改进的ISTA麦醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳方法在小麦品种真实性和纯度鉴定中的应用

本研究以小麦品种为材料,在ISTA麦醇溶蛋白的标准电泳程序基础上,对其进行了改进,凝胶浓度由10%增加为16.5%,既提高了分辨率,又使得剥胶容易。同时,凝胶交联度由4%降为3.3%,硫酸亚铁的浓度也有所降低,增加了胶的韧性。凝胶溶液中过氧化氢的量经过多次试验,也进行了定量,由原来的少量定量为70μl,从而形成了一套适合于一般实验室就可进行小麦品种真实性和纯度鉴定的方法,并将其应用于小麦种子的真实性和纯度的快速鉴定中。

聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测马铃薯类病毒技术的改进

利用往复聚丙烯胺凝胶电泳方法进行类病毒的检测 ,通过对电泳技术的改进和使用液氮研磨、加入皂土等方法改变核酸的提取 ,使该方法在检测灵敏性、准确性、操作性和可行性上都得到了提高 。

小麦醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的改进及应用

在国际种子检验协会(ISTA)及国家农作物种子检验规程(GB/T3543—1995)颁布的小麦种子醇溶蛋白PAGE电泳技术鉴定品种的标准程序基础上,对溶液的配制、凝胶浓度、电泳方式等影响电泳效果的主要因素进行了研究和改良,使其操作更加简单快捷、凝胶质量好、剥胶容易、分辨率高,比原方法更具可操作性。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离拟南芥叶片实验教学的改进

目的:改进拟南芥叶片的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离方法。方法:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离拟南芥叶片。主要比较和分析了两种样品溶解液和两种染色方法对实验的影响。改进的样品溶解液可防止样品的损失,节约样品和试剂;改进的染色方法操作时间短,灵敏度高,分离条带多且清晰。结论:改进的实验方法可以得到更为灵敏、清晰的实验结果,同时节约了实验经费和实验时间,减少了实验准备人员的工作量,更好地适应和促进了实验教学工作。

DNA变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验教学改进

DNA变性聚丙烯酰胺凝胶电泳在现代生物技术中的地位十分重要,但在实验中,聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作难度比较大,影响因素比较多,耗时比较长。为了使DNA变性聚丙烯酰胺凝胶电泳适合于实验教学,对聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术相关操作流程进行了研究和探索,对实验进行了改进和优化。改进和优化后的实验操作简易、详细,试剂配方更合理,成功率得到提高,学生能在4学时内完成,为进行实验教学提供了基本条件。

玉米改良单交种的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

利用改进的聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对改良掖单 19( 80 0 1× 52 10 6)、原掖单 19( 4 78×52 10 6)及亲本 80 0 1、 4 78、 52 10 6种子清蛋白 (Albumin)进行了研究。改良掖单 19共分离出 18条清蛋白谱带 ,除了 7条是双亲都有的公共带外 ,其余 11条是分别来自于双亲的互补带 ,其中4条来自 80 0 1,7条来自 52 10 6,没有新生带的产生 ,在A区和B区表现双亲共显性 ,在C区表现偏父类型 ;原掖单 19共分离出 16条清蛋白谱带 ,比改良掖单 19少两条 ,在谱带分布上也存在明显差别。改良掖单 19与原掖单 19的清蛋白谱带彼此不能相互替代。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进

针对常规的SDS-PAGE染色脱色耗时长,还需使用甲醇的缺点,对传统的SDS-PAGE染色脱色进行了改进,用无毒的乙醇替代有毒的甲醇.改进后的SDS-PAGE染色脱色具有耗时短,且不需要使用甲醇的优点.

轮状病毒性腹泻的快速诊断——聚丙烯酰胺凝胶电泳检测病毒核酸方法的改进

作者对 Herring 氏等(1982)和江杰元等(1985)报道的聚丙烯酰胺凝胶垂直板连续电泳作轮状病毒感染快速诊断方法加以改进。把聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳改为聚丙烯酰胺凝胶柱圆盘电泳;把电极缓冲液由 Tris--磷酸缓冲液改为Tris—甘氨酸缓冲液,使电泳时间由17小时缩短至70分钟,银染时间由2小时缩短至30分钟;又制备聚丙烯酰胺凝胶柱比制备凝胶垂直板方法简单,且可节约胶料一半。结果,除保持诊断的正确性和检出率外,核酸线条更为清晰,我们用改进的方法和 Herring 氏等报道的方法同时检测了42份仔猪腹泻粪样,12份犊牛腹泻粪样,28份婴儿腹泻粪样和4株猪轮状病毒的细胞培养毒,两者阳、阴性的符合率达100%。

SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法改进

[目的]改良SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术,提高大规模SSR分子标记分析的工作效率。[方法]在利用SSR标记构建中国春/兰考大粒F2群体遗传图谱的基础上,对变性PAGE点样方法进行改进,并对中国春/兰考大粒筛选的122对差异引物进行组合分析。[结果]试验表明,引物扩增条带特异性强、覆盖范围不大即可采用两次点样法分析;两次点样和单次点样的凝胶扩增条带均清晰可辨;分析相同数量的样品,两次点样法较单次点样法节约了41%的试验时间,节约了50%的试剂用量。[结论]两次点样法简化了试验步骤,节约了试验成本,加速了试验进程,更适用于遗传作图。

聚丙烯酰胺凝胶电泳银染的影响因素

聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳是一种常用的DNA检测方法,广泛应用于现代生物技术研究。PAGE电泳中的银染技术复杂,银染过程中所要用到的聚丙烯酰胺、过硫酸铵、硝酸银等几种药品的浓度和作用时间直接影响实验效果。6%的凝胶分辨率较高;0.2%比0.1%硝酸银显带灵敏度高;甲醛浓度在0.1%～0.2%(体积比)范围内显色差异不大;1.5%和3%氢氧化钠显色结果无差别;10 mg/mL的硫代硫酸钠用量应为100～200μL/L;弱碱、强碱和改良银染法各有其优缺点,研究者可根据研究需求选择适合的银染方法。弱碱法染色背景浅,适于品种指纹图谱分析。强碱法及简易银染法具有高效率、低成本和操作简便的特点,适用于分子标记辅助育种。

琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳在SSR鉴定杂交油菜种子纯度中的比较

对3对候选引物SR85、SR332、SR407所扩增的秦优33杂交种及其父母亲本的DNA-SSR片段进行琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。两种电泳检测结果比较表明,(1)利用琼脂糖凝胶电泳分离后,3对候选引物对杂交种所扩增的SSR条带均为父母亲本条带的互补。其中引物SR332所获的两条互补条带的迁移率相差大,电泳图谱能清晰鉴别出父本、母本及杂种植株。引物SR85和SR407杂交种的互补条带迁移率相近,在鉴定中易出现人为误差。(2)利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,引物SR332所扩增条带未能区别杂交种与父本植株。引物SR85和SR407对杂交种所扩增的条带均为父母亲本所扩增条带的互补,相互差异显著,条带清晰稳定。可见,琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳都是SSR技术鉴定种子纯度的有效途径,种子纯度分析应根据区别材料的遗传关系和引物分析表现来选择不同的电泳介质。

聚丙烯酰胺凝胶电泳的快速脱色方法

以牛血清白蛋白为材料进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),凝胶固定后,用考马斯亮蓝R-250染色后比较传统脱色液(冰乙酸-甲醇溶液)和不同盐溶液(NACL、KCL、CUCL2)的脱色效果的结果表明:PAGE和SDS-PAGE胶,0.25和0.5MOL·L-1NACL,在70℃(PAGE)、50℃(SDS-PAGE)下脱色,约2￣4H,效果好,灵敏度高,背景低。

聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和均一凝胶电泳在分离及鉴定植物SOD同工酶中的比较研究

比较了聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳(GPGE)和均一凝胶电泳(PAGE)在分离和鉴定SOD同工酶方面的应用.在GPGE中根据Rf值大小可将SOD谱带分为3个区:A区Rf值最小,对SDS敏感,为Mn-SOD;C区Rf值最大,对SDS不敏感,为CuZn-SOD;B区谱带Rf值位于两者之间,对SDS敏感,为Fe-SOD.根据GPGE图谱上谱带Rf值大小和对SDS敏感性来判断SOD类型结果与用抑制剂判断结果一致,它可作为一种SOD类型初步鉴定的简便可行的方法,相同植物材料经PAGE分离后不具备这些特性.在相同牛血SOD浓度下,GPGE检测SOD灵敏度可达10-15mol,PAGE为10-13mol;在1.56×10-12molSOD时,在GPGE中可分辨出4条带,PAGE仅为2条.枸杞Fe-SOD在7.5%胶中Rf值最大,在10%胶中与CuZn-SOD重叠,香橼Fe-SOD、Mn-SOD和朱桔Mn-SOD、CuZn-SOD在10%PAGE中相互重叠,在GPGE中它们都有规律地完全分离,可根据Rf值大小鉴别SOD类型.通过2次电泳阐明了GPGE分离和鉴定SOD的可靠性,它能有效地分离和鉴定在PAGE上重叠的3种SOD类型.

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽

目的 研究 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)显示小分子多肽的方法 .方法 观察不同方法处理的样品 ,上样量对电泳结果的影响及对分子量标准 (Mr 2 5 12～ 16 949)进行直线回归分析 .结果 样品的不同处理条件未见有差异 ;在该实验系统条件下上样样品为每孔 5～ 10μg较佳 ;分子量标准直线回归系数 r=- 0 .96 2 .结论 样品处理方便 ;上样量少 ;在 16 0 g· L- 1 T,6 0 g· kg- 1 C较低的丙烯酰胺含 6 mol· L- 1脲的分离胶中能够显示 Mr为 2 5 12的多肽 。

不同产地桔梗的聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱鉴别研究

目的建立不同产地桔梗药材的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)指纹图谱鉴别方法。方法蛋白质(Pro)、过氧化物酶同工酶(POD)、酯酶同工酶(EST)PAGE指纹图谱分析。结果不同产地桔梗的Pro-PAGE图谱差异极小;POD-PAGE与EST-PAGE图谱在谱带分布及数量上均具有显著性差异,分别具有各自的鉴别谱带。结论POD-PAGE与EST-PAGE指纹图谱可作为鉴别不同产地桔梗的有效方法。

微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)银染法的改良

为了筛选和检测绵羊种群中具有较好表现的微卫星多态性,采用Touch-downPCR方法扩增绵羊基因组上的微卫星DNA序列后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,采用改良的银染法对微卫星位点进行多态性检测,染色结果与常规银染法相比,该方法具有灵敏度高、背景浅、污染小、条带清晰等突出特点,能有效地控制染色背景,显著提高检测分辨率,整个染色过程所需时间短,具有广泛的推广价值。

新聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测大豆脂氧酶缺失方法

通过对传统SDS-PAGE电泳技术中样品前处理及制胶技术的改进,开发出了一种能够清晰鉴别Lox-1与Lox-2同工酶的SDS-PAGE电泳快速检测新技术。利用新改进的方法,在289个CS8000(♀)×FJ307(♂)F2杂交后代中,选拔出Lox-1,-2,-3同工酶完全缺失的个体27株,以及Lox-1,-3和Lox-2,-3缺失中间材料若干株。证明新改进方法可以缩短杂交后代脂氧酶缺失个体筛选进程,提高筛选精度,降低筛选成本。

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法的选择

目的比较4种聚丙烯酰胺凝胶银染方法,为初次使用者选择方法时提供参考。方法用24 mer的引物作为上样样本,分别采用氨水法、低浓度硝酸银法、0.1%及0.2%硝酸银法染色。后2种配合不同的显色剂显色。结果前2种未显色,0.1%及0.2%硝酸银可显色。结论0.2%的硝酸银与氢氧化钠显色剂相结合具有最高的灵敏度;0.2%的硝酸银与碳酸钠显色剂相结合具有最佳的显像效果。

小麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的简化研究

在ISTA小麦和大麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定品种的标准程序的基础上 ,对影响电泳效果的各主要因素进行逐一筛选、改进 ,尤其是实验设计的NaOH 醋酸 甘氨酸缓冲系统和先低后高再低的电泳方式使此项技术具有快速、分辨率较高、重复性较好、易剥胶、操作简单、经济实用等优点 ,适于一般实验室利用小麦种子醇溶蛋白技术对小麦进行大量的快速简捷的筛选、鉴定等初步研究。

人参水溶性蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱研究

目的:建立人参药材的水溶性蛋白 SDS—PAGE 指纹图谱,为人参药材的质量评价提供依据。方法:采用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法得到人参水溶性蛋白的电泳胶片,通过凝胶电泳图像分析软件生成谱图后,经计算机辅助相似度评价系统进行评价,并得到对照指纹图谱。结果:人参水溶性蛋白有9个特征带峰,12批次人参药材的相似度在0.90～1.0之间,稳定性、重复性和精密度良好。结论:该法具有实验设备简单、专属性强、灵敏度高、更直观的特点,可作为人参水溶性蛋白的 SDS—PAGE 凝胶指纹图谱,用于人参药材的质量评价。