改良消化富集法提高小鼠精原细胞染色体制备效率的研究及应用

目的建立一种改良的小鼠精原细胞染色体畸变试验方法,以获得大量结构清晰的中期分裂相精原细胞利于阅片,并将改进后的方法应用于玛咖的致突变实验。方法选取雄性ICR小鼠30只,随机分为6组,每组5只,将原染色体制备方法增加了剪碎曲细精管及精原细胞消化富集,采用1.5 mg/mL的胶原酶,35℃消化15 min,每隔3 min搅拌1次,消化富集精原细胞,经低渗、固定、滴片,封片后镜检阅片,同时与国标方法所制备的滴片进行比较阅片。结果改良消化富集法所制备的滴片背景清晰,染色体分散良好,收缩适中,易于观察。分析每只动物100个中期分裂相精原细胞所需观察的高倍视野数(25±3.9)与国标方法组(75±5.6)比较明显减少(P<0.01),精原细胞有丝分裂指数(18.04±2.47)与国标方法组(8.83±2.04)比较明显增加(P<0.01);环磷酰胺处理组染色体畸变率(15.40±2.30)与空白对照组(3.60±1.14)比较显著增加(P<0.01);玛咖各剂量组染色体畸变率与空白对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论改良消化富集法能明显提高精原细胞富集效率及实验成功率,可获得大量分散良好、背景清晰的中期分裂相精原细胞,明显优于国标方法;在本次实验条件下,玛咖对小鼠精原细胞染色体无致突变作用。