全血DNA提取试剂盒改良法

目的建立简便、快捷、高纯度、高浓度的DNA提取方法。方法对原美国生产的EZNABloodDNAKit试剂盒方法进行改良(简称全血DNA提取试剂盒改良法),并与原试剂盒法、经典酚氯法改良法(微量法)[1]进行比较。取EDTA2Na抗凝血,分别用3种方法提取DNA,用琼脂糖凝胶电泳对其进行定性测定,并用紫外分光光度法定量测定。结果DNA提取的纯度A260/A280试剂盒改良法、原试剂盒法和微量法分别为1.8083±0.1655、2.0877±0.3230、1.7734±0.1152,前两法有显著性差异(P<0.05),试剂盒改良法提取DNA的纯度明显高于原试剂盒法,与微量法无显著性差异(P>0.05);改良法提取DNA的浓度分别为75.2476±18.0259、45.2771±14.973、123.8758±74.7367,与前两法的DNA提取浓度有显著性差异(P<0.05),明显高于原试剂盒法;DNA电泳图显示试剂盒改良盒法与微量法均很清晰,原试剂盒法有明显的拖尾现象。结论试剂盒改良法提高了DNA提取的纯度和浓度,可作为分子生物学研究DNA提取较好的选用方法。

ExoQuick提取人血清外泌体方法改良及比较

目的:优化经Exo Quick提取人血清中外泌体(exosome)的方法以获得高质量exosome,并与超速离心法进行比较。方法:分别采用Exo Quick试剂盒及其改良方法、超速离心法提取人血清exosome。利用透射电镜进行形态学观察;2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法进行蛋白定量;Western blot检测exosome表面标志物CD63;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达差异。结果:3种方法均可提取到血清exosome,电镜下观察到圆形或椭圆形膜性囊泡结构;Exo Quick试剂盒法及其改进方法提取所得样本浓度显著高于传统超速离心法(P<0.05);SDS-PAGE显示3种方法提取样本蛋白表达强度及丰度存在差异;Western blot表明3种方法提取exosome均表达其表面特异性标志物CD63,且含同浓度蛋白的情况下,Exo Quick试剂盒法及改良法其CD63含量明显高于传统超速离心法。结论:3种方法均能提取血清中exosome,Exo Quick试剂盒法及改良方法提取exosome效率更高,同时改进方法能够有效地去除提取样品中的杂蛋白。

狗源性DNA检测试剂盒的研制与评价

本研究旨在研制一种快速鉴定肉制品中狗源性成份的DNA检测试剂盒,并对此试剂盒做出方法学评价。以改良SDS-PK法提取狗肉及掺假肉品种(狐肉、貂肉)基因组DNA,选择具有种属特异性的线粒体细胞色素B基因作为鉴定靶基因,应用Primer5.0设计特异性引物,建立狗源性DNA检测方法,组装狗源性DNA检测试剂盒,并进行特异性、稳定性及重复性评价。结果表明,本试剂盒可有效检测肉制品中狗、狐、貂源性成分,DNA提取效率高,仅0.05 g肉样即可提取浓度高于100 ng/μL的基因组DNA,OD260/280处于1.80~2.00之间,最低检测限为10-4 ng/μL,所有检测步骤可在4.5 h内完成,操作简便,特异性高。试剂盒所采用试剂安全无毒,反复冻融20次后仍然有效,可于-20℃保存一年。随机抽取12份市售样品进行检测,有3份样本中存在狐、貂肉冒充狗肉现象,掺假率高达25%,该结果与长春食品药品检验中心检测结果一致。狗源性DNA检测试剂盒灵敏性高、特异性强,检测结果准确稳定,具有良好重复性,适用于狗肉快速定性检测。

壮药白花蛇舌草不同部位总DNA提取方法的比较研究

目的:比较改良试剂盒法和改良CTAB法对白花蛇舌草不同部位总DNA提取的效果。方法:以白花蛇舌草的新鲜叶片、茎、花、果及干燥全草为实验材料,采用改良试剂盒法和改良CTAB法两种DNA提取方法提取上述材料的总DNA,将提取到的DNA经凝胶电泳和超微量分光光度计检测,比较两种方法对白花蛇舌草不同部位总DNA的提取效果。结果:提取浓度方面,使用改良试剂盒法提取叶、茎、花的总DNA浓度能达到0.3μg/mL以上,使用改良CTAB法提取叶、茎的总DNA浓度能达到0.3μg/mL以上;提取纯度方面,改良试剂盒法对花DNA的提取纯度最高(A260/A280=1.80),其余部分次之,改良CTAB法对叶DNA的提取纯度最高(A260/A280=1.79),其余部分次之。结论:当提取白花蛇舌草新鲜叶片和茎的DNA时,改良试剂盒法和改良CTAB法均能较好的效果;当提取白花蛇舌草的新鲜花、果和干燥全草的DNA时,改良试剂盒法能满足实验要求。

昆明小鼠不同组织RNA提取方法的比较

利用改良的异硫氰酸胍法、改良的SDS法和改良的TRlpure试剂盒法对昆明小鼠心脏、肝脏以及肾脏进行组织总RNA的提取,比较其提取效果,结果显示,试剂盒提取效果普遍明显优于其它方法且适用于肝脏总RNA的提取,传统方法的改良适用于肾脏总RNA的提取,心脏总RNA的提取效果均不理想。

柿属植物基因组DNA提取方法比较

针对柿属植物叶片富含单宁,常规CTAB法提取DNA质量低等问题,为了获得符合柿属植物SSR-PCR扩增要求的DNA,分别采用改良CTAB法和植物基因组DNA提取试剂盒两种方法,提取柿属植物DNA,结果显示:两种方法均可得到满足SSR-PCR扩增要求的DNA;试剂盒较改良CTAB法提取的DNA质量高、杂质少,DNA得率略低,但其操作步骤简单,耗时短,毒害小,因其费用较改良CTAB法高,各实验室可根据自身条件选择适宜方法提取柿属植物DNA。

三种方法提取不同品种梨叶片总RNA

为筛选出提取梨叶片总RNA的最佳方法,以梨极矮化突变体和苹果梨为材料,采用柱式植物RNAout试剂盒、SDS法和改良CTAB法提取其叶片总RNA并比较提取效果。结果表明,改良CTAB法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,获得纯度高、完整性好的总RNA,其28 S rRNA条带亮度高于18 S rRNA,所提取的RNA适合下一步的研究使用。

野生香蕉叶片总RNA提取方法研究

采用TRIZOL试剂盒法、RNAsio试剂法和改良CTAB法提取香蕉叶片总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的质量。研究结果表明:改良CTAB法提取的RNA具有28SrRNA和18SrRNA两条清晰的条带,OD260/OD280在1.80～1.95之间,OD260/OD230在1.75～2.10之间,具有较高的纯度;其他两种方法获得的RNA纯度不够,降解严重。将提取的RNA分别逆转录成cDNA,经RT-PCR扩增,只有改良CTAB法出现清晰的条带,进一步证明改良CTAB法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。

三色堇花瓣总RNA3种提取方法的比较

分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测。结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高。3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260 nm/D280 nm在1.83～2.03之间。以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验。

枣花蕾总RNA提取方法的比较

为了探究枣花蕾总RNA提取的最优方法,以沾化冬枣的花蕾为材料,利用改良CTAB法、Trizol法和2种RNA提取试剂盒(PureLinkTMRNA小提试剂盒和北京奥莱博生物技术有限公司提供的植物RNA提取试剂盒)分别提取花蕾的总RNA,并对RNA浓度和电泳图谱进行比较分析,利用奥莱博生物技术有限公司提供的植物RNA提取试剂盒法可提取到纯度较高,完整性好的总RNA,并可用于Northern杂交、cDNA文库构建和半定量RT-PCR等分子生物学试验。

魔芋叶片中4种总RNA提取方法的比较

本研究分别利用TRIzol法、异硫氰酸胍法、改良的CTAB法及试剂盒这4种方法提取魔芋叶片的总RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对各个提取效果进行鉴定。反复试验的结果表明:TRIzol法难以提取魔芋叶片总RNA,异硫氰酸胍法提取的总RNA浓度低、杂质较多且有部分降解,这两种方法不适宜用于魔芋叶片总RNA提取;试剂盒方法提取的总RNA产率和纯度较高,但稳定性差、成功率低且成本较高;改良的CTAB法利用PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,水饱和酚-氯仿去除蛋白质,醋酸钾去除多糖,该方法提取得到的总RNA的纯度较高,OD260/OD280值为1.893,而且效果稳定,有良好的可重复性。因此,我们认为改良的CTAB法是一种简便、快速且经济的提取魔芋叶片总RNA的方法。

草莓果实总RNA提取方法的比较

为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(Nano Drop 2000)检测2种方法提取总RNA的浓度、纯度及完整性等。改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法都能够完成草莓果实总RNA的提取,电泳检测在28S和18S处呈2条清晰的条带,OD260/OD280值和OD260/OD230值均在2.0左右;改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法成本较高,且提取总RNA质量劣于改良的CTAB法,但是EASYspin植物RNA提取试剂盒法操作简便,安全可靠,节省时间。通过RT-PCR验证,2种方法所获得的草莓果实总RNA质量较好,可达到分子生物学试验对RNA质量的要求。

铁观音茶树叶片总RNA提取方法研究

铁观音茶树不同生育时期叶片为材料，采用Tripure试剂法、中能博彩试剂盒与Tripure试剂相结合的方法提取茶树叶片总RNA。结果表明，Tripure试剂法比结合法更适宜提取铁观音茶树RNA，该方法提取的RNA28S、18S和5SrRNA条带清晰明亮；OD_260／OD_280值在1．7～2．0之间，说明该方法提取的RNA完整性和纯度好，可用于进行后续分子生物学实验。

提取玫瑰基因组DNA几种方法的比较

为了找到一种方便、快捷且经济高效的玫瑰叶片基因组DNA提取方法,为玫瑰后期的分子生物学研究奠定良好基础,以不同品种的玫瑰幼嫩叶片为材料,分别利用CTAB法、SDS法、改良CTAB法、试剂盒法4种方法提取玫瑰基因组DNA,经过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法对所提DNA的质量和产量进行检测比较。结果表明:4种方法均可从玫瑰叶片中提取到DNA,改良CTAB法作为对常规方法的改进,在保证经济实用的前提下提取到的DNA质量最好,浓度最高;而试剂盒法作为一种快速提取植物基因组DNA的新兴方法,虽然产量略低,费用略高,但操作步骤简单,耗时短,毒害小,高效快捷。各实验室可根据实际情况选择适宜的方法。

红花花冠总RNA提取方法的筛选研究

筛选一种红花花冠总RNA提取方法。采用植物总RNA提取试剂盒法、传统佰烈法、改良Trizol法提取红花花冠总RNA。凝胶电泳、RT-PCR、紫外分光光度法检测三种方法提取所得总RNA，并将筛选得到的方法应用于红花愈伤组织总RNA的提取。改良Trizol法提取得到的红花花冠总RNA凝胶电泳检测可见清晰的三条带，RT-PCR结果凝胶电泳检测可见清晰的一条带，紫外分光光度法检测符合要求，其余两种方法均不符合要求。改良Trizol法应用于红花愈伤组织总RNA提取，检测结果均符合要求。改良Trizol法可用于红花花冠总RNA提取，提取所得红花花冠总RNA可用于后续分子生物学实验。

两种方法提取板栗叶片DNA的效果比较

以采自湖北罗田地区的9个板栗品种为试材，研究比较了试剂盒法和改良CTAB法对板栗叶片DNA提取效果的影响。结果表明：用试剂盒提取的DNA出现部分降解的现象，A26。／A28。为1．1l～1．49，DNA产率为24．50-59．25μg/g，很难得到高纯度的DNA样品；而采用多次洗涤相结合，并用PVP和β-巯基乙醇联合除酚的改良CTAB法，能有效去除板栗叶片的多酚和多糖等物质，所获得的DNA完整，无降解现象，A260/A280为1．80～1．90，DNA产率为60．50～102．00,u．g／g。表明改良的CTAB法获得的DNA纯度和产率较高，通过SRAP分子标记验证结果表明，DNA的纯度达到了板栗分子标记的试验要求。

灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取方法的研究

目的:探讨灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取的有效方法。方法:采用SDS法、Trizol法、普通试剂盒法、改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法提取灰毡毛忍冬花蕾总RNA并比较其效果。结果:SDS法、Trizol法和普通试剂盒法均不适用于本样品总RNA的提取;改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法均能有效去除蛋白质、多糖多酚及DNA,OD260/280为1.86-2.00,OD260/230为1.96-2.63,电泳条带清晰,RNA完整性好,且通过RT-PCR扩增能获得特异性条带。但以多糖多酚试剂盒法提取效果最佳。结论:改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法均适合灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取,完全满足后续RT-PCR等分子生物学研究。

3种提取淡水涡虫基因组DNA方法比较

分别用试剂盒法、改良的CTAB法、改良的酚-氯仿抽提法提取活体涡虫和95%酒精固定的涡虫标本的基因组DNA.结果显示:试剂盒法提取的基因组DNA质量最好,主要表现在分子完整,几乎无降解,并且该方法所得DNA的产率也比另外两种方法的产率要高,试剂盒法是最适合涡虫基因组DNA制备的方法.相同起始物质量条件下,3种方法从活体涡虫中提取的DNA量和纯度均高于95%酒精固定的涡虫标本,但试剂盒法提取95%酒精固定半年以上的涡虫标本,所得DNA产率较高、质量较好,可满足PCR扩增等分子生物学实验的要求.

蔺草基因组DNA提取方法的比较研究

以16个蔺草品种实生苗和4个蔺草品种组培苗为材料,探讨了CTAB改良法与DNA试剂盒法对蔺草基因组DNA提取质量的影响。结果发现,对于同一品种而言,CTAB改良法提取获得的DNA A260nm和OD值远低于试剂盒提取法,前者的DNA浓度仅为0.65-4.90μg/ml,而后者则为5.10-32.80μg/ml,后者为前者的1.6-21.2倍。这表明试剂盒提取法更适合于蔺草基因组DNA的提取。试验还发现提取材料对基因组DNA的质量有显著影响,蔺草组培苗优于实生苗。

番茄果实总RNA提取方法的定量比较分析

番茄果实富含多糖和酚类等次级代谢物质,RNA提取难度较大。为了获取高质量的RNA进行分子生物学研究,分别采用改进CTAB法和4种植物RNA抽提试剂盒提取总RNA进行比较分析。结果表明,柱式试剂盒提取的RNA质量和产量较高,且操作简便,但需进一步纯化。利用RT-PCR技术,采用试验提取的RNA,成功克隆出NAC15基因片段并进行定量分析,进一步表明RNA品质可以满足定性定量分子生物学研究。