研磨-CTAB法与碱性异硫氰酸胍沸腾法提取真菌DNA的比较分析

目的对两种病原真菌基因组DNA提取方法[研磨-CTAB(十六烷基三甲基溴化胺)法及碱性异硫氰酸胍沸腾法]的提取效果进行比较,为临床真菌标本的前期处理提供有效参考。方法对来自于同一批培养基的4株申克孢子丝菌及6株普通真菌菌株分别采用研磨-CTAB法及碱性异硫氰酸胍沸腾法抽提基因组DNA,并用紫外分光光度计测定基因组DNA样品OD260和OD280值,计算提取样品的浓度并估计核酸的纯度,然后采用配对资料t检验的统计学方法进行比较。结果碱性异硫氰酸胍沸腾法提取的DNA浓度及纯度均高于研磨-CTAB法,两者在统计学上存在显著差异(P<0·05)。结论碱性异硫氰酸胍沸腾法提取病原性真菌基因组DNA具有简便、快速、价廉等特点,适用于病原真菌分子生物学研究的标本前期处理。

2种大豆总RNA提取方法的改良

对大豆总RNA的提取方法T rizo l法和异硫氰酸胍法进行了改良,比较了改良前后2种方法的提取效果。结果表明,2种改良方法提取的大豆总RNA质量较高、完整性较好,完全可以满足后续研究要求,RNA产率均超过220μg/g。改良T rizo l法适用于大豆根、茎、叶及生长点总RNA的提取,而改良异硫氰酸胍法适用于大豆根、茎及生长点总RNA的提取。

药用植物白木香高质量总RNA提取方法的研究

目的:白木香次生代谢产物成分复杂,干扰其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或总RNA降解严重。为获得高质量的总RNA,本实验开展了白木香正常及结香组织采集及高质量总RNA提取方法的研究。方法:对从野外采集的白木香样品,用改良CTAB-LiCl法、去温浴的改良CTAB-LiCl法、SDS酸酚法、改良异硫氰酸胍-CTAB法和EASYspin RN09试剂盒5种方法分别对白木香叶、白木香枝条、白木香树干中的白木样品和结香样品进行RNA提取。结果:研究表明白木香枝条的离体样品室温保存5 h内不影响总RNA质量,确定EASYspin RN09试剂盒是白木香叶RNA的最佳提取方法,改良异硫氰酸胍-CTAB法是其他白木香组织RNA的最佳提取方法。结论:用改良异硫氰酸胍-CTAB法大量提取白木香树干中的白木样品及结香样品RNA,其28S∶18S为1.2～1.4,RIN值为6.8～7.5,并应用于转录组测序。

白菜花药组织总RNA提取方法比较及其分析

以白菜花药组织为试材,利用异硫氰酸胍法和改良Tris-硼酸法提取花药总RNA。结果显示两种方法提取RNA的产量都较高,异硫氰酸胍法提取纯度低,但省时高效,适用于对模板要求低的RNA提取。而改良Tris-硼酸法提取花药RNA的产量高、质量好、纯度高,适用于mRNA差异显示及基因表达的Northern印迹等的RNA提取。

魔芋叶片中4种总RNA提取方法的比较

本研究分别利用TRIzol法、异硫氰酸胍法、改良的CTAB法及试剂盒这4种方法提取魔芋叶片的总RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对各个提取效果进行鉴定。反复试验的结果表明:TRIzol法难以提取魔芋叶片总RNA,异硫氰酸胍法提取的总RNA浓度低、杂质较多且有部分降解,这两种方法不适宜用于魔芋叶片总RNA提取;试剂盒方法提取的总RNA产率和纯度较高,但稳定性差、成功率低且成本较高;改良的CTAB法利用PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,水饱和酚-氯仿去除蛋白质,醋酸钾去除多糖,该方法提取得到的总RNA的纯度较高,OD260/OD280值为1.893,而且效果稳定,有良好的可重复性。因此,我们认为改良的CTAB法是一种简便、快速且经济的提取魔芋叶片总RNA的方法。

油桐叶片和种仁总RNA提取方法

本研究测得油桐叶片和种仁总糖含量分别为75.20,32.80 mg/g,总酚含量分别为15.75,0.57 mg/g,在此基础上对TRIzol法、CTAB-LiCl法进行改良,分别提取出高质量的种仁、叶片总RNA,并与异硫氰酸胍法及NOGEN试剂盒法进行比较,结果表明:改良TRIzol法提取的油桐种仁总RNA OD260/OD280稳定在1.9～2.0,28S rRNA和18S rRNA条带清晰完整,RNA产率较高,改良CTAB-LiCl法得到的种仁总RNA有部分降解,异硫氰酸胍法则对小分子盐类去除不够充分,而试剂盒提取出的油桐种仁总RNA有少许降解且有DNA杂质污染。上述4种方法中只有改良CTAB-LiCl法能成功提取出质量较高的油桐叶片总RNA。因此,改良TRIzol法和改良CTAB-LiCl法可分别作为提取油桐种仁和叶片总RNA的首选方法。

羊踯躅花瓣总RNA提取方法的比较与改进

不同组织的RNA提取难点各异,适宜方法也不尽相同。分析、比较了热酸性酚抽提法、热硼酸法、异硫氰酸胍法和改良的异硫氰酸胍法从羊踯躅花瓣中提取总RNA的效果,经过多次反复实验发现采用改良的异硫氰酸胍法所得的总RNA质量好,纯度高,完整性很好,适用于cDNA文库的构建、Northern印迹与mRNA差异显示等后续研究工作。

枸杞叶片RNA提取方法优化

以"宁杞1号"枸杞叶片为试材,采用优化的CTAB法、异硫氰酸胍法、Trizol法以及SDS法提取叶片RNA,以期筛选出适合枸杞叶片的总RNA的提取方法。结果表明:常规方法不能提取到完整的RNA,且条带不清晰、杂质多。经优化后,异硫氰酸胍法较为理想,并且可以用于RT-PCR试验。

檀香心材总RNA提取方法的比较研究

为筛选檀香心材总RNA提取方法,对5种提取方法进行比较研究,包括Trizol法、改良CTAB法、SDS酸酚法、异硫氰酸胍-CTAB法、异硫氰酸胍-SDS法。结果表明,Trizol法和异硫氰酸胍-CTAB法不能提取出檀香心材总RNA,而SDS酸酚法、改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法均能提取檀香心材总RNA。SDS酸酚法的A260 nm/A230 nm小于2.0,且RNA产率低,仅为(27.94±1.06)μg g–1,不能满足后续实验要求。而改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法提取的总RNA带型清晰,完整性好,A260 nm/A280 nm为1.8~2.0,A260 nm/A230 nm大于2.0,RNA产率分别为(79.06±4.22)和(107.00±1.36)μg g–1。分别以改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法提取的总RNA为模板,通过RT-PCR反应,扩增檀香Actin基因片段,结果二者扩增产物大小相同且条带单一,说明改良CTAB法与异硫氰酸胍-SDS法为檀香心材总RNA提取的较好方法。

昆明小鼠不同组织RNA提取方法的比较

利用改良的异硫氰酸胍法、改良的SDS法和改良的TRlpure试剂盒法对昆明小鼠心脏、肝脏以及肾脏进行组织总RNA的提取,比较其提取效果,结果显示,试剂盒提取效果普遍明显优于其它方法且适用于肝脏总RNA的提取,传统方法的改良适用于肾脏总RNA的提取,心脏总RNA的提取效果均不理想。

魔芋(Amorphophallus spp.)四种组织器官RNA提取方法的比较

由于魔芋植株各部位富含多糖,较难获得高质量的RNA。为了筛选出魔芋各组织器官总RNA提取最适合的方法,本研究采用Trizol法、异硫氰酸胍法、改良CTAB法、RNAprep Pure Plant Kit和Plant RNA Kit五种方法分别对花魔芋叶片、茎杆、根和球茎四种组织部位的总RNA进行了提取,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对RNA质量进行综合评价。结果表明:用Trizol法和异硫氰酸胍法提取魔芋各器官的RNA效果较差,杂质含量较高,降解严重;采用RNAprep Pure Plant Kit和Plant RNA Kit两种商业试剂盒仅提取出魔芋叶片的RNA,茎秆、根、球茎三种组织器官未能提取质量完整的RNA,所提取的RNA效果不稳定且浓度较低。改良CTAB法提取的魔芋四种组织器官RNA均能得到完整、清晰的RNA条带,且四个器官的OD260/OD280均在1.8~2.0之间,采用改良CTAB法提取魔芋各组织器官总RNA较为理想。本研究为不同器官来源魔芋植株样品的RNA提取方法提供了科学依据。