改良蝰蛇毒磷脂时间试验和硅凝固时间试验检测狼疮抗凝物的性能验证

目的对基于2种不同原理的狼疮抗凝物(LA)检测方法,即改良蝰蛇毒磷脂时间(dRVVT)试验和硅凝固时间(SCT)试验进行全面的方法学评估,以期为临床实验室选择LA检测方法提供参考依据。方法计数50例乏血小板血浆(PPP)血小板(PLT)数量,验证现有离心条件是否满足要求。按照美国临床实验室标准化协会文件及我国《临床血液学检验常规项目分析质量要求》(WS/T406-2012)文件,对2种LA检测方法的精密度、携带污染率、方法学比对进行全面评估,并建立了不同方法检测LA的参考范围(RI)/临界值(Cut-off)。结果 50例PPP的PLT计数为(0~9)×10~9/L,满足指南<10×10~9/L的要求。dRVVT试验和SCT试验3个结果表达方式的批内精密度均<2.50%。dRVVT试验批间精密度为2.76%~3.53%,SCT试验批间精密度为6.23%~7.02%。标准化比值(NR)的批间精密度<其他2种结果表达方式。所有检测方法携带污染率绝对值<3.00%。dRVVT NR计算所得RI/Cut-off值为1.24,高于试剂说明书数据(1.20);SCT NR计算所得RI/Cut-off值为1.16,与说明书中一致。不同仪器同种方法和相同仪器不同方法之间比对数据相关性良好(r>0.900)。同一仪器2种检测方法NR之间(P=0.248)和2种方法阴阳性判断之间差异均无统计学意义(P=0.068)。结论基于不同原理的dRVVT试验和SCT试验均有良好的检测性能,各实验室建立或验证了适合本实验室的RI/Cut-off值后,适用于LA的临床常规检测。

3种稀释蝰蛇毒磷脂时间试验检测狼疮抗凝物的性能评价

目的对3种稀释蝰蛇毒磷脂时间试验(dRVVT)的狼疮抗凝物(LA)检测方法进行性能评价,比较不同系统间检测结果的一致性,并初步探讨不同检验流程对检测结果的影响。方法按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)文件及临床血液学检测常规项目分析质量文件(WS/T 406—2012),对3种LA检测方法的精密度、携带污染率进行评价,验证3种方法检测LA的参考区间(RI)/cut-off值,并分析检验结果一致性和不同检验流程对检测结果的影响。结果3种dRVVT检测方法重复性以CV表示为0.44%~1.69%;期间精密度以CV表示,为1.43%~2.43%。3种检测方法携带污染率绝对值<3.00%。系统1和2的RI验证通过,系统3验证未通过。3种不同系统筛选试验、确认试验及比值间结果差异有统计学意义(P=0.000)。3种不同系统阴阳性判断结果间差异有统计学意义(χ^2=11.333,P=0.000)。系统3以说明书推荐流程分析结果,与筛选/确认比值(R)或标准化比值(NR)结果表示方式相比,53例阴性结果中2例为假阴性。结论3种dRVVT检测系统性能良好,适于临床常规使用。但各实验室应验证或建立适合本实验室的RI/cut-off值,确定合理的检测流程,关注检测分析前中后影响因素,合理解释检测结果。

稀释蝰蛇毒时间试验与混合试验在狼疮抗凝物检测中的相关性研究

目的:探究狼疮抗凝物检测中稀释蝰蛇毒时间(diluted Russell viper venom time, d RVVT)法与混合试验(Rosner指数)检测结果间的相关性及方法学特点。方法:2015年9月至2019年9月期间,收集在上海交通大学医学院附属瑞金医院就诊的31例凝血功能异常、狼疮抗凝物阳性患者的临床资料,比较d RVVT标准化比值与混合试验(Rosner指数的R1、R2)检测结果间的相关性,进而探究2种方法间的异同。结果:从31例患者dRVVT标准化比值与病人血浆(病浆)活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)值与混合试验的R1、R2的散点图可以看出,d RVVT标准化比值分别与病浆APTT值、R1及R2之间具有较好的相关性。进一步应用Pearson相关性分析得出,dRVVT标准化比值与混合试验检测结果显著相关(相关系数r值为0.54~0.62,P<0.05)。结论:基于共同凝血途径d RVVT法的确证试验与混合试验(基于内源性及共同凝血途径)结果间具有显著相关性,但并非严格的线性相关。2种检测方法在狼疮抗凝物检测中并不可完全替代,因此仍建议将二者相结合进行分析,从而提高狼疮抗凝物的检出率,降低误诊率和漏诊率。

3种狼疮抗凝物检测方法的临床应用价值评价

目的探讨3种狼疮抗凝物(LA)检测方法的临床应用价值。方法回顾分析2019年2月至2020年1月于我院检测LA的血液样本1240例,检测方法包括二氧化硅凝固时间(SCT)法、改良的稀释蝰蛇毒时间(DRVVT)法及活化部分凝血活酶时间(APTT)即刻纠正试验法(APTT法)。筛选出SCT法和DRVVT法检测LA阳性332例(A组),应用SCT法、DRVVT法及APTT法同时检测LA135例(B组),应用3种方法同时检测且LA持续阳性87例(C组),将各组再分为相应亚组。采用非参数检验、Spearman秩相关和受试者工作特征(ROC)曲线,分析组间差异、相关程度,评估3种检测方法的诊断价值。结果A组中,SCT法阳性率(74.4%)与DRVVT法阳性率(78.3%)无统计学差异;当SCT法或DRVVT法的标准化比值(NR)分别≥1.2、1.5、2.0时,两者的阳性符合率(52.7%、48.3%、45.9%)无统计学差异。B组中,SCT阳性/DRVVT阳性组APTT即刻纠正试验罗斯纳指数(RI)高于仅SCT阳性组、仅DRVVT阳性组、LA阴性组,差异有统计学意义,后3个亚组间则无统计学差异;当NR分别≥1.2、1.5、2.0时,RI诊断LA阳性的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.792、0.851、0.891,临界值分别为22.2、23.9、26.5,敏感度分别为57.4%、71.0%、89.2%,特异度分别为89.1%、88.9%、81.4%。C组中,38例诊断为抗磷脂综合征(APS),其他49例诊断为非APS,SCT NR、DRVVT NR及RI诊断APS的ROC-AUC分别为0.683、0.653、0.664,临界值分别为2.26、1.66、28.2,敏感度分别为57.9%、63.2%、71.1%,特异度分别为78.6%、73.2%、67.9%。结论SCT法和DRVVT法联合检测可提高筛查LA的阳性率。APTT即刻纠正试验对判断LA及其阳性程度有重要价值。在LA持续阳性患者中,可用SCT NR、DRVVT NR和RI适当的临界值对APS和非APS患者进行初步实验室指标的鉴别诊断。

曾经困惑——达比加群酯治疗的实验室监测

达比加群酯是口服直接凝血酶抑制剂,药代动力学通常可预测而不需常规监测,但在复杂临床情况下,实验室监测有助于评估达比加群酯的安全性和有效性。监测达比加群酯的主要实验项目有活化的部分凝血活酶时间(APTT)、蛇毒凝血时间(ECT)、稀释的蝰蛇毒时间(dRVVT)、凝血酶时间(TT)和稀释凝血酶时间(dTT)等,其中APTT和dRVVT可作为出血风险的筛查手段,TT可用于识别血中达比加群的残留抗凝效应,ECT和dTT与血中达比加群浓度线性相关,可作为指导达比加群酯管理的有效手段。

达比加群服药患者出血风险的实验室检测

目的观察常规凝血试验结果与血浆达比加群浓度的相关性,寻找合适的试验用于监测达比加群服药患者的出血风险。方法分析北京大学第三医院2015年至2017年使用达比加群抗凝的49名非瓣膜性心房颤动(NVAF)患者的临床资料,并计算其出血发生率。收集20名健康志愿者的血浆,制成正常混合血浆(NPP),分别向1 m L NPP中加入0~1 000 ng/m L浓度梯度的达比加群,检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fib)和稀释蝰蛇毒时间(dRVVT)。另外收集3名健康志愿者的新鲜全血,做相同的加药处理后进行血栓弹力图试验(TEG)。结果服用达比加群的NVAF患者的出血发生率高达28.6%,以消化道出血居多。APTT、dRVVT、TEG的R时间(R)和凝血指数(CI)结果与血浆达比加群浓度相关性良好,其中,dRVVT的敏感性最强,APTT次之,R和CI敏感性较差。结论 APTT和dRVVT在监测达比加群出血事件方面具有重要意义,将有助于临床寻找合适的停药时机,减少出血事件的发生。

DRVVT法检测狼疮抗凝物标准化流程的建立及应用结果分析

目的探讨建立使用稀释鲁赛尔蝰蛇毒时间(DRVVT)法检测狼疮抗凝物(LA)全流程的标准化程序,以保证LA检测结果准确性并为临床诊断治疗提供支撑。方法本研究遵循相关行业要求,包括《医疗机构实验室管理办法》和《临床血液学检验常规项目分析质量要求WS/T 406-2012》等,从DRVVT法检测LA整个流程包含检验前、检验中、检验后等阶段,对检测步骤进行全程标准化要求,建立以标准操作流程为核心的“DRVVT法狼疮抗凝物检测手册”,并对检测结果进行全流程的跟踪监控,以确保LA检测结果的准确性,并为临床诊断治疗提供支持。本研究对象为西部战区总医院2021—2023年进行LA检测的共计3595例标本,通过对送检标本量、送检科室分布、年度增长量等方面进行分析,探讨标准化检测流程建立后临床对此项目的认可程度、对疾病诊断准确度等方面的提升效果。结果通过建立一系列标准化的操作和检测流程,实现对检测结果有效监控,能准确反映患者体内LA的含量,为诊断和治疗提供有效支持。随着标准化流程的持续展开,临床对相关项目的认可度持续提升,送检科室和送检量持续上升。送检量从2021年的841例上升到2023年的1460例,增大幅度为73.0%;从送检科室的分布来看:2021年送检科室16个,2023年达到29个,增长幅度为81.3%;完全达到了支撑临床、与临床积极互动的良好效果。结论建立针对DRVVT法LA检测的标准化程序,可以为临床提供准确、真实反映病情的检测结果,加深与临床的沟通,并对相关性疾病的诊断和治疗起到积极的支持作用。

不同狼疮抗凝物检测试验的临床诊断效能研究

目的 研究不同狼疮抗凝物（LA）试验的临床诊断效能,为临床提供有价值的LA指标.方法 370份柠檬酸盐抗凝样本来自2014年9月至2015年3月就诊于北京协和医院的患者或体检者,分别通过改良蝰蛇毒磷脂时间法（dRVVT）、硅凝固时间法（SCT）、活化部分凝血活酶时间法APTT-Actin、APTT-Actin FSL和APTT-SS共5种方法及相应的1∶1混合试验、确证试验检测LA.由此推算每种方法1∶1混合试验计算值循环抗凝指数（ICA）、确证试验计算值纠正百分比（C）和标准化比值（NR）的参考范围（RI）/Cut-off值,进而研究每种方法决定的LA的临床诊断效能.结果 不同试验方法LA的RI/Cut-off值不同,dRVVT法的敏感度最高（70.3％ ～93.1％）,APTT法最低（＜55.0％）.APTT-SS法的敏感度（47.5％～53.5％）略高于APTT Actin法（32.7％～39.6％）和APTT-Actin FSL法（29.7％ ～36.6％）.dRVVT法的特异度为91％ ～ 100％,SCT法为80.6％～100％,APTT法为85.1％ ～98.5％.其中,SCT法确证试验的特异度均为100％.针对弱阳性LA结果,5种方法的敏感度均下降,但dRVVT法和SCT法的敏感度仍＞50.0％,APTT-Actin法和APTT-Actin FSL法＜16.0％.除APTT-SS法外,dRVVT法及SCT法的组合方案检测的LA与APS血栓形成均具有相关性（OR值：5.562 ～9.240,均P＜0.05）.结论 实验室应根据LA具体试验方法建立RI/Cut-off值.dRVVT法是LA的最佳检测方法,与指南说明一致.APTT-SS法优于其他APTT法,dRVVT法及SCT法的组合方案检测的LA均与APS血栓形成相关。