改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基的应用效果

评估GB 4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物检验β型溶血性链球菌检验》中改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基的质量。选取国内三家(标记为A、B、C)和国外一家(标记为D)培养基生产商的胰蛋白胨大豆肉汤培养基(商品化脱水合成培养基)和相应添加剂,使用目标菌(乙型溶血性链球菌FSCC225016)和非目标菌(大肠埃希氏菌ATCC25922),依据GB4789.28-2013《食品安全国家标准食品微生物检验培养基和试剂的质量要求》中选择性增菌培养基的定性测试方法进行质量评估。同时不加添加剂进行试验。国内A、B和C三家改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基中目标菌浊度值均为0,非目标菌浊度值为0;未加试剂的培养基目标菌浊度值均为0,非目标菌浊度值为0。国外D改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基中目标菌浊度值为2,非目标菌浊度值为0;未加试剂的培养基目标菌浊度值为2,非目标菌浊度值为1。国内A、B、C三家的改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基质量评估证明是胰蛋白胨大豆肉汤培养基(不加添加剂)基础成分的问题;国产胰蛋白胨大豆肉汤培养基质量有待提高。

3种培养基对鸡肉产品中两类耐药菌培养的影响

目的:评估不同培养基对鸡肉产品表面四环素耐药(T^(r))菌和磺胺耐药(S^(r))菌菌群的培养效果差异。方法:基于高通量测序技术,分析分别在脑心浸液肉汤(BHI)、胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)和平板计数琼脂(PCA)3种培养基上培养获得的冷鲜鸡和鸡肉熟食表面T^(r)菌和S^(r)菌的菌群结构及丰度。结果:在冷鲜鸡表面鉴定到的101个属的耐药细菌中,仅在BHI、TSA和PCA培养基上获得培养的特有T^(r)菌属各有30,5,3个,特有S^(r)菌属各有9,8,14个;在鸡肉熟食样品表面鉴定到的50个属的耐药菌中,3种培养基上的特有T^(r)菌属分别为3,2,1个,特有S^(r)菌属分别为1,6,0个。耐药菌属丰度差异的Metastat分析结果表明,BHI和TSA对耐药菌群的结构影响具有较高的相似性,冷鲜鸡表面4种T^(r)菌(气单胞菌属Aeromonas spp.、水栖菌属Enhydrobacter spp.、乳杆菌属Lactobacillus spp.和泛菌属Pantoea spp.)和2种S^(r)菌(肠球菌属Enterococcus spp.和乳杆菌属Lactobacillus spp.)在PCA培养基上获得培养的稳定性及丰度均较高。结论:不同培养基获得耐药菌的种类及丰度存在差异,应汇总多种培养基培养所得菌群的测序信息,才能完整描述鸡肉样品表面耐药菌的组成。

胰酪胨大豆肉汤培养基和改良马丁培养基在药品无菌检查中的比较研究

目的:观察胰酪胨大豆肉汤培养基(TSB)和改良马丁培养基(MM)对真菌和需氧菌检测效果的差异。方法:选用3株细菌和3株霉菌试验菌株,用定性和定量2种方法分别测试培养基对试验菌株的促生长能力和检测灵敏度;定性方法参照现行中国药典;定量方法采用平板计数法。结果:定性和定量2种检测方法所得的实验结果基本一致,除腊叶芽枝霉外,在规定的条件下TSB和MM培养基对试验菌株的促生长能力比较,经统计学分析,差异无显著性(P>0.05);TSB培养基对所有试验菌株的检测灵敏度均可达到<1 CFU,下限可达到<0.1 CFU,与MM培养基比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:在现行中国药典规定的接种和培养条件下,TSB培养基对试验菌株的促生长能力和检测灵敏度与MM培养基基本等同,能满足我国现行药典的检测要求。

血液制品无菌生产工艺验证-培养基灌装试验

目的通过无菌灌装胰酪胨大豆肉汤培养基来验证血液制品无菌生产工艺的有效性和安全性。方法按正常分装程序进行无菌灌装,同时在灌装过程中模拟最快灌装速度、最多工作人员数量、最大灌装数量、最长工作时间、常规干扰试验和非常规干扰试验。结果通过模拟灌装过程中的最快灌装速度、最多工作人员数量、最大灌装数量、最长工作时间、常规干扰试验和非常规干扰试验,分装后的培养基孵放后无微生物生长。结论无菌灌装胰酪胨大豆肉汤培养基的验证过程及结果可以证明血液制品无菌生产工艺的控制是有效的和安全的。

3种培养基运用于饮料无菌冷灌装生产线无菌验证效果的评价

目的通过比较LG培养基(LG)、胰酪胨大豆肉汤(TSB)和改良马丁培养基(MMB)对细菌和真菌的检测灵敏度和促生长能力,评价LG培养基是否适用于PET瓶无菌冷灌装生产线的无菌验证。方法选用4株细菌和2株真菌分别对LG、TSB和MMB培养基的检测灵敏度和促生长能力进行评估。结果4种细菌在LG与TSB中的检测灵敏度相当,两者略优于MMB;2种真菌在LG与MMB中的检测灵敏度与促生长能力相当,两者略优于TSB。结论LG培养基无论对细菌还是真菌,均具有较高的检测灵敏度及较优的促生长能力,而且该培养基成本比较低,非常适用于需要使用大量培养基的无菌冷灌装生产线的无菌验证。

不同培养基对枯草杆菌黑色变种芽孢抗力影响的研究

目的研究不同培养基对枯草杆菌黑色变种芽孢抗力的影响。方法采用悬液定量和载体定量杀菌试验方法,对不同培养基培养出的枯草杆菌黑色变种芽孢抗力进行比较。结果相同培养条件下,胰蛋白胨大豆琼脂培养基与普通营养琼脂培养基培养制备出的20 ml芽孢悬液的浓度分别为4.52×109cfu/ml和2.15×109cfu/ml。湿热100℃作用20 min、干热160℃作用10 min、5 000 mg/L的邻苯二甲醛溶液作用40 min、2 000 mg/L的二氯异氰尿酸钠溶液作用15 min,对两种培养基培养的枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率均为99.99%。结论两种培养基培养的枯草杆菌黑色变种芽孢的抗力无明显差异。

乳源凝固酶阴性金黄色葡萄球菌挥发性代谢特征分析

为探究乳源金黄色葡萄球菌的挥发性代谢特征,从牛乳中分离得到5株凝固酶阴性金黄色葡萄球菌(31B、0250H、777H、S12-1和S2-2),采用顶空固相微萃取/气相色谱-质谱联用技术,分别对接种这5株菌的胰蛋白胨大豆肉汤(tryptic soy broth,TSB)和牛乳的挥发性代谢产物进行动态测定。结果表明,TSB中5株菌总计检出33个挥发性代谢产物,1-丁醇、乙酸、3-甲基-丁酸和2-丁酮是5株菌共同检出的典型挥发性代谢产物。牛乳中5株菌总计检出28个挥发性代谢产物,2-呋喃甲醇、辛酸和3-甲基-丁酸是5株菌共同检出的典型挥发性代谢产物。无论是在TSB还是牛乳中,3-甲基-丁酸始终是凝固酶阴性金黄色葡萄球菌稳定的挥发性代谢产物。不同菌株产生3-甲基-丁酸的强度不相同,同一菌株在TSB和牛乳两种不同基质中3-甲基-丁酸的产生强度也不相同。

粉针剂工艺模拟分装过程验证探讨

目的通过无菌乳糖模拟分装工艺验证证实分装注射用无菌粉末的无菌生产工艺规程和从事此生产工艺的操作人员能够保持产品的无菌性,证明其无菌工艺的可靠性。方法采用无菌乳糖干燥粉替代无菌原料药,模拟分装于西林瓶,然后于西林瓶中加入胰酪胨大豆肉汤液体培养基的方法来进行验证,将分装样品先后在20~25℃与30~35℃下培养7d,并作阴性、阳性对照。结果无菌分装环境及操作人员表面微生物检查合格,阴性、阳性对照成立,试验样品无菌。结论无菌粉针剂分装过程中,经培训的操作人员在规定的洁净环境中按操作规程操作所生产的产品可以保证无菌。

对虾中副溶血性弧菌生长模型的建立

为评估对虾中副溶血性弧菌的危害,建立对虾和2.5%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）中副溶血性弧菌的生长模型。采用修正Gompertz、修正Logistic、Richards和Baranyi模型拟合在15-40℃下副溶血性弧菌的生长曲线,选出最适生长模型。以平方根模型和Davey模型为二级模型,分别对最适模型的生长速率和延滞期进行拟合,并采用偏差因子和准确因子来验证模型的可靠性。结果表明,修正Compertz模型的拟合度较好,二级模型对生长速率和延滞期的拟合度较好,偏差因子和准确因子均在可接受范围内,能有效预测15-40℃温度条件下对虾中副溶血性弧菌的生长。

食品中β-溶血性链球菌检验技术的研究

〔目的〕通过对食品中β-溶血性链球菌检验技术的研究,选择操作性强、证实方法简便准确、检测周期较短的检验技术,为今后修订国家标准,向国际标准化靠拢提供有利依据。〔方法〕利用胰蛋白胨大豆肉汤TSB增菌液、哥伦比亚CNA血琼脂平板厌氧培养、API20STREP生化鉴定试剂盒及常规生化鉴定检测食品中的β-溶血性链球菌。〔结果〕试验结果显示,本方法适用于β-溶血性链球菌的培养、分离与鉴定。胰蛋白胨大豆肉汤TSB增菌液、哥伦比亚CNA血琼脂平板的增菌、分离效果优于GB/T4789.11-2003中的葡萄糖肉浸液肉汤和普通血琼脂。〔结论〕API 20 STREP快速鉴定系统更是为简化操作程序,缩短检测周期提供有效方法。