改良Hulth法结合戊二醛注射建立大鼠膝骨关节炎模型

目的 探讨改良Hulth法结合戊二醛注射建立大鼠膝骨关节炎模型的可行性与有效性。方法 将32只SD大鼠按照随机数字表法分为模型组和对照组,每组16只。模型组采用手术切除膝关节内侧副韧带、前交叉韧带及内侧半月板并在关节腔内注射4%戊二醛0.5μl建立膝骨关节炎动物模型;对照组不做任何干预。两组于第4周取大鼠膝关节进行Masson染色组织病理学观察,并记录膝关节软骨组织的改良Mankin评分。结果 模型组大鼠术后1周手术切口均愈合良好,活动基本正常。第4周,对照组关节软骨表面光滑平整,厚薄一致,层次清晰,滑膜未见明显炎症细胞,未见毛细血管增生、充血,以脂肪组织为主;模型组关节软骨表面明显粗糙、凹凸不平整,关节软骨层厚薄不一致,部分软骨剥脱、碎裂,细胞明显增多,滑膜组织中有中性粒细胞以及单核巨噬细胞浸润,毛细血管增多并充血,胶原纤维增多,部分增粗伴玻璃样变性。第4周大鼠膝关节软骨组织改良Mankin评分模型组明显高于对照组(P <0.05)。结论 改良Hulth法结合戊二醛注射能在4周内快速、有效地建立大鼠早中期膝骨关节炎模型。

独活寄生汤对改良Hulth法造模大鼠膝骨关节炎软骨形态的影响

目的观察独活寄生汤对改良Hulth法造模大鼠膝骨关节炎软骨形态的影响,从形态学角度探讨独活寄生汤治疗膝骨关节炎的作用机制。方法2月龄SD大鼠66只,适应性喂养1周后,随机分为正常组(18只)和造模组(48只)。应用改良Hulth法复制大鼠膝骨关节炎模型,造模2周后,从正常组和造模组中随机抽取3只大鼠进行小动物MRI观察,鉴定造模是否成功。造模成功后,采用抽签法分为模型组、对照组和治疗组各15只。正常组和模型组给予0.9%生理盐水,治疗组给予独活寄生汤,对照组给予盐酸氨基葡萄糖胶囊灌胃。治疗12周后,切取左侧胫骨平台内侧软骨组织,固定、脱钙、石蜡包埋,行HE染色与番红O-固绿染色,并分别采用Mankin软骨组织学评分、OARSI关节病理评分评价染色结果。结果MRI显示:正常组可见关节间隙正常,关节面平整、光滑;造模组关节间隙增宽,关节软骨面不平整、软骨层变薄、局部缺损,结缔组织增生,骨赘形成,关节肿胀积液明显。与正常组比较,模型组软骨形态病变严重,Mankin评分、OARSI评分显著增高(P<0.01);治疗组与对照组软骨形态病变较轻;与对照组比较,治疗组软骨形态病变较轻,Mankin评分、OARSI评分明显降低(P<0.01)。结论改良Hulth法可成功复制大鼠膝骨关节炎模型。独活寄生汤能延缓软骨退变,促进软骨生长与修复,保护膝骨关节炎大鼠软骨形态。

改良后Hulth法和Ⅱ型胶原酶注射法建立兔膝骨关节炎模型的比较研究

目的对比分析兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型两种常用造模方法的差异,为不同类型膝骨关节炎动物模型的选择提供参考。方法将9只健康新西兰大白兔随机分为3组:空白组、改良后Hulth组、胶原酶组。改良后Hulth组和胶原酶组分别给予改良后Hulth法、关节腔内注射胶原酶干预,1周后每日促使其活动,6周后进行Lequesne MG评分、X-ray、Micro-CT、Pelletier评分、Mankin评分、ELISA检测,观察膝关节大体及病理改变。结果与空白组相比,两种造模方法的兔膝关节软骨表面均出现缺损;病理结果显示软骨层出现裂隙,番红O染色减退,潮线扭曲并伴有血管通过;ELISA结果显示空白组、改良后Hulth组和胶原酶组血清内TNF-α含量分别为(624.99±17.82),(1140.56±129.81)和(1480.69±492.08)pg/mL,血清内IL-1β含量分别为(30.23±0.25),(46.67±0.71)和(46.82±1.04)pg/mL,改良后Hulth组和胶原酶组与空白组相比,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。另外,改良后Hulth组膝关节伴有骨赘生成,股骨内髁软骨损伤更为严重,而胶原酶组损伤部位主要为胫骨内髁。结论两种造模方法均能构建理想的KOA模型。改良后Hulth法的损伤程度更严重;胶原酶诱导的模型损伤方式更接近人KOA进程与发病机制。

3种不同膝骨关节炎造模方法比较

目的比较卵巢切除法、木瓜蛋白酶法、改良Hulth法3种方法在不同时间节点血清炎症因子、病理表现及关节软骨胶原蛋白(Collagen)Ⅱ的表达,了解膝骨关节炎不同造模方法的造模效果及特点。方法选取清洁级雌性SD大鼠80只,采用随机数字表法分别设立空白对照组(6 w组、10 w组)、卵巢切除法组(6 w组、10 w组)、木瓜蛋白酶法组(6 w组、10 w组)、改良Hulth法组(6 w组、10 w组),每组10只。除空白对照组外,其余组按照相应方法建立膝骨关节炎模型。分别于建模后第6周、第10周处死相应组别大鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、基质金属蛋白酶(MMP)-3含量,镜下观察大鼠膝关节形态并用改良Mankin标准进行病理评分,免疫组化法检测膝关节软骨CollagenⅡ型胶原表达。结果造模6 w时,与空白对照组对比,卵巢切除法组TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分及膝关节软骨CollagenⅡ表达未见明显差异(P>0.05)。与空白对照组、卵巢切除法组对比,木瓜蛋白酶法组、改良Hulth法组血清IL-6、TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分明显增高,关节软骨CollagenⅡ表达明显降低(P<0.05)。造模10 w时,与空白对照组对比,卵巢切除法组血清IL-6、TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分及关节软骨CollagenⅡ表达未见明显差异(P>0.05)。与空白对照组及卵巢切除法组对比,木瓜蛋白酶法组、改良Hulth法组血清IL-6、TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分明显增高,关节软骨CollagenⅡ表达明显降低(P<0.05)。与木瓜蛋白酶法组对比,改良Hulth法组血清TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分明显更高,关节软骨CollagenⅡ表达明显更低(P<0.05)。结论在第10周时,卵巢切除法未能成功建立膝骨关节炎模型。木瓜蛋白酶法和改良Hulth法均可在第6周时快速、有效地建立膝骨关节炎模型。而改良Hulth法随着造模时间增加,在炎症反应表现更加持久和膝关节病理改变严重程度更高。

兔膝骨关节炎模型的制备及鉴定

目的探讨改良Hulth法制备兔膝骨关节炎模型及鉴定方法。方法改良Hulth法将兔膝内侧副韧带及前交叉韧带切断,内侧半月板切除,造模8周后拍片,将兔处死对关节腔软骨及滑膜大体观察;HE染色以及ELISA检查血清及关节液中IL-1、TNF-α的表达。结果 X线显示有明显的关节腔狭窄及骨刺形成。大体观察软骨有缺损,滑膜炎症形成。HE染色软骨缺损,软骨细胞分散、减少,形态不稳定。ELISA检查血清及关节液中IL-1、TNF-α的表达增高(P<0.05)。结论改良Hulth法制备的兔膝骨关节炎模型通过影像及生化指标检查,能准确反映骨关节炎特征性表现,为相关基础研究及临床治疗提供了理论依据。

Ⅱ型胶原注射骨关节炎时C-反应蛋白及类风湿因子的表达

背景:Ⅱ型胶原和硫酸软骨素是关节软骨的重要组成成分,不仅具有保护软骨的作用,还能抑制关节炎的病变。目的:通过检测类风湿因子和C-反应蛋白的表达评价Ⅱ型胶原及Ⅱ型胶原复合硫酸软骨素注射对骨性关节炎的疗效。方法:采用改良Hulth法制作大鼠膝关节骨性关节炎模型,造模后模型组关节腔注射生理盐水、透明质酸钠组给予透明质酸钠凝胶注射、Ⅱ型胶原组给予单纯Ⅱ型胶原注射、Ⅱ型胶原复合硫酸软骨素组给予Ⅱ型胶原复合硫酸软骨素注射治疗。各组动物于术后进行日常观察、称质量、血清抗体及组织病理检查。结果与结论:造模后模型组大鼠血类风湿因子和C-反应蛋白水平均有所升高,炎症加剧;而与模型组相比,各给药组大鼠类风湿因子和C-反应蛋白水平均有所下降,炎症有所减轻,其中Ⅱ型胶原复合硫酸软骨素组大鼠血清中类风湿因子水平显著下降(P<0.01)。结果显示Ⅱ型胶原与透明质酸钠均具有预防和治疗骨关节炎的作用,能缓解骨关节炎病变,Ⅱ型胶原联合硫酸软骨素的疗效更明显。