抗人血小板／T细胞活化抗原1（PTA1）不同表位单克隆抗体的制备及鉴定

目的 研制一套可识别PTA1分子不同功能性表位的单克隆抗体（mAb)。方法 采用亲和层析法从血小板裂解液中纯化的天然PTA1分子免疫Balb/c小鼠，以间接ELISA筛选阳性杂交瘤，并以PTA1 cDNA转染COS7细胞，进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性。竞争结合试验确定mAb识别PTA1分子的表位。纯化的PTA1经SDS－PAGE后，转移到PVDF膜，确定mAb是否可用于Western blot。结果 共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株，分别命名为FMU1，FMU2，FMU3，FMU4，FMU5，FMU6和FMU7。所有mAb与纯化天然PTA1和PTA1／Ig融合蛋白均有良好的免疫反应性，均可识别PTA1 cDNA转染的COS7细胞。流式细胞仪检测阳性荧光峰型与PTA1阳性对照Leo A1 mAb的荧光峰型相似；7株mAb识别PTA1分子的5个不同表位；FMU1，FMU2，FMU4，FMU5，FMU6和FMU7可应用于Westernblot。结论 成功地制备7株抗PTA1分子的特异性mAb。这些mAb可分别识别PTA1的5个表位，为PTA1分子结构与功能的研究提供了新的手段。

国际各类品种血小板膜糖蛋白单克隆抗体试剂对血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术的影响

本研究按国际输血学会第14届国际血小板免疫学研讨会和合作研究项目的要求,分析比较国际常用血小板膜糖蛋白单克隆抗体(McAb)各类品种对血小板抗原McAb特异性免疫固定检测技术(MAIPA)检测血小板抗体结果的影响。向参加该研究的30个实验室发放10份含已知血小板抗体特异性的血清和1份阴性对照血清样本,以及9份不同类别(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠa/Ⅱa、GPⅠb/Ⅸ及GPⅣ)及克隆编号的血小板膜糖蛋白McAb和统一的实验研究技术方案,各参加实验室按方案进行检测并反馈结果数据,比较同一糖蛋白种类不同的McAb对MAIPA检测结果的影响。结果表明:GPⅡb/Ⅲa中AP2,Gi-5,PL2-73等几种McAb的平均S/CO值较高;GPⅠa/Ⅱa的McAb中MBC202.2和143.1的平均S/CO值较高;GPⅠb/Ⅸ的McAb中142.11和CLB-MB45(CD42b)的平均S/CO值较高;GPⅣ的McAb中131.4的平均S/CO值较高。结论不同的McAb品种对样本的检测结果存在差异,McAb对MAIPA的灵敏度有重要影响。用MAIPA法检测血小板抗体时应同时使用相同糖蛋白种类而不同克隆号的McAb,以防止血小板抗体的漏检。

改良抗原捕获ELISA在血小板抗体检测及配型中的应用

目的探讨改良抗原捕获ELISA(MACE)在血小板抗体检测及配型中的应用。方法采用MACE分别检测青岛地区医院送检48例血小板输注无效(PTR)患者血清中的血小板同种抗体和32例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血浆中的血小板自身抗体,并为PTR患者进行血小板配型。结果PTR患者血小板同种抗体检出率为50%(24/48),其中同种HPA抗体阳性率为29.2%(14/48),同种HLA抗体阳性率为39.6%(19/48),抗-HLA占所有免疫性抗体的70.4%(19/24)。ITP患者血浆游离抗体检出率62.5%,其中抗体阳性者全部检出自身抗体,而且全部有抗自身HPA抗体。选择配合性血小板52个治疗量输注,输注后24小时CCI值为(11.35±2.78)×109/L,总有效率82.3%。结论MACE法可以常规应用于PTR患者的血小板抗体检测及配型;MACE法检测血浆中游离的血小板自身抗体可做为辅助诊断ITP的一种方法。

血小板特异性抗体检测对免疫性血小板减少症的鉴别诊断价值分析

分析免疫性血小板减少症(ITP)经血小板特异性抗体测定辅助病变诊断以及病情鉴定价值。方法 应用血小板抗原单克隆抗体固相化检测(MAIPA)测定ITP组50例、系统性红斑狼疮者(SLE组)34例、类风湿性关节炎(RA组)42例、健康体检(对照组)54例者GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/ⅠX抗体情况,分析荧光强度、阳性情况及诊断效能。结果 ITP组、RA组GPⅡb/Ⅲa抗体荧光强度高于GPⅠb/ⅠX抗体,SLE组GPⅠb/ⅠX抗体荧光强度高于GPⅡb/Ⅲa(P<0.05);GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/ⅠX抗体测定联合手段,测定敏感度以及阴性预测值,数值分别是91.56%、66.41%,相对比单一指标存在差异(P<0.05)。结论 ITP的临床诊断方式,对于患者进行血小板抗体GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/ⅠX的联合测定方式,对于诊断病变准确度高,指导早期合理干预,应用价值突出。

改良间接MAIPA法对免疫性与非免疫性血小板减少的鉴别诊断价值

目的:检测慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患者及非免疫性血小板减少症患者的抗血小板特异性抗体,评价其诊断价值。方法:建立单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术并加以改进(改良MAIPA法)借以检测CITP患者、慢性再生障碍性贫血(CAA)患者、肿瘤化疗后血小板减少患者抗血小板GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ的特异性抗体。结果:CITP组血小板糖GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ抗体的总阳性率高于CAA组和肿瘤化疗组,且差异有统计学意义(χ2=15.56,P<0.01和χ2=13.02,P<0.01)。结论:在CITP患者中血小板特异性抗体有较高的特异性,具有较高诊断价值,且2种抗体的功效相同。

辣根过氧化物酶标记不同表型鼠疫F1单克隆抗体的效果观察

目的观察用辣根过氧化物酶(HRP)标记4种鼠疫F1抗体的效果。方法使用过碘酸钠改良法制备酶结合物,酶标抗体的效价和最适工作浓度用双抗体夹心法测定。结果3株鼠疫F1单克隆抗体中B12标记成功;鼠疫γ球蛋白标记效果较鼠疫F1单克隆抗体B12差。结论过碘酸钠改良法制备辣根过氧化物酶标记鼠疫F1单克隆抗体B12效果优于另外3种鼠疫F1抗体。

血小板抗体检测的方法学研究

目的用单克隆抗体特异性血小板抗原固定术(MAIPA)之改良抗原捕获ELISA(MACE)和微柱凝胶免疫分析技术(MGIA)检测血小板抗体,并对两种方法的结果进行比较,为临床提供有价值的参数。方法选择15例特发性血小板减少性紫癜患者(ITP组)及40例健康献血员(对照组),以流式细胞术(FCM)作为参比方法,采用MACE法和MGIA法检测血小板抗体。结果3种方法检测的结果差异无显著性(P>0.05)。结论MACE法特异性比MGIA高,并能区分出血小板抗体类型(HLA或HPA),但MGIA操作时间短,具有简便、快速、易于标准化的优点,适合于初筛试验。

慢性ITP患者血小板膜表面GPⅣ、GPⅤ特异性自身抗体的测定

目的 :检测慢性ITP患者血小板膜表面GPⅣ、GPⅤ特异性自身抗体。方法 :应用改良直接MAIPA(单克隆抗体俘获血小板抗原技术 )检测血小板膜糖蛋白 (GPⅣ、GPⅤ )特异性自身抗体。结果 :慢性ITP患者血小板洗脱液中GPIV特异性和GPV特异性自身抗体的阳性率分别为 6. 3%和 4. 8%。结论 :血小板膜GPⅣ、GPⅤ分子是慢性ITP自身抗体的靶抗原 ,但多与GPⅡb

常用血小板抗体检测方法的临床应用比较

目的选用国内外常用的单克隆抗体固相血小板抗体技术(MASPAT)、抗原捕获酶联免疫吸附技术(MACE)、固相红细胞黏附技术(SPRCA)和微柱凝胶技术(MGIA)检测血小板抗体,对4种方法的结果进行比较研究,为临床开展血小板抗体检测提供有价值的参考。方法选择80例输注血小板达3次及3次以上者和15例正常献血员(对照组),以MASPAT法为参比方法,使用MACE、SPRCA和MGIA检测标本血小板抗体。结果 MACE法、SPRCA法与MASPAT法结果差异无统计学意义(P>0.05),MGIA与MASPAT法结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MACE与SPRCA法敏感度与特异度均高于MGIA法,而SPRCA法较MACE法实验时间短,不需特殊仪器,且能进行血小板交叉配合实验,适于临床广泛应用。

两种血小板抗体检测方法的比较

血小板抗体可以引起多种临床疾病或症状，如同种或自身免疫性血小板减少症、输血后紫癜、血小板输注无效等。目前，血小板抗体的检测方法，已报道的有多种，如血小板免疫荧光试验、固相红细胞粘附试验（SPRCA）、单克隆抗体特异性血小板抗原固定术（MAIPA）、改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验（MACE）等。笔者以流式细胞术法作为参考方法，

改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术的简化及其临床意义

原发免疫性血小板减少症（hnmune thrombocytopenic purpura，ITP）患者体内存在的抗血小板自身抗体与自身血小板结合后介导其在单核巨噬细胞系统中被吞噬破坏，使得循环血小板数下降，导致全身广泛皮肤黏膜、甚至内脏出血。目前该病仍为排除性诊断。既往血小板相关免疫球蛋白的检测因为缺乏特异性，已经基本上没有临床鉴别诊断价值。

血小板相关抗体IgG初筛不能提高单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术的敏感性

目的评价血小板相关抗体 IgG(PAIgG)初筛能否提高单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术(MAIPA)对免疫性血小板减少性紫癜(ITP)诊断的敏感性。方法用酶联免疫吸附竞争法检测 PAIgG,改良 MMPA 技术检测抗血小板 GPⅡb/Ⅲa、GP Ⅰ b/Ⅸ特异性抗体;260例血小板减少症患者同时行 PAIgG 及 MAIPA 检测。

中药联合小剂量利妥昔单抗注射液治疗老年慢性免疫性血小板减少症临床观察

目的观察中药联合小剂量利妥昔单抗注射液治疗老年慢性免疫性血小板减少症(ITP)的临床疗效。方法 108例老年ITP患者,根据血小板计数分为治疗组和对照组,治疗组56例,给予口服中药及小剂量利妥昔单抗注射液;对照组52例,仅给予小剂量利妥昔单抗注射液。1个月为1个疗程,连续治疗6个疗程。观察2组疗效。结果治疗组总有效率82.14%,对照组71.15%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组疗效优于对照组。结论中药治疗老年慢性ITP有良好的疗效,无明显不良反应。

二价阳离子络合剂的抗凝剂对改良MAIPA法检测ITP血小板特异性自身抗体的影响

目的：探讨二价阳离子络合剂的抗凝剂在改良单克隆抗体俘获血小板抗原（ MAIPA）法检测免疫性血小板减少症（ITP）患者血小板特异性自身抗体的影响。方法随机选取2012年1月至2014年1月 ITP 患者159例，采用改良 MAIPA 法分别检测络合二价阳离子（EDTA-K2）及肝素钠抗凝的 ITP 患者血浆，比较两者检出率。结果 EDTA 作为抗凝剂检出阳性88例（55.35％），肝素作为抗凝剂检出104例（65.41％），两者比较差异未见统计学意义（χ2＝3.35，P ﹥0.05）；抗 GPⅡb/Ⅲa 抗体检出情况：使用 EDTA 作为抗凝剂检出阳性46例（28.93％），肝素作为抗凝剂检出91例（57.23％），两者比较差异有统计学意义（χ2＝8.99，P ﹤0.05）。结论双重抗凝剂检测可提高抗 GPⅡb/Ⅲa 抗体的检出率。

简单实用的特异性抗原检测用于血小板抗体试验

背景 目前用于鉴定血小板（PLT）自身和同种抗体反应的特异性抗原测定法对大多常规实验室来说太复杂，不实用。本文介绍一新的类似红细胞的特异性抗原微粒检测（ASPA）。研究设计与方法溶解血小板，然后同包被有针对不同血小板糖蛋白复合物的单克隆抗体（MoAbs）的红染聚苯乙烯微粒孵育。

HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗体MAIPA定量检测方法的建立

目的分别建立针对人类血小板抗原(HPA)-1a、HPA-3a、HPA-5b 3种抗体的定量血小板(PLT)抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测(MAIPA)方法。方法采用MAIPA方法检测不同浓度的标准或参比HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗血清,优化实验条件,在检测范围内绘制线性曲线,并分别分析其敏感性、特异性、准确性和精密度。结果针对HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b 3种抗体的MAIPA定量检测方法得到了优化,检测范围分别为0~4 IU、0~20 AU、0~20 AU,准确性(回收率)分别为96.20%~103.10%、97.90%~103.10%、100.20%~106.10%。批内精密度[变异系数(CV)]分别为1.3%~3.6%、2.7%~5.2%和4.7%~5.3%,批间精密度(CV)分别为4.0%~5.6%、4.4%~5.9%和3.2%~6.3%,检测人源抗体抗A、抗B、抗I、抗P均无明显阳性,具有良好的特异性。结论建立的针对HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗体的MAIPA定量检测体系均具有较高的敏感度、特异度、准确度和精密度,对于临床相关疾病的诊断和PLT安全输注具有重要的应用价值。

自身免疫性血小板减少性紫癜相关抗体的研究

目的 探索对自身免疫性血小板减少性紫癜 (AITP)诊断特异和敏感的实验方法。方法 采用单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术 (MAIPA技术 )并加以改进 ,对比检测血小板洗脱液和血浆中血小板膜糖蛋白特异性抗体。结果 AITP患者血浆游离抗血小板膜糖蛋白 (GPⅡb Ⅲa、GPⅠb Ⅸ )抗体总阳性率为 38.89%(5 4例中 2 1例 ) ,洗脱血小板表面抗血小板膜糖蛋白 (GPⅡb Ⅲa、GPⅠb Ⅸ )抗体总阳性率为 6 8.5 2 %(5 4例中 37例 ) ,两者差异有显著性 (校正 χ2 =19.39,P <0 .0 0 5 )。原发AITP组血浆游离及洗脱血小板表面抗血小板糖蛋白 (GPⅡb Ⅲa、GPⅠb Ⅸ )特异性抗体总阳性率与继发性AITP组比较差异无显著性。AITP患者血小板数量与自身抗体滴度呈明显负相关。结论 MAIPA法检测血小板洗脱液中抗血小板糖蛋白抗体在AITP的诊断和治疗中具有高度特异性 ,且敏感性较血浆抗体检测显著提高。

分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞及血小板特异性抗体检测在特发性血小板减少性紫癜诊断中的意义

目的 检测特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者及非免疫性血小板减少患者分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞、血小板特异性抗体的变化,评价其对诊断ITP及非免疫性血小板减少疾病的作用及临床意义.方法 应用酶联免疫斑点技术（ELISPOT）及改良血小板抗原单克隆抗体固相化检测技术（MAIPA）分别检测58例ITP患者、33例非免疫性血小板减少患者及31名正常对照者分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞频数、血小板特异性抗体（抗GPⅡb/Ⅲa抗体）表达的变化.结果 ITP患者分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞频数[（6.6±4.2）/105个外周血单个核细胞（PBMNC）]明显高于非免疫性血小板减少患者[（2.2±2.0）/105个PBMNC]（P＜0.05）及正常对照组[（1.3±0.5）/105个PBMNC]（P＜0.05）,而分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞频数在非免疫性血小板减少患者及正常对照组间的差异无统计学意义（P＞0.05）.通过ELISPOT法检测分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞对ITP诊断的敏感性为70.69%,特异性为90.91%,高于改良MAIPA法的敏感性（χ^2=7.03,P＜0.05）.根据ROC曲线,ELISPOT区分ITP患者和非免疫性血小板减少患者的鉴别效度为0.886.结论 通过检测分泌GPⅡ/bⅢa抗体B细胞及血小板特异性抗体能够较好地反映ITP的发病机制.应用ELISPOT方法检测ITP患者分泌GPⅡb/Ⅲa抗体B细胞具有较高敏感性及特异性,可提高ITP的实验窒诊断水平,对指导治疗有一定的临床意义.