超快速冷冻法在犬精子冷冻保存中的应用

目前,犬精子的传统慢速冷冻法虽已广泛应用,但仍存在诸多不足。超快速冷冻法可以实现精子玻璃化,有望进一步提高冷冻质量。研究分别以蔗糖浓度为0M、0.05M、0.1M、0.125M、0.15M、0.2M、0.25M等渗溶液(约300m Osm/L)作为冷冻液,利用微粒法对犬精子进行超快速冷冻,并对复苏后精子的总活力、存活率、顶体完整性、畸形率进行评价。结果表明,0.125M蔗糖组的总活力为40.1±2.0%,存活率60.4±2.8%,顶体完整性65.6±10.5%,存在显著优势。超快速冷冻法能够消除传统方法中冷冻保护剂的毒性和污染,操作快捷、

三种方法制备组织工程气管支架的比较

背景:气管支架制备是组织工程学方法修复长段气管缺损的关键步骤。目的:通过比较分析3种制备异体脱细胞气管支架的方法,为组织工程气管支架制备寻找更适宜的途径。方法:手术获得兔新鲜气管,分为对照组、玻璃化液冷冻法组、酶洗法组、改良玻璃化液冷冻法组。处理后对各组标本行苏木精-伊红染色,电镜扫描观察,并测量气管最大拉伸力、破裂力和组织拉伸率等生物力学性能。结果与结论:组织学观察显示对照组、玻璃化液冷冻法组可见部分完整黏膜上皮细胞,酶洗法组、改良玻璃化液冷冻法组未见黏膜上皮细胞。电镜观察示对照组、玻璃化液冷冻法组、改良玻璃化液冷冻法组有丰富的细胞外基质和胶原纤维,而酶洗法组无细胞外基质,只有胶原纤维。组间两两比较,气管支架的最大拉伸力、最大破裂力和组织拉伸率比较,差异均无显著性意义。说明应用改良玻璃化液冷冻法制备气管支架能够有效地去除抗原性、保留细胞外基质,并维持生物力学性能,是一种较为理想的组织工程气管支架制备方法。

体外受精牛胚胎切割后的超低温冷冻研究

本文研究了不同冷冻方法和不同冷冻保护剂对牛7日和8日龄IVF切割胚胎冷冻效果的影响。试验结果表明:在乙二醇冷冻液中添加一定浓度的透明质酸不能改善胚胎的抗冻能力;用细管法玻璃化冷冻和两步解冻法可显著提高体外受精胚胎的存活和生长。

玻璃化冷冻对猪MⅡ卵母细胞皮质颗粒分布及其激活后胚胎发育能力的影响

本实验旨在探讨玻璃化冷冻保存对猪MⅡ期卵母细胞皮质颗粒分布和孤雌激活后早期胚胎发育能力的影响。实验将卵母细胞随机分为对照组、毒性实验组和冷冻组。采用EFS40和EDFS40两种玻璃化冷冻液处理,卵母细胞经恢复后对其进行染色,观察皮质颗粒的分布;并对另一部分卵母细胞实施孤雌激活,观察早期胚胎的发育。结果表明:毒性实验组和冷冻组卵母细胞皮质颗粒部分释放、完全释放的比例无显著差异,但均显著高于对照组(P<0.05)。不同毒性处理组和不同冷冻组间对皮质颗粒的分布无显著差异。与毒性实验组相比,冷冻处理组显著降低皮质颗粒在皮质区分布的比例(P<0.05)。EFS40毒性实验组孤雌激活后的存活率、卵裂率、囊胚发育率均显著高于EDFS40毒性实验组(86.6%vs.75.0%)、(61.8%vs.40.7%)、(30.2%vs.23.5%)(P<0.05)。EFS40冷冻组存活率显著高于EDFS40冷冻组,但均显著低于对照组。结果显示,抗冻保护剂处理和玻璃化冷冻均导致猪卵母细胞皮质颗粒释放,与EDFS40相比采用EFS40较适合猪MⅡ期卵母细胞冷冻保存。