蛋清溶菌酶的改造及其抑菌活性

本研究旨在探讨高温酸性改造的蛋清溶菌酶对两种革兰阳性菌G^(+)(金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis)和两种革兰阴性菌G^(-)(大肠杆菌Escherichia coli、鳗弧菌Vibrio anguillarum)的抑制作用。采用高温(57.0±0.1)℃、pH 2.0条件对蛋清溶菌酶进行改造,透射电镜观察改造蛋清溶菌酶的超微结构,8-苯胺基-1-萘磺酸(ANS)测定蛋清溶菌酶改造前后疏水性的变化,圆二色谱法与BeStSel软件分析改造后溶菌酶二级结构的改变,并采用牛津杯法测量改造后蛋清溶菌酶对供试菌的抑菌直径,生长曲线测定法测定改造后蛋清溶菌酶的最小抑菌浓度,Western blot检测4种供试菌菌液与菌体中溶菌酶含量变化。透射电镜结果显示,改造后蛋清溶菌酶为短杆状纤维结构;ANS和圆二色谱法结果显示,改造后蛋清溶菌酶疏水性增强,β折叠含量提高31.7%;牛津杯法显示,改造后蛋清溶菌酶对试验菌的抑菌强弱为鳗弧菌>枯草芽胞杆菌>金黄色葡萄球菌>大肠杆菌;生长曲线测定结果发现,鳗弧菌最小抑菌浓度为8μmol·L^(-1),大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽胞杆菌的最小抑菌浓度为6μmol·L^(-1);Western blot发现菌液中改造蛋清溶菌酶分子质量未发生改变,而菌体中溶菌酶含量和分子质量发生改变,革兰阳性菌和阴性菌均在10 ku处出现条带,且革兰阳性菌在22 ku处溶菌酶含量增加,但菌液上清均仅在14.3 ku处有条带。结果提示,改造蛋清溶菌酶对革兰阳性菌和阴性菌均具有较强的抑菌效果,为改造蛋清溶菌酶在畜牧业中的应用提供了基础数据。