改良Chelex-100法和CTAB法用于转基因抗草甘膦大豆检测效果的比较

以转基因抗草甘膦大豆为研究材料,分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取基因组DNA,以提取DNA的浓度和纯度,同时以PCR扩增大豆的内源基因(lectin)及外源特异性序列(CaMV35S,nos,Cp4-epsps)的效果对两种方法进行比较和评价。结果表明:虽然改良Chelex-100法DNA提取纯度不高,但是提取效率与常规CTAB法相当,而且改良Chelex-100法能够快速在1 h之内从大豆中提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰。因此,改良Chelex-100法可以替代CTAB法提取DNA用于转基因检测,该方法具有经济、简便、快速的特点。

改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA

旨在建立一种从转基因农产品中快速提取DNA的方法。分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取转基因大豆GTS40-3-2基因组DNA,测其浓度和纯度,PCR扩增其内源基因(Lectin)、启动子(CaMV35S)和品系特异性序列,对两种方法进行比较和评价,并研究两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果,以及改良Chelex-100法在玉米、小麦和水稻等其他转基因农产品的应用效果。结果表明,改良Chelex-100法能够快速在1.5 h之内从样品中提取DNA,所提取的DNA直接用于PCR扩增反应,产物电泳条带清晰明亮。两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果未见明显差别。该方法在玉米、小麦和水稻等转基因农产品的应用效果稳定。因此,改良Chelex-100法提取的DNA可以作为PCR扩增模板用于转基因农产品检测。该方法具有经济、简便、快速、安全的特点,适合转基因农产品大规模筛选和鉴别。

微量DNA提取工作站与Chelex-100法提取指纹脱落细胞DNA效果比较

比较Chelex-100法或自动化工作站提取法对脱落细胞提取DNA的效果。方法 选取3名志愿者制作脱落细胞,用两步擦拭法分别提取脱落细胞检材,使用博坤24道全自动DNA提取工作站和Chelex-100方法分别提取模板DNA,用VeriFilerTM Plus试剂盒进行PCR扩增,扩增产物应用3500型全自动荧光分析仪进行检测、分析,并对分析结果进行比较。结果 两种方法提取的DNA模板经过分型分析,均出现了不同程度的丢峰现象,Chelex-100法的STR基因座检出数平均数为15.3,博坤24道全自动DNA提取工作站检出的STR基因座平均数为19.5。结论 本实验中博坤24道全自动DNA提取工作站提取的脱落细胞DNA检出率高于Chelex-100法。

Chelex-100法从颊粘膜拭子提取DNA进行基因型分析的研究

目的 :探讨采用Chelex 10 0法从颊粘膜拭子提取DNA这一方法的有效性和可靠性。 方法 :用棉签刮取 130例个体口腔颊粘膜脱落细胞 ,采用Chelex 10 0法从颊粘膜拭子中提取DNA ,采用SSP PCR及PCR PFLP法对其进行检测 ,观察结果的有效性和可靠性。 结果 :所有样本中都获得成功。电泳结果显示 ,PCR扩增及酶切的靶带清晰 ,无非特异性杂带 ,扩增结果重复性好。 结论 :采用Chelex 10 0法从颊粘膜拭子提取DNA ,方法稳定可靠 ,可以用于基因型检测。

Chelex-100法提取甘薯小象甲DNA及云南地区甘薯小象甲的分子鉴定

甘薯小象甲是国内外重要的检疫性害虫,除本身为害薯块外,引起的伤口还会诱致病菌侵入,使受害薯块发生恶臭和苦味无法食用。准确鉴定云南地区的甘薯小象甲,特别是研究其遗传变异可为检疫提供依据。本研究采集了云南元谋县甘薯小象甲,采用Chelex-100法快速提取甘薯小象甲基因组DNA,分别对雌雄成虫rDNA ITS-1序列进行系统发育分析,首次发现云南元谋县的甘薯小象甲属于东亚分支的东南亚亚支,与我国之前报道的甘薯小象甲属于东亚分支的东北亚亚支不同,说明云南元谋县的甘薯小象甲种群来源与中国广东、福建、浙江和重庆的种群来源不同。

Chelex-100法提取脱落细胞检材DNA的实时定量研究

目的研究脱落细胞检材DNA检验的简便有效的提取方法。方法对76份包括帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水在内的7种脱落细胞检材采用Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从帽子(头套)中获得的脱落细胞DNA平均含量为8.31ng,眼镜擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.20ng,牙刷上获得的脱落细胞DNA平均含量为49.40ng,剃须刀擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.92ng、梳子擦拭物上获得的的脱落细胞DNA平均含量为10.68ng,口香糖的脱落细胞DNA平均含量为16.30ng,羊水的脱落细胞DNA平均含量为320ng。以上76份检材性别及10个以上STR位点分型成功率为75.8%。结论从帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水等检材提取的脱落细胞可用Chelex-100法提取DNA作STR分型。

MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。

饱和苯酚-氯仿抽提法与Chelex-100树脂法提取DNA在研究犬STR基因座多态性中的应用比较

在研究犬STR基因座多态性中,比较使用了饱和苯酚-氯仿抽提法和Chelex-100树脂法,两种方法提取的DNA在扩增后的检测结果均能准确地反映实验结果。尽管从平均峰面积和平均峰高值等指标上,利用Chelex-100树脂法提取的DNA质量和扩增后的检测效果较饱和苯酚-氯仿抽提法差,但Chelex-100树脂提取法更为简单快捷,适合在建立警犬STR基因座等位基因数据库中和犬亲缘关系鉴定中广泛使用。

Chelex-100法及酚氯仿法提取阴道毛滴虫DNA的比较

目的 -比较Chelex 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA。方法 -分别用Chelex - 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA ,用PCR法检测DNA提取的有效性。结果 -两种方法提取的DNA经PCR扩增均有特定的条带。结论 -两种方法均能提取阴道毛滴虫DNA。Chelex 10 0方法简便、省时 。

M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的初步比较

目的对M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化提取方法提供参考。方法选取案件受理检材50例烟蒂、50例纺织物品、50例作案工具,根据不同条件分别用吸附法、沾附法获得DNA,采用磁珠法(M48)和Chelex-100法提取后,常规STR检测。结果烟蒂类检材采用2种方法提取DNA,所得结果没有明显差异;纺织物品和作案工具上脱落细胞DNA的提取采用M48磁珠法提取的效果明显优于Chelex-100法。结论相对而言,M48磁珠法更具优势。

用Chelex-100法大规模快速提取牦牛肌肉中基因组DNA

旨在建立快速、大规模提取牦牛(Bos grunniens)肌肉中基因组DNA的方法.试验样品为冰冻保存的九龙牦牛背最长肌(n=10).采用两种取样方法(镊子取样和枪头取样)采集冰冻的肌肉样品,用Chelex-100方法提取其中的基因组DNA,并进行PCR扩增.结果显示,镊子取样和枪头取样提取的基因组DNA,均可用于两个核基因和一个线粒体基因的PCR扩增,但枪头取样简便易行,提取的DNA用PCR扩增细胞色素b,扩增35个循环数的PCR产物可直接测序.表明Chelex-100法可用于快速提取牦牛肌肉中基因组DNA,操作简单,成本低廉,适用于大规模提取组织中的DNA.

ML-超微量磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞的比较研究

目的对ML-超微量磁珠法(King Fisher Flex)和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化案件里脱落细胞检材的提取方法提供方向。方法对同一份检材(纺织品或作案工具)利用两种提取方法进行DNA的平行提取,常规STR检测,经卡方检验比较差异。结果 112份纺织品检材中ML-超微量磁珠法检出率为58.0%,Chelex-100检出率则为45.5%,差异具有统计学意义(χ~2=7.00,P<0.05)。130份作案工具检材中ML-超微量磁珠法检出率为41.5%,Chelex-100检出率则为33.8%,差异具有统计学意义(χ~2=4.55,P=0.03)。结论 ML-超微量磁珠法(King Fisher Flex)提取脱落细胞更具有优势。

Chelex-100法联合磁珠法检测泥土精斑DNA1例

1案例 某日,某女在一偏僻河道的绿化带内被强奸、抢劫。提取受害人的阴道擦拭物和内裤,PSA试剂条检验,均为阴性,镜检未检出精子。勘验人员遂对现场进行复勘,在现场提取到5.1cm×4.6cm的泥土1块。

Chelex-100法和QIAcube纯化法在接触性检材检验中的比较

在法医DNA检验中，能否提取到足够浓度与纯度的DNA模板，是决定DNA检验成败的关键之一。本研究分别采用Chelex-100法与QIAamp DNA Investiga-tor试剂盒结合QIAcube核酸自动化提取仪（QIAcube纯化法）提取实际检案中的 DNA ，同等条件下进行PCR扩增与电泳，比较分析二者的图谱，报道如下。

一种适用于梅花鹿源性产品鉴定的微量组织DNA提取方法的建立

为建立一种适宜梅花鹿源性产品分子鉴定的高效、便捷微量组织基因组DNA提取的方法。本研究分别以鲜品梅花鹿茸、风干梅花鹿茸、烘干梅花鹿茸、鲜品梅花鹿鞭、烘干梅花鹿鞭、风干梅花鹿鞭、鲜品梅花鹿肉、干品梅花鹿尾、梅花鹿血为样本,采用Chelex-100树脂溶液和蛋白酶K结合的方法提取基因组DNA,并检测其浓度与纯度;以此DNA为模板,扩增梅花鹿线粒体DNA的Dloop区特异性基因,并对PCR扩增产物进行琼脂糖核酸电泳及测序。结果表明,基于Chelex-100树脂提取法获得的基因组DNA模板浓度为52.57~63.39 ng/μL,A260/A280比值为1.75~1.96;梅花鹿线粒体特异性基因扩增产物电泳条带清晰,且长度准确;扩增产物测序,相似性大于95%。Chelex-100树脂提取法能够提取微量梅花鹿组织样本基因组DNA,且此方法低价、简便,适用于梅花鹿源性产品的真伪鉴定。

Chelex-100法提取真核表达质粒pcDNA3-HERG的应用体会

目的探讨Chelex-100法提取先天性长QT综合征相关人类真核表达质粒pcDNA3-HERG的可行性。方法分别用Chelex-100法和碱裂解法提取pcDNA3-HERG质粒,将环状质性DNA酶切为线性,0.8%琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下检测质粒提取的有效性。结果用Chelex-100法和碱裂解法提取的pcDNA3-HERG质粒的OD(A260/A280)比较差异无统计学意义[分别为(1.8±0.6),(1.9±0.4),P>0.05],经0.8%琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下检测均有特定的清晰条带。结论两种方法均能提取纯度较高的大肠杆菌质粒DNA,Chelex-100法简便、省时,值得推广。

法医DNA常量检材Chelex-100提取法探究

目的:对Chelex-100提取法在常量检材DNA提取中的应用情况进行研究。方法:选取20份送检的常量检材,包括烟蒂、染血棉签、纱条、FTA卡片等检材,采用Chelex-100提取法对唾液、血痕进行检测,并对检测情况进行整理分析。结果:1组DAN浓度为2.31±0.2ng/μl;2组DNA浓度为2.28±0.4ng/μl;3组DNA浓度为2.49±0.3ng/μl,不同浓度的Chelex-100检测的DNA浓度比较无明显差异,且均能够达到检验目的。结论:低浓度Chelex-100在常量检材DNA提取中即可取得良好的效果,能够准确的提取DNA。

用Chelex-100快速提取微量血痕中的DNA

目的 观察用Chelex-100从微量血痕中提取DNA的效果。方法 40份血痕纱布,取血痕3 mm×3mm置于1.5 mL离心管中,采用5％Chelex-100加煮沸法,提取血痕纱布中的DNA。提取液经过紫外分光光法测定,测其A260/280的比值,计算提取液DNA的纯度和浓度;DNA提取液经微型琼脂糖凝胶电泳,检测其DNA电泳带。结果 Chelex-100能快速在1 h之内提取微量血痕中的DNA,其提取液DNA纯度:27.5％样品纯度A260/280比值大于1.6,72.5％样品纯度比值在1.08～1.54之间;提取液DNA浓度:80％样品小于100μg/mL,20％样品在100～166μg/mL之间。微型琼脂糖凝胶电泳未观察到DNA条带。结论 用Chelex-100法有助于快速提取微量血痕中的DNA。

DNA提取方法的比较及改良

用于处理 DNA检材以分离和提取 DNA的方法很多.不同的方法有不同的优缺点,其适用的分析技术也不同 [1～ 5].在法医检案的实际应用过程中经常会遇到不少的问题,如微量检材的 DNA提取,既要纯度高,又要回收率高;常用的几种方法单独进行时则很难达到这样的要求.本文就几种常用的方法进行了改良及它们效果比较.