改良热硼酸法高效提取苹果果实RNA

苹果果实、尤其是成熟期的果实中多糖和其他次生物质含量高,难以提取RNA。对此,在原热硼酸法的基础上进行了改进,通过添加提取辅助剂并根据辅助剂特性调整提取步骤,高效、稳定地从苹果果实、尤其是后期果实中提取到了高质量的RNA。所得RNA的A260/A230大于2.0,A260/A280为1.8-2.1,并且RNA产量高,其中前期果实RNA产率在13.40μg/g以上,后期果实RNA产率在7.02μg/g以上,完全可以满足RT-PCR、cDNA-AFLP等分子生物学实验的要求。

改良Giemsa法和硼酸美蓝法检测幽门螺杆菌感染的临床比较

目的探讨改良Giemsa法和硼酸美蓝法在检测胃幽门螺杆菌(Hp)感染中的应用价值。方法收集80例慢性浅表性胃炎及胃溃疡患者,分别采用改良Giemsa法和硼酸美蓝法检测胃粘膜Hp,以Hp菌培养和C13呼气试验联合检测结果为Hp感染标准,比较两种检测方法对Hp检测的应用价值。结果以Hp菌培养和C13呼气试验联合检测结果为对照,改良Giemsa法检测Hp感染的特异性为100%,敏感性为96.2%(50/52),诊断符合率为97.5%(78/80);硼酸美蓝法检测Hp感染的特异性为100%,敏感性为88.5%(46/52),诊断符合率为92.5%(74/80)。两种方法检测Hp感染的特异性、敏感性及诊断符合率均较高,特异性和诊断符合率比较差异无显著意义(P>0.05),但改良Giemsa法的检测敏感性明显高于硼酸美蓝法(P<0.05)。结论改良Giemsa染色法和硼酸美蓝法具有较高的Hp感染检测特异性和诊断符合率,均为比较理想的常规Hp检测染色法。

白菜花药组织总RNA提取方法比较及其分析

以白菜花药组织为试材,利用异硫氰酸胍法和改良Tris-硼酸法提取花药总RNA。结果显示两种方法提取RNA的产量都较高,异硫氰酸胍法提取纯度低,但省时高效,适用于对模板要求低的RNA提取。而改良Tris-硼酸法提取花药RNA的产量高、质量好、纯度高,适用于mRNA差异显示及基因表达的Northern印迹等的RNA提取。

一种提取荔枝胚中总RNA的方法

用改良的Tris-硼酸法和3S柱式细胞及组织总RNA抽提试剂盒V2.0提取3个荔枝品种胚中的总RNA,经纯度和甲醛变性胶分析,其A260/A280值在1.91～2.02之间,基本完整,未检出明显降解.

顽拗植物龙眼果皮中总RNA的提取方法研究

【研究目的】为建立适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA提取的方法;【方法】采用TRIZOL法、Tris-硼酸法和改良CTAB法提取龙眼果皮的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质;【结果】改良CTAB法、Tris-硼酸法所提取的RNA经电泳检测,28SrRNA和18SrRNA条带清晰,RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致,说明所提取的RNA纯度高、质量好;TRIZOL法所得到的RNA降解严重,没有得到完整的电泳条带;【结论】改良CTAB法和Tris-硼酸法适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA的提取。

菠萝叶片总RNA提取方法的比较

为了探究不同提取方法对菠萝叶片组织总RNA提取质量的影响,以‘台农16号’菠萝品种的叶片为材料,采用改良Tirs-硼酸法、改良SDS法、试剂盒法提取菠萝叶片组织总RNA,并对提取的总RNA浓度、OD260/OD230、OD260/OD280、琼脂糖电泳结果进行了比较分析。结果表明：改良Tris-硼酸法和试剂盒法能较好地去除菠萝叶片组织的多糖、皂苷元、蛋白质以及纤维等次生代谢物质,OD260/OD230大于2.000,OD260/OD280在1.900~2.100之间。改良SDS法提取总RNA产率最高,达到290.9μg/m L。试剂盒法提取总RNA产率为30.1μg/m L,远小于其它2种提取方法所得总RNA产率。改良Tris-硼酸法所得电泳图谱条带完整度最好。比较分析3种提取总RNA方法的结果,以改良Tris-硼酸法提取总RNA的效果较理想,可满足后续研究工作的需要。

观赏海棠不同组织中RNA的几种提取方法

以观赏海棠不同组织为试材,用常用的CTAB法、异硫氰酸胍法及Tris-硼酸法,比较其提取RNA的质量和纯度。结果表明:CTAB法提取RNA成本低、RNA质量较高;异硫氰酸胍法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高;而Tris-硼酸法则较不适合于果实类多酚多糖组织的RNA提取。

棉花纤维RNA提取方法的比较及酵母双杂交文库的构建

为了从棉花纤维中提取高质量的RNA用于构建酵母双杂交文库,采用4种不同的方法提取9天和19天棉花纤维的RNA。琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测结果表明:热硼酸法适用于初生幼嫩纤维和次生加厚纤维的RNA提取,CTAB-PVP法仅适用于初生幼嫩纤维的RNA提取,异硫氰酸胍法和高盐高pH值法提取的RNA由于杂质含量较多而影响反转录效果。采用热硼酸法大量提取总RNA,纯化后的mRNA反转录为cDNA,通过重组将扩增的cDNA片段定向插入到pGADT7-RecAD克隆载体中,得到棉纤维9天和19天的酵母双杂交cDNA文库。2个文库的滴度分别是1.01×107cfu/mL和8×106cfu/mL,cDNA插入片段长度集中分布在250～2500bp之间。由此可以看出,构建的2个棉纤维文库质量较高,可用于棉花纤维素合成和调控途径的研究。

三种直接胆红素检测系统的性能评价

目的对钒酸盐氧化法、改良J-G法和3,5-二氯苯重氮四氟硼酸盐法(3,5-DCB-4FB)检测直接胆红素(DBil)进行性能评价,探讨3,5-DCB-4FB法是否适用于DBil检测。方法用钒酸氧化法、改良J-G法和3,5-DCB-4FB法分别测定血清DBil,探讨3种方法的精密度、线性、敏感性、抗干扰性和回收率。并分别与Doumas法(手工)进行比较。结果 3种方法平均精密度均在1%～5%之间;平均回收率为103.28%、99.04%、100.69%;线性范围(敏感性)为1.06～335.10μmol/L(1.06)、1.01～310.00μmol/L(1.01)、0.76～310.00μmol/L(0.76)。钒酸盐氧化法抗血红蛋白(Hb)干扰能力优于后2种方法;3种方法与Doumas法进行比较具有良好相关性(r2>0.975),医学决定水平处的系统误差(SE)分别为-9%、-7%、-1.1%。结论 3,5-DCB-4FB法具有良好的精密度、敏感性、抗干扰能力、线性范围和相关性,与改良J-G法具有很好的一致性。3,5-DCB-4FB法适用于临床常规检测。

NaHCO_3胁迫下刚毛柽柳叶片蛋白质差异表达谱的建立

【目的】为了研究刚毛柽柳响应盐胁迫的作用机制,本研究以刚毛柽柳叶片为材料,对叶片总蛋白质的提取方法进行优化,探究出适用于双向电泳的刚毛柽柳叶片总蛋白质的提取方法,并建立NaHCO_3胁迫下刚毛柽柳叶片差异蛋白质的表达谱。【方法】本研究比较了改良Tris-三氯乙酸,改良Tris-三氯乙酸+PVP40,改良Tris-三氯乙酸+丙酮和植物蛋白提取试剂盒法4种提取植物蛋白质的方法提取刚毛柽柳叶片总蛋白质的差异,并利用蛋白质双向电泳用技术研究NaHCO_3胁迫后刚毛柽柳叶片蛋白质表达变化,建立了盐胁迫下刚毛柽柳叶片差异蛋白表达谱。【结果】采用改良Tris-三氯乙酸法提取刚毛柽柳叶片蛋白质,利用该方法可获得高质量的蛋白质样品,所得到的双向电泳凝胶图谱中蛋白质分离效果好、图谱分辨率高,通过Image Master 2D Platinum 7.0凝胶分析软件对NaHCO_3处理0和12 h的双向电泳凝胶图谱进行分析,获得了25个响应盐胁迫的差异表达蛋白质,并分析了差异表达蛋白量的变化。【结论】研究结果表明,利用改良Tris-三氯乙酸法提取刚毛柽柳叶片蛋白质适用于双向电泳体系,该方法可以用于对刚毛柽柳叶片蛋白质组学的研究。本研究建立了NaHCO_3胁迫下刚毛柽柳叶片差异蛋白质的表达谱,为进一步分析刚毛柽柳耐盐分子机制奠定了基础。