两种链格孢霉变应原提取方法的比较

目的比较传统方法和新方法对链格孢霉变应原浸出液蛋白质含量、组分及生物活性的影响。方法将经空气曝皿获得、中国科学院鉴定为链格孢霉的菌株于26℃恒温下培养4周,取12份5 g湿重的菌苔,6份用传统方法(风干,高速粉碎机粉碎后,搅拌提取),6份采用新方法(液氮研磨+超声破碎,再搅拌提取)提取蛋白质;然后用改良的Bradford法进行蛋白质含量测定:SDS-PAGE分析两种方法提取的蛋白质组分的差别,放射性变应原吸附(RAST)抑制试验比较两者间变应原生物活性的差异。结果传统方法和新方法提取的蛋白质含量分别为(0.205±0.019)和(0.532±0.023)g/ml,所得到变应原的50%抑制率分别为5.96和1.25μg/ml。结论两种提取方法中,新方法能够得到较高的蛋白质含量及更多的蛋白质组分,对于低丰度蛋白的获得及生物学活性即效价的提高具有十分重要的意义。

螨变应原点刺制品生物活性测定方法

目的探讨以荧光酶联免疫竞争抑制法(简称Uni CAP法)代替放射性吸附抑制试验(radioallergosorbent test,RAST)测定螨变应原点刺制品生物活性的可行性。方法分别将螨变应原皮肤点刺制品中屋尘螨、粉尘螨点刺液及相应参考品进行系列稀释后,分别与等体积尘螨阳性血清混合,并设阴性对照及100%抑制对照。分别采用γ放射免疫计数器(RAST法)和Immuno CAP 100E全自动过敏原分析仪(Uni CAP法)测定特异性Ig E(s Ig E)浓度,计算点刺样品的生物活性。结果采用Uni CAP法测定结果的RSD值均低于20%。粉尘螨点刺液用两种方法测定的结果基本一致,而屋尘螨点刺液的结果相差较大,但均在标准范围内。结论以Uni CAP法替代RAST法测定点刺液活性具有可行性,可缩短制品的检验时限,并减少了对操作人员及环境的危害。