改良Trizol法提取香蕉叶片总RNA

针对香蕉组织中多糖、多酚等次生物质含量高的特点,采用改良Trizol法,成功地从香蕉叶片中提取了总RNA。所提取的总RNA A260/A280和A260/A230值分别为1.91和2.10。电泳检测显示28 s、18 s条带完整清晰,以此RNA为模板进行RT-PCR,结果成功得到目标特异条带。试验结果表明:改良Trizol法具有方便快捷、完整性好、受多糖多酚影响较少以及无DNA和蛋白质污染等优点,对具有香蕉叶片类似成分的其他作物的RNA提取具有一定的借鉴意义。

改良Trizol法提取高质量蒙古沙冬青总RNA

以木本植物蒙古沙冬青的叶片和根为材料,采用改良Trizol法提取总RNA。结果表明,与传统Trizol法相比,改良Trizol法能有效去除提取过程中残留的异硫氰酸胍、β-巯基乙醇以及植物本身的糖、酚类物质,获得高质量总RNA。改良Trizol法提取总RNA技术已被成功应用于蒙古沙冬青转录组数据库的建立。该方法可为木本植物提取高质量RNA提供借鉴。

改良Trizol法快速高效提取香石竹总RNA

因为多糖等大分子的污染,传统Trizol法难以从香石竹的叶片中获得完整RNA。本研究以香石竹为材料,对传统的Trizol法进行改良,成功地从香石竹花瓣和叶片中提取了总RNA,经琼脂糖电泳,紫外分光光度计测定总RNA完整性好,纯度大,花瓣的OD260/OD280=1.96,每0.1g花瓣可获得RNA61μg,叶片RNA的OD260/OD280=1.94,每0.1g幼叶可获得RNA33μg,花瓣的RNA产量普遍高于叶片。经改良Trizol法提取的被香石竹斑驳病毒侵染的植株的花瓣和叶片的总RNA,经RT-PCR获得了特异性条带,说明用改良Trizol法从香石竹花瓣和叶片中提取的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于香石竹进一步的分子生物学研究。

改良Trizol法提取尖孢镰刀菌RNA

西瓜枯萎病是西瓜的主要病害之一,其病原是尖孢镰刀菌。用经典Trizol法提取RNA的质量不能满足研究尖孢镰刀菌RNA的需要,而改良Trizol法提取的RNA杂质少,质量高,浓度也有所提高,完整性较好。试验结果表明,改良Trizol法可以满足研究尖孢镰刀菌RNA的需求。

改良TRIZOL法提取真菌RNA的方法

本研究首次采用改良TRIZOL法,成功地从稻曲病菌中提取了总RNA,其总RNA具有完整性好、纯度高和产量大的特点,能进一步满足RT-PCR等分子生物学实验的需要。此外,该方法也适用于其它富含多糖、蛋白、酚类等物质的总RNA的提取。

改良TRIZOL法提取高质量稻曲病菌总RNA的方法

首次采用改良TRIZOL法,成功地从稻曲病菌中提取了总RNA,其总RNA具有完整性好、纯度高和产量高的特点,能进一步满足RT-PCR等分子生物学试验的需要。此外,该方法也适用于其他富含多糖、蛋白、酚类等物质的总RNA的提取。

改良TRIzol法高效提取东北林蛙皮肤总RNA

目的:建立一种从两栖动物皮肤组织中提取高质量总RNA的方法。方法:改良传统TRIzol法,提取皮肤总RNA,紫外分光光度计测定RNA纯度和得率,1.1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。结果:改良方法提取的总RNA,其A260/A280值在1.8～2.1之间,A260/A230大于2;琼脂糖凝胶电泳显示清晰的28s rRNA和18s rRNA条带,且28s rRNA条带亮度约为18s rRNA的2倍。结论:改良TRIzol法提取的总RNA纯度高、完整性好、杂质少、得率大,易于操作掌握,可以用于相应的分子生物学试验。

改良Trizol法提取富含花青素马铃薯块茎的总RNA

富含花青素的马铃薯块茎因含有大量多糖和多酚类次级代谢产物而难以大量提取高质量的总RNA。本研究以紫色和红色马铃薯为材料,利用改良Trizol法实现了块茎总RNA的快速高质量提取。试验结果表明,在Trizol法中添加2%(V/V)"-巯基乙醇、0. 75%(W/V)十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和7. 5%(W/V)醋酸钾(KOAc),可以有效去除多糖、多酚类物质,获得高产、完整的总RNA。改良Trizol法提取时间短、操作方便,提取的RNA通过了actin RT-PCR和18S rRNA RT-q PCR检验,可以用于后续的分子生物学试验。

改良TRIzol法高效提取钉螺组织总RNA

目的解决钉螺组织中总RNA提取难度大的问题,建立一套适合钉螺组织总RNA提取方法。方法采用改良TRIzol法从钉螺组织中提取其总RNA,并与传统TRIzol法提取结果进行比较。结果本方法优于传统TRIzol法,能够在钉螺组织中提取出完整性好、纯度高的总RNA,其A_(260)/A_(280)在1. 9～2. 0之间,A_(260)/A_(230)在1. 8～1. 9之间,电泳结果表明获得总RNA 28S、18S及5S条带清晰完整,无弥散现象;同时,选取β-acting基因检测,电泳结果表明所得总RNA的质量符合钉螺RT-PCR检测的实验要求。结论本方法便于实施,重复性好,适合钉螺组织总RNA提取,同时为改良优化传统TRIzol法提取其他医学贝类组织总RNA提供了研究思路。

油茶叶片总RNA提取的改良Trizol法及比较

为了探讨油茶叶片高质量RNA的提取方法,改良了常规的Trizol法提取RNA的条件。运用常规Trizol法、改良Trizol法、常规的SDS法、常规异硫氰酸胍法和常规CTAB法提取油茶叶片总RNA,并运用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳分析方法比较了各种样品RNA的质量。本研究表明,常规Trizol法、常规的SDS法、常规异硫氰酸胍法和常规CTAB法提取油茶叶片总RNA的质量较差,改良Trizol法二在RNA提取时加入了PVP和巯基乙醇和氯化钠,能很好地去除油茶叶片中多糖和多酚物质,获得的总RNA质量高,完整性强,可以用于反转录和基因扩增分析。本研究将为油茶的分子生物学研究提供帮助。

2种大豆总RNA提取方法的改良

对大豆总RNA的提取方法T rizo l法和异硫氰酸胍法进行了改良,比较了改良前后2种方法的提取效果。结果表明,2种改良方法提取的大豆总RNA质量较高、完整性较好,完全可以满足后续研究要求,RNA产率均超过220μg/g。改良T rizo l法适用于大豆根、茎、叶及生长点总RNA的提取,而改良异硫氰酸胍法适用于大豆根、茎及生长点总RNA的提取。

改良破壁法提取白假丝酵母菌总RNA的应用评价

目的评价改良破壁法提取白假丝酵母菌总RNA的效果。方法选取白假丝酵母菌质控菌株ATCC SC5314及临床分离鉴定菌株4株(编号为NX1、NX2、NX3、NX4),选用改良Trizol破壁法(Trizol加钢珠匀浆震荡混匀破壁法)及溶壁酶(Lyticase)破壁法提取白假丝酵母菌的总RNA,用核酸蛋白测定仪检测RNA的浓度及纯度,并用荧光定量PCR检测管家基因18S rRNA。结果改良Trizol破壁法提取白假丝酵母菌总RNA的浓度、纯度及18S rRNA扩增产物的Ct转化值均高于Lyticase破壁法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论改良Trizol破壁法破壁提取白假丝酵母菌的总RNA具有浓度好、纯度高的优点,且该方法简便、快速、经济,值得临床及科研推广使用。

橡胶树白粉菌收集及DNA和RNA提取方法比较

橡胶树白粉菌(Oidium heveae)是专性寄生的病原真菌,难以获取足量和纯度高的菌体,因而不易提取到足够多和质量高的核酸,阻碍了该菌的分子生物学研究,目前关于橡胶树白粉菌核酸提取方法少有报道。采用软毛笔刷取和醋酸纤维乙酯撕取两种方法收集白粉病菌。在尝试使用常规的菌物RNA提取方法基础上,通过优化操作步骤、方法等,研究出改良的Trizol法,用该法能高效率提取到纯度高的橡胶树白粉菌RNA。比较不同DNA提取方法的效率,推荐使用得率高、纯度好的OMEGA FungalDNA kit提取法,用于提取橡胶树白粉菌的DNA。

番茄果实总RNA提取方法的优化

针对番茄等果实的特殊性,对商品化Trizol试剂盒提取总RNA的方法进行适当的改良:液氮研磨后加入预处理液除去果实中大部分糖类等次级代谢物质,裂解时加入β-巯基乙醇抑制酚类等物质的氧化,从富含多糖、多酚的番茄、枣果肉中成功提取总RNA。与其它方法相比,该改良方法具有操作步骤简单、快速等优点。利用RT-PCR技术,从所提取RNA中成功克隆出ζ-胡萝卜素脱氢酶基因片段,进一步表明其质量可以完全满足分子生物学研究的要求。

一种高效同时提取微量组织中总RNA、DNA和蛋白的技术方法的改进

目的改进传统Trizol法,以至能从微量组织样品中提取高质量RNA并同时提取基因组DNA和总蛋白。方法用改良后的Trizol法提取小鼠肝脏组织总RNA、基因组DNA以及总蛋白,并与传统Trizol法提取总RNA、商业化试剂盒提取基因组DNA和RIPA裂解Buffer提取总蛋白的方法进行比较。结果改良Trizol法提取小鼠肝组织RNA的得率为3.64μg/mg,传统Trizol法为1.95μg/mg,平均D260/D280比值为2.1和2.01;改良Trizol法能够得到比传统Trizol法更完整的RNA,琼脂糖电泳图谱中28S/18S的比值更接近2:1。改良Trizol法与商业试剂盒相比,提取所得的基因组DNA尽管在得率上有较明显差距,分别为0.49μg/mg和1.78μg/mg,但仍保持较好的纯度。改良Trizol法提取所得蛋白的平均得率为RIPA Buffer裂解法的50%～60%,经过SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色法验证,并无明显蛋白丢失。结论改良Trizol法可以同时提取组织的总DNA、RNA与总蛋白,相比传统Trizol法提取总RNA更高效、质量更优;相比商业化试剂盒提取基因组DNA更快捷、更经济;相比RIPA Buffer裂解法提取总蛋白在小分子蛋白的保留中更好。

三色堇花瓣总RNA3种提取方法的比较

分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测。结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高。3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260 nm/D280 nm在1.83～2.03之间。以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验。

罗汉果果实总RNA提取方法的比较研究

针对罗汉果果实富含多糖和多酚类物质的特点,以广西罗汉果代表种质青皮果种的果实为材料,比较了改良Trizol法、改良异硫氰酸胍法、改良CTAB法和常规Trizol法4种不同的总RNA提取方法的提取效果。结果表明,改良Trizol法所提取的RNA呈现28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3条清晰的谱带,且28S条带宽度接近18S的2倍,纯度高(D260/D280=2.01;D260/D230=2.02),完整性好(RIN=9.50),得率为(260.00±19.47)μg·g-1。RT-PCR结果进一步表明,改良Trizol法提取的RNA完全能够用于后续的分子生物学研究。

青蒿不同部位总RNA提取方法比较

为从青蒿中提取高质量的RNA,以青蒿叶片、茎、根和花为材料,采用TRIzol法、改良TRIzol法、十六烷基三甲基溴化铵-Li Cl(CTAB-Li Cl)法、CTAB-异丙醇法4种方法,比较不同材料不同方法分离RNA的效果。结果表明,4种方法所提RNA纯度均较高,其中改良Tri Zol法所提RNA质量最好。

三种提取酿酒葡萄不同组织总RNA的方法比较

通过对比改良SDS-酚法、改良CTAB法和改良Trizol法3种RNA提取方法,提取"赤霞珠"(‘Cabernet Sauvignon’)葡萄芽、叶片和果皮RNA的质量及浓度,并进一步分离、纯化得到较高质量的RNA。结果表明:改良SDS-酚法与改良CTAB法适用于芽和叶片的提取,可以获得较好质量、高浓度的总RNA,其28S与18S亮度极高,5S清晰可见,完整性较好;改良Trizol操作环节较少,省时,质量好,条带锐利,可清晰看出28S与18S亮度比为2∶1,虽提取的样品浓度较低,但足以供下一步研究使用。

一种有效的菊花总RNA提取方法

菊花组织或器官中含有大量的酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质,影响了菊花总RNA的提取质量。用改良TRIZOL法提取菊花不同器官总RNA,并用凝胶电泳、紫外分光光度计对提取的总RNA质量和完整性进行检测,并对叶片总RNA进行反转录,通过RT-PCR扩增了菊花管家基因Actin的部分片断。结果表明,采用改良TRIZOL法提取的RNA条带清晰、完整性好、质量高,其中A260/A280比值为2.08～2.19。通过RT-PCR从叶片中扩增出了目的基因cDNA片断。该方法是一种快速、有效的提取菊花总RNA的方法;该方法适用于根、茎、叶、花等器官或组织总RNA的提取,可作为菊花不同组织和器官总RNA提取的通用方法。