二烷基硫酸钠碱变性(SDS)法提取基因组DNA。选取细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计全蝎特异性引物,进行标记。优化聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系,克隆制备全蝎阳性质控品作为对照。构建PCR产物检测试纸条,鉴定市售样品的真伪。结果只有正品中药全蝎在286 bp处扩增出特异性条带,且试纸条的检测结果为阳性,检测灵敏度达到1.0×10^(-2)ng·μL^(-1)。20个全蝎市售样品中18个正品样品,2个不合格样品。结论建立的中药全蝎可视化试纸条检测的方法特异、灵敏、稳定、简单、快速,为中药全蝎的真伪鉴定提供了安全可行的方法。

哈蟆油药材基因组DNA提取方法的比较

目的：建立一种适合于哈蟆油药材基因组DNA的提取方法,为该药材的后续分子鉴定奠定基础。方法：采用十二烷基硫酸钠（SDS）法,改良SDS法,Chelex-100法,异硫酸氰胍（Gu SCN）法,试剂盒法及改良试剂盒法提取哈蟆油基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及细胞色素C氧化酶Ⅰ（COⅠ）序列的引物聚合酶链式反应（PCR）扩增对DNA产量及质量进行检测。结果：Chelex-100法,改良SDS法,Gu SCN法及改良试剂盒法均能从哈蟆油药材中提取得到基因组DNA,SDS法和试剂盒法提取不到。其中改良SDS法得到的DNA质量良好,得率高,但操作繁琐;改良试剂盒方法得到的DNA质量较好,但得率低,成本高;Chelex-100法操作简单快速、得率高,但得到的DNA质量较差;Gu SCN法提取的DNA含有较多杂质,会抑制PCR反应。结论：Chelex-100法、改良SDS法及改良试剂盒法均可得到满足PCR扩增要求的DNA,实践中可根据条件选择适宜方法来提取哈蟆油基因组DNA。