3种提取淡水涡虫基因组DNA方法比较

分别用试剂盒法、改良的CTAB法、改良的酚-氯仿抽提法提取活体涡虫和95%酒精固定的涡虫标本的基因组DNA.结果显示:试剂盒法提取的基因组DNA质量最好,主要表现在分子完整,几乎无降解,并且该方法所得DNA的产率也比另外两种方法的产率要高,试剂盒法是最适合涡虫基因组DNA制备的方法.相同起始物质量条件下,3种方法从活体涡虫中提取的DNA量和纯度均高于95%酒精固定的涡虫标本,但试剂盒法提取95%酒精固定半年以上的涡虫标本,所得DNA产率较高、质量较好,可满足PCR扩增等分子生物学实验的要求.

3种甲醛固定组织DNA提取方法的比较

目的对不同方法提取甲醛固定组织中DNA的效果进行比较,寻找一种操作简便、经济实用、质量较高的DNA提取方法。方法取甲醛固定的心肌组织14份,分别以改良酚-氯仿法,改良Trizol法,试剂盒法提取DNA,进行紫外分光光度计测定OD260/OD280值后,经PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分析确定提取的DNA质量。结果改良酚-氯仿法,改良Trizol法,试剂盒法OD260/OD280比值分别为1.841 5±0.380 4、1.370 5±0.336 7、0.831 6±0.175 0。两两比较均有显著性差异(P<0.05)。3种不同方法提取DNA含量分别为0.943 8±0.530 1、0.707 5±0.423 6、0.342 8±0.182 5。PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳显示以改良酚-氯仿法所提DNA的谱带清晰度好于其它两种方法。结论改良酚-氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的甲醛固定组织DNA提取方法。

9个miniSTR基因座在烧骨中的检测与分型

目的对300℃焚烧后成人股骨样本进行9个miniSTR（D20S1082、D6S474、D12ATA63、D9S1122、D2S1776、D1S1627、D3S4529、D2S441、Amelogenin）基因座的检测与分型。方法样本为8根经300℃焚烧后的成人股骨,用改良酚-氯仿法提取烧骨DNA,在Mastercylcerpro梯度PCR仪上对9个miniSTR基因座分别进行扩增,3130基因分型仪检测并收集电泳结果,GeneMarkerV2.2.0软件计算扩增产物片段相对大小以及进行样本基因型分型。结果8根烧骨样本均能够提取到DNA,浓度平均值为25ng/μL,D260/D280值在1.7~1.9之间。9个miniSTR基因座在样本中的检出率在78%~100%之间,分型图谱较清晰,个别样本出现额外带。结论本文9个miniSTR基因座分型检测的方法,可用于对烧骨捡材的DNA分型检验。