猪MyoG基因的PCR-RFLP分型及其与生长性能和肌纤维数目的相关性分析

对33头申农号猪MyoG基因进行PCR-RFLP分型,结果发现3种基因型(MM,MN和NN)。M基因频率为51.5%,N基因频率为48.5%。对不同基因型猪初生重和断奶重分析发现,NN型猪初生重显著高于其他基因型猪(P<0.05),但断奶重差异不显著。根据不同基因型共屠宰12头申农号猪,取半腱肌、半膜肌和股二头肌做冰冻切片,HE染色,并计算肌纤维数目,结果表明,不同基因型猪间半腱肌和半膜肌肌纤维密度差异显著(P<0.05),其中NN型肌纤维密度高于其他基因型。

应用PCR/RFLP对辽宁、吉林地区恙虫病东方体分离株的基因型分析

目的 鉴定辽宁、吉林地区恙虫病东方体分离株的基因型。方法 采用 PCR/ RFL P技术对辽宁、吉林地区恙虫病东方体分离株的 sta5 6目的基因进行分析研究 ,并与国际参考株进行比较。结果 辽宁、吉林地区 6株分离株的 PCR特异性产物经 Hinf 、Hha 、Rsa 酶切后呈现 2种不同的 RFL P图谱 :HCAa92 0 2株、HCAp92 0 3株及 HCM95 0 1株与 Gilliam参考株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏 Hinf 的酶切位点 ;KDCt940 2株、KDCp940 3株及 KDCt940 4株与 Karp参考株具有相同的酶切图谱。结论 KDCt940 2株、KDCp940 3株及 KDCt940 4株属于 Karp型 ;HCAa92 0 2株、HCAp92 0 3株及 HCM95 0 1株属于 Gilliam型 ,但基因序列可能存在遗传差异。

应用PCR/RFLP对山东地区恙虫病东方体的基因型分析

目的 鉴定山东地区恙虫病东方体的基因型。方法 采用聚合酶链反应 /限制性片段长度多态性分析 (PCR/RFLP)技术对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病病人全血中提取的DNASta5 6基因进行分析研究 ,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果 山东地区 35份标本 ( 2 3株恙虫病东方体山东分离株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及 10份恙虫病人全血 )提取的DNA群引物扩增产物经HinfⅠ、HhaⅠ、SnaBⅠ酶切后呈现 2种不同的RFLP图谱 ,经与已知序列的Ot内切酶图谱相比 :33份Ot内切酶图谱与文献报告的日本地方株—Kawasaki株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HhaⅠ的酶切位点 ;另 2份与Karp参考株具有相同的酶切图谱。该结果与NestedPCR基因分型的结果相一致。结论 山东地区恙虫病东方体流行株主要基因型与日本地方株Kawasaki型类似 ,但与日本地方株存在遗传差异 ;同时还有Karp型Ot存在。采用PCR/RFLP方法可以准确对Ot-Sta5 6基因分型。

应用PCR和RFLP连锁分析对甲型血友病进行产前诊断

应用ＰＣＲ和ＲＦＬＰ连锁分析对甲型血友病进行产前诊断刘炜培张羽虹张履明周润甜（广东省佛山市第一人民医院，佛山５２８０００）甲型血友病是一种常见的伴性遗传病，是由于凝血因子Ⅷ（ＦⅧ）基因发生突变而导致凝血障碍。本病在男性中发生率约为１／５０００。目前对...

病毒分离和PCR-RFLP法对急性结膜炎标本中腺病毒感染及其型别的分析

目的 分析2 0 0 3年下半年收集的哈尔滨医科大学第一临床医学院急性结膜炎标本中的腺病毒( Adenovirus,Ad V)感染情况及其型别。方法 采集5 9例临床确诊为急性结膜炎患者的结膜拭子标本,在观察和分析接种细胞的病变( CPE)情况的基础上,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析( PCR- RFL P)法,特异性检测CPE阳性细胞中腺病毒核酸的存在情况,并对PCR阳性扩增产物进行病毒型别的分析。结果 70 .7% ( 4 1/5 9)的急性结膜炎标本接种于培养细胞后可以引起明显的CPE;其中,5 3.6 % ( 2 2 / 4 1)的CPE阳性标本可以扩增出腺病毒核酸,RFL P分析证实6 8.18% ( 15 / 2 2 )的腺病毒感染为Ad3型,31.82 % ( 7/ 2 2 )的腺病毒感染为Ad7。结论2 0 0 3年下半年哈尔滨市急性结膜炎主要以腺病毒3、7型感染为主。提示结合病毒分离培养和PCR- RFL P方法。

高黎贡山旱冬瓜Frankia的IGS PCR-RFLP分析

在云南省高黎贡山自然保护区海拔 1310～ 2 4 0 0m的范围内 ,采集 30个旱冬瓜根瘤样品 ,直接从根瘤中提取FrankiaDNA ,对其nifD nifK基因间隔区 (intergenicspacer,IGS)和 16S 2 3SrDNAIGS进行PCR RFLP分析 .结果表明 ,nifD nifKIGS的PCR产物长度差异很大 ,经HaeⅢ和AfaⅠ双酶切后 ,得到 15种酶切带型 ,检测到多种基因型的菌株同时与同一株宿主植物共生 ;16S 2 3SrDNAIGS的PCR产物长度相似 ,酶切后亦区分出 15种酶切带型 .通过对两个基因间隔区的PCR RFLP联合分析 ,发现高黎贡山旱冬瓜Frankia存在 2

枯萎病菌的PCR-RFLP分子检测和早期诊断

采用自行设计的、能对镰刀菌18srDNA进行特异性扩增的1对引物,利用PCR-RFLP对尖孢镰刀菌以不同方式侵染的植株进行跟踪检测。结果表明,应用PCR-RFLP检测程序可检测出处于侵染初期和潜育期的枯萎病菌,说明PCR-RFLP能够快速、灵敏、准确地对枯萎病进行早期诊断。

恙虫病东方体黑龙江分离株的PCR/RFLP分析

目的 鉴定恙虫病东方体黑龙江分离株的基因型。方法 采用PCR/RFLP技术对恙虫病东方体黑龙江分离株的sta5 6基因及其酶切图谱进行分析研究 ,并与国际参考株进行比较。结果 6株分离株的PCR特异性产物经HinfⅠ、HhaⅠ、RsaⅠ酶切后呈现 3种不同的RFLP图谱 ;MSAa930 1株、MSAa930 3株、MSAa930 4株及MSAp930 5株与Gilliam参考株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HinfⅠ的酶切位点 ,属于Gilliam型 ;MSAa930 6株与Karp参考株具有相同的酶切图谱 ,属于Karp型 ;MSAp930 2株与Kato参考株具有相同的酶切图谱 ,属于Kato型。 结论 黑龙江密山地区恙虫病东方体分离株存在Gilliam、Karp和Kato 3种型别。

用PCR/RFLP方法检测鼠蜱类中斑点热群立克次体的应用研究

目的:探讨PCR/RFLP方法在鼠蜱类中斑点热群立克次体分类学鉴定的意义。方法:利用福建省宁化县林区人群和野鼠中存在斑点热群立克次体(北亚热型、钮扣热型、小蛛型)感染的基础上,通过对蜱类媒介、宿主动物中的肝脏、脾脏等标本及林区人群血清,从中提取斑点热群立克次体DNA,制备PCR模板,用PCR/RFLP方法进行检测。结果:斑点热群立克次体存在着多种种间交叉较为普遍。结论:用PCR/RFLP方法可对鼠蜱类中斑点热群立克次体进行较准确的分离鉴定。

山东汉族TIM-1基因多态性与2型糖尿病肾脏病的相关性

目的探讨T细胞免疫球蛋白域和黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)基因多态性与山东汉族2型糖尿病肾病的相关性。方法采用病例-对照的方法,收集2型糖尿病肾病患者112例,正常对照组201例。采用改良的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测TIM-1基因的两个SNP位点:rs1039438和rs6878732,计算其基因型频率及等位基因频率并统计分析。结果 rs1039438位点的基因型频率与等位基因频率在对照组和2型糖尿病肾病组中有显著的统计学差异(P值分别为0.005和0.002),rs6878732位点的基因型频率与等位基因频率在两组间无统计学差异。结论 TIM-1基因与山东汉族人群2型糖尿病肾病的发病有明显相关性,rs1039438位点的G等位基因可以增加2型糖尿病肾病发病风险,而此位点的A等位基因则为保护因素。

聚合酶链式反应及限制性片段长度多态性技术检测乙型肝炎病毒P基因区YMDD基因序列变异

目的建立检测基因变异的聚合酶链反应(PCR)限制性片段长度多态性(Restrictionfragmentlengthpolymophism,RFLP)法。方法从服用拉米夫定1年以上的慢性乙肝病例中选取10例抽取血清,分别采用错配套式PCR-RFLP技术、PCR产物直接测序和重组克隆测序,检测P基因YMDD变异。结果在10个病例中,PCR-RFLP检测到7例为野毒株、1例为混合株感染、2例为变异株;PCR产物直接测序,9例为野株、1例为变异株;对2份用PCR-RFLP法检测为非野株,而PCR测序为阴性的标本采用克隆后测序,发现均为混合株感染。结论通过对几种检测方法的对比,认为克隆后测序的结果最精确;而从实用性和经济角度来看,采用PCR-RFLP进行初步筛检的方法具有更大的意义,值得推广。

靶向测序基因型检测(GBTS)技术及其应用

借助于分子标记进行基因型检测的技术在生物遗传改良等领域发挥着重要的作用。国际跨国种业公司凭借其高通量、自动化、大规模的共享检测平台,基因型检测技术得到广泛应用。随着从3G时代的高成本固相芯片和随机测序式基因型检测(genotyping by sequencing,GBS)发展到成本低、对检测平台要求较低、基于靶向测序基因型检测(genotyping by target sequencing,GBTS)的液相芯片,基因型检测技术完成了向4G时代的转变。在本文中首先介绍了两项最新的GBTS技术(基于多重PCR的GenoPlexs和基于液相探针捕获的GenoBaits)及其原理。同时,发展了可以在单个扩增子内检测多个SNP,称之为多聚单核苷酸多态性(multiple single-nucleotide-polymorphism cluster,mSNP或multiple dispersed nucleotide polymorphism,MNP)的技术,极大地提高了目标位点(扩增子)内变异的检测效率。与GBS和固相芯片相比,GBTS技术具有平台广适性、标记灵活性、检测高效性、信息可加性、支撑便捷性和应用广谱性。同一款标记集(例如玉米40K mSNP),可以获得3种不同的标记形式(40K mSNP、260K SNP和754K单倍型);并可以根据应用场景的需求,通过控制测序深度获得多种不同的标记密度(1-40K mSNP)。GenoPlexs和GenoBaits 2种技术相结合,可广泛应用于生物进化、遗传图谱构建、基因定位克隆、标记性状关联检测(全基因组关联分析——GWAS和混合样本分析——BSA)、后裔鉴定、基因渐渗、基因累加、品种权保护、品种质量监测、转基因成分/基因编辑/伴生生物检测等领域。目前,已经在20余种主要农作物、蔬菜以及部分动物和微生物中开发了GBTS标记50余套,并已广泛应用于上述领域。最后,展望了与未来GBTS应用相关的几个问题,包括便携式、自动化、高通量、智能化检测平台;根据用户需求定制的可变密度、多功能分子检测;GBTS与其他技术(KASP、高密度芯片、BSA策略等)的整合;基于资源共享的开源育种等。这些将推动GBTS技术在动物、植物和微生物遗传改良等领域的广泛应用。

猪脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因BsmI位点多态性与肌内脂肪含量的相关研究

本研究利用PCR-RFLPs标记技术,对中国地方猪种雅南猪、大河猪、培育品种大河乌猪以及三元杂交群体DLY共113头个体的脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因的内含子Ⅰ区域进行了分析研究,发现BsmΙ酶切位点具有多态性,并分为3种基因型(即AA、BB和AB型),通过构建固定效应模型,分析了基因型与肌内脂肪含量的关系。结果表明:基因型AA的肌内脂肪含量极显著的高于基因型AB和BB(P<0.01)。

深圳地区献血者Rh表型和基因型分布调查

目的 探讨 Rh阴性个体的分子基础。方法 对 1 999年 6月～ 2 0 0 2年 5月共 83 72 2名首次献血者 ,应用血清学方法检测样本 Rh表型 ,对部分 Rh阴性、弱 D表型的 RHD基因编码区全长进行序列分析 ,并应用限制性片段长度多态性( RFLP)技术或双管 PCR法分析 Rh D基因型。结果 中国人 Rh阴性率 ( IAT检测 )为 0 .3 % ;弱 D表型个体 (包括弱 D型、部分D型和其他弱 D形式 )概率约 0 .1‰ ;在 IAT确认的 Rh阴性者中 ,RHD基因检出率为 3 6.0 % ,D放散型 ( Del)占 2 4.3 %。 Del个体以 RHD1 2 2 7A等位基因为主 ,纯合子占 3 3 .3 % ( 9/2 7) ;表型为 CCee的 Del个体占 2 2 .2 % ( 6/2 7) ,均为纯合子。在真实 Rh D阴性个体 (吸收放散试验排除 Del个体 )中 ,RHD基因检出率为 1 5 .5 % ,以携带 RHD-CE( 2 -9) -D2 等位基因为主 (占真实 Rh D阴性个体的 1 1 .9% )。另外 ,在 IAT确认的 Rh阴性者中 ,如果排除无效基因携带者 ,E抗原的频率仅为 0 .0 1 8%。结论 中国人 Rh D阴性者的分子背景复杂 ,且与高加索人和非洲黑人存在较大差异 ,高频率的 Del表型个体和 RHD-CE( 2 -9) -D2 等位基因携带者是中国人群 Rh阴性个体分子背景的特点。

我国东北地区恙虫病东方体分离株基因型的研究

为了准确鉴定我国东北地区恙虫病东方体基因型 ,采用PCR ,PCR/RFLP及PCR/SSCP等技术对我国东北地区的恙虫病东方体Sta 5 6目的基因进行分析 ,并与国际参考株进行比较。结果表明 ,东北地区恙虫病东方体分离株至少存在 2种型别 ,但基因序列可能存在遗传差异。

脑梗死患者与其血浆同型半胱氨酸水平及MTHFR基因关系的研究

目的 探讨脑梗死(CI)患者与其血浆同型半胱氨酸(homocystine,HCY)水平及N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因的关系。方法 应用高效液相色谱仪和电化学检测法测定1998-02-2001-02收治的84例CI患者和78名正常老年人血浆总HCY水平,运用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测MTHFR基因多态性,同时测定血浆叶酸及维生素B12水平。 结果 CI患者血浆总HCY水平显著高于正常对照组;MTHFR基因型有3种,即纯合子(T/T)型、杂合子(T/C)型、纯合子(C/C)型。3组基因型和等位基因频率相比,差异均无显著性;CI组血浆叶酸及维生素B12水平明显低于正常对照组(P<0.05)。 结论高HCY血症可能是CI患者发病的一个新危险因素。

冠心病及2型糖尿病合并冠心病与对氧磷酯酶192Gln/Arg基因多态性的相关性研究

为探讨冠心病 (CHD)及 2型糖尿病 (DM )合并CHD与对氧磷酯酶 (PON1) 192Gln/Arg基因多态性的关系 ,采用多聚酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)法检测了 10 4例查体健康者 (对照组 )和 76例CHD、96例 2型DM合并CHD患者的PON1 192位点的多态基因型 ;同时测量其体重指数 (BMI) ,检测总胆固醇(TC)、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)、载脂蛋白AⅠ (ApoAⅠ )、载脂蛋白B(ApoB)。结果显示 ,PON1 192位点QQ、QR、RR基因型及Q、R等位基因频率在 2型DM合并CHD组与对照组比较均有显著性差异 (P <0 0 5、<0 0 1) ;但CHD组与对照组比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。中国人与白种人PON1 192位点基因型及等位基因频率比较有显著性差异 (P <0 0 1)。含R等位基因的基因型QR、RR是 2型DM合并CHD的独立危险因素。提示PON1 192Gln/Arg基因多态性与 2型DM合并CHD有相关性 。

载脂蛋白E基因多态性及其与Ⅳ型高脂血症的关系

目的 探讨载脂蛋白apoE的基因多态性,并寻求其多态性是否与Ⅳ型高脂血症有关联。方法 采用多聚酶链反应 限制性片段长度多态性(PCR RFLP)法,对2 0 6例Ⅳ型高脂血症患者(HTG组) ,2 5 0例正常对照者进行基因分型,同时用全自动生化仪测定其血脂和血apoE水平,最后对其作分组比较。结果 人群中存在有6种apoE基因型,分别为E2 / 2、E2 / 3、E3 / 3、E3 / 4、E2 / 4、E4/ 4。E2 / 2为91bp、83bp、61bp ;E3 / 3为91bp、61bp、48bp、3 5bp ;E4/ 4为72bp、61bp、48bp、3 5bp ;E2 / 3为91bp、83bp、61bp、48bp、3 5bp ;E2 / 4为91bp、83bp、72bp、61bp、48bp、3 5bp ;E3 / 4为91bp、72bp、61bp、48bp、3 5bp。E3 / 3型是人群中分布最多的一种基因型,HTG组与正常对照组均以E3 / 3基因型为主,其频率分别为72 .8%和65 .7%。ApoE的基因型和等位基因频率在Ⅳ型高脂血症患者和正常人之间存在差异,Ⅳ型高脂血症患者组等位基因ε2较正常对照组有所增高,分别为7.4%和16.4%(P <0 .0 1)。同时研究还表明携带有等位基因ε2的Ⅳ型高脂血症患者的血清TG(2 .5 8±1.98)、apoE(67.1±3 0 .1)水平较含有等位基因ε3、ε4者高(P <0 .0 1) ,血清LDLC(3 .11±0 .80 )水平则较其他两组低(P <0 .0 1) 。

父母亚甲基四氢叶酸脱氢酶基因型对后代发生先天性心脏病的影响

目的 探讨父母亚甲基四氢叶酸 (CMTHFD)基因型对后代发生先天性心脏病 (CHD)的影响。 方法 选择辽宁省 192例CHD患者的父母作为病例组 ,同一地区年龄、性别匹配的 12 4名正常人的父母作为对照组 ,采用PCR RFLP方法检测其MTHFDG195 8A位点基因多态性 ,比较 2组的基因型频率和等位基因频率 ,并计算 2组父母生育纯合突变后代的概率的比值。 结果 CHD父母基因型频率和等位基因频率与对照组相比差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;房间隔缺损母亲突变等位基因频率为 10 87% ,明显低于对照组 2 8 15 % (P <0 0 5 ) ,OR =0 31(95 %CI:0 0 9～ 0 84 ) ;房间隔缺损患者父母至少携带一个突变等位基因的比例为 4 3 4 8% ,亦明显低于对照组 6 9 6 4 % (P <0 0 5 ) ,OR =0 34(95 %CI:0 12～ 0 92 ) ;病例组和对照组父母可能生育的纯合突变胎儿占总胎儿数的比例分别为 5 17%和 7 0 4 % ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。 结论 亲代 (尤其是母亲 )MTHFDG195 8A位点基因突变可降低后代房间隔缺损的危险性。