芍药苷对大鼠放射性肝纤维化的保护作用和机制研究

目的探讨芍药苷对大鼠放射性肝纤维化的保护作用及机制。方法建立雄性SD大鼠放射性肝纤维化实验动物模型,将大鼠随机分为正常对照组、模型组、芍药苷治疗组(20、40、80 mg·kg-1),每组10只。除正常对照组外,其余各组均制备成放射性肝纤维化模型,造模后各组每天给予相应药物灌胃。于照射后第26周末处死大鼠,检测大鼠血清中AST、ALT的活性,ELISA法测血清中TGF-β1、HA、PC-Ⅲ、LN含量;光镜下观察肝脏HE染色、MASSON染色病理改变;碱水法检测大鼠肝脏组织中羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组化法测肝脏组织TGF-β1、Smad3/4/7蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,模型组大鼠肝脏损伤和胶原纤维增生明显,其血清中AST、ALT活性明显升高,血清中TGF-β1、HA、PC-Ⅲ、LN含量明显增加,大鼠肝脏组织中Hyp含量增加,另外大鼠肝脏组织中TGF-β1、Smad3/4/7蛋白表达增加。与模型组比较,芍药苷治疗组可明显抑制大鼠血清中AST、ALT活性的升高,降低血清中TGF-β1、HA、PC-Ⅲ、LN的含量,降低肝脏组织中Hyp含量,减轻肝脏损伤程度及胶原纤维增生程度;芍药苷治疗组可减少大鼠肝脏组织中TGF-β1和Smad3/4/7蛋白表达。结论芍药苷具有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与其阻断TGF-β1/Smad信号传导通路有关。

Smads蛋白家族在大鼠放射性肝纤维化形成过程中的表达

目的 探讨Smad2/3/7、TGF-β1蛋白在大鼠放射性肝纤维化（RHF）形成过程中的表达情况.方法 建立雄性SD大鼠RHF模型.将实验大鼠随机分为正常对照组、照射组（2周、4周、8周、12周、26周）,除正常对照组外,其余各组大鼠均制备成RHF模型.在照射后第2周、4周、8周、12周、26周末,分别剖检各组大鼠,取肝脏标本备用.光学显微镜下观察大鼠肝脏组织HE染色变化,免疫组织化学法测大鼠肝脏组织Smad2/3/7、TGF-β1蛋白含量表达.结果 与正常对照组相比,照射组大鼠肝脏损伤及纤维化程度明显增加,肝脏组织免疫组织化学Smad2蛋白含量增加（P＜0.05）,Smad3、TGF-β1蛋白含量明显增加（P＜0.01）,Smad7蛋白含量明显减少（P＜0.01）.结论 随着大鼠RHF的加重,Smad2/3、TGF-β1蛋白表达增加,Smad7蛋白表达下调.

益气活血中药对放射性肝损伤的保护作用及对肝纤维化指标的影响

目的探讨益气活血中药对原发性肝癌患者放射性肝损伤的保护作用及对肝纤维化指标的影响。方法选择原发性肝癌患者88例,按照就诊序号奇偶分为对照组和实验组各44例。两组患者均行肝动脉化疗栓塞术联合三维适形放疗治疗,实验组在放疗期间增加益气活血中药,对照组放疗期间口服复方丹参片和熊去氧胆酸,均连续服用3个月。比较治疗后两组患者近期临床疗效及放疗过程中肝功能损害和骨髓抑制发生情况;检测血清甲胎蛋白(AFP)及透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNC)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)及层黏连蛋白(LN)等肝纤维化指标水平。结果治疗后对照组总有效率为61.36%,实验组为65.91%,差异无显著性(P>0.05);治疗前两组患者血清AFP及HA、PⅢNC、ColⅣ、LN水平差异均无显著性(P>0.05);治疗后两组患者血清AFP水平均明显降低,肝纤维化指标HA、PⅢNC、ColⅣ、LN水平均明显升高,且实验组均明显低于对照组(P<0.05);放疗过程中,对照组骨髓抑制和肝功能损害发生率分别为54.55%及63.64%,实验组分别为31.82%和34.09%,均明显低于对照组(P<0.05)。结论放疗期间给予益气活血中药可以延缓原发性肝癌患者肝纤维化的形成,保护患者肝功能,降低骨髓抑制及肝功能损害等毒性反应的发生。

单次剂量照射制备大鼠放射性肝纤维化模型的建立与评价

目的评价单次30 Gy照射制备大鼠放射性肝纤维化模型的可行性、科学性及实用性。方法清洁SD雄性大鼠48只,随机分为照射组(A组)40只、对照组(B组)8只。VARIN 21-EX直线加速器对A组大鼠右肝进行单次照射(30 Gy/次),于照射后第4、8、12、26周处死,每时相点处死8只,B组于第4周末处死。观察大鼠活体外观及肝脏的大体标本,检测大鼠血清中AST、ALT活性,ELISA法测大鼠血清中TGF-β1、HA、PC-Ⅲ、LN含量、HE染色于光镜下观察肝脏组织病理改变、MASSON染色观察大鼠肝脏组织胶原沉积改变;碱水法检测大鼠肝脏组织中Hyp含量,免疫组化法测肝脏组织TGF-β1蛋白表达情况。结果与对照组(B组)比较,A组受照射肝组织表现出放射性肝炎及肝纤维化,照射组大鼠血清中AST,ALT酶活性和TGF-β1水平自第4周明显升高(P<0.05或P<0.01),分别于第8周和第12周达到高峰;照射组大鼠血清中HA、PC-Ⅲ、LN含量和肝脏组织中Hyp含量于照射后第4周显著升高(P<0.05或P<0.01),一直呈上升趋势,照射后26周值最高;照射组大鼠肝脏组织中TGF-β1蛋白表达于照射后第4周也明显升高(P<0.05),照射后第12周达到高峰,第26周开始下降。光镜下可见肝脏病变呈慢性进行性肝纤维化改变。结论单次剂量照射制备的大鼠放射性肝纤维化模型稳定可靠,动物死亡率较低,可以用于实验研究。

益气活血中药对放射性肝损伤的保护作用及对肝纤维化指标的影响评价

目的:评价分析益气活血中药对放射性肝损伤的保护作用及对肝纤维化指标的影响。方法:本次研究中的观察对象均为在本院接受治疗的放射性肝损伤患者,54例患者的入院时间为2016年7月-2017年2月,经过抽签随机分组的方式将上述患者分为两组,对照组患者均接受常规治疗,观察组患者则在上述基础上开展益气活血中药治疗,对两组患者的甲胎蛋白水平与肝纤维化指标进行比较;分析两组患者的临床疗效和不良反应发生情况。结果:观察组患者的甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)明显较对照组低,其层粘连蛋白(Laminin,LN)、Ⅳ型胶原(TypeIVCollagen,ColⅣ)、Ⅲ型前胶原肽(TypeⅢ Procollagen Peptide,PⅢNG)以及透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)均明显较对照组优异,P<0.05;两组患者的总有效概率比较,差异无统计学意义,P>0.05;观察组患者的骨髓抑制发生率和肝功能损害发生率均明显较对照组低,P<0.05。结论:益气活血中药对放射性肝损伤患者有显著功效,有进一步推广实施的价值。

肝纤维化4项在原发性肝癌放疗前后变化的意义

目的回顾性分析笔者医院72例原发性肝癌患者放疗前后肝纤维化4项指标的变化,探讨其与放射性肝损伤的演变关系。方法检测原发性肝癌患者放疗前1天、放疗后2、4、8、12、26周血清中HA、LN、PCⅢ、CⅣ、AST、ALT、ALP、γ-GT、TBIL水平以及肝脏CT的动态变化。结果放疗至第2周,部分患者血清肝纤维化4项水平开始升高,至第12周达峰值,第26周未再持续上升,且与转氨酶水平相比呈正相关,放疗后各时期测得指标同放疗前1天相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论肝纤维化4项可作为放射性肝损伤的判定指标,尤其是早期肝纤维化的预测,为早期治疗提供实验室依据。

急性放射性肝损伤大鼠模型的建立与评价

目的探讨急性放射性肝损伤大鼠模型的建立及TGF-β1动态变化的意义。方法选用雄性SD大鼠40只,随机分为模型组(30只)和对照组(10只)。除对照组外,模型组大鼠右半肝均接受单次6 MV X线25 Gy照射,接受照射第3、5、10天,应用HE染色、透射电镜下观察大鼠右肝病理学变化,血清学检测TGF-β1、肝功能相关指标(ALT,AST,ALP),数据用SPSS 17.0统计软件进行分析。结果在照射第3、5、10天后,电镜下可观察肝脏早期病理学改变;TGF-β1的表达随时间延长而逐渐增加,模型组与对照组比较、不同时间段相比较,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组和模型组的HE染色结果之间无明显差别;肝功能相关指标(ALT,AST,ALP)不同时间点比较无明显统计学意义(P>0.05)。结论电镜下观察肝脏病理学改变早于光镜下的变化,可用于早期放射性肝损伤的评价;TGF-β1较肝功能更加敏感地反映出照射后肝脏的损伤状态,可作为预测急性放射性肝损伤程度的血清细胞因子。

兔肝区组织间插植内照射后肝纤维化过程的动态观察

目的 观察家兔肝脏高剂量率组织间插植内照射后肝纤维化的过程。方法 将家兔分成 4组 :A组 10Gy、B组2 0Gy、C组 30Gy、D组对照组 ,观察内照射后 1周、2周、1月、3月、6月的组织形态变化。 结果 30Gy内照射后半年逐渐出现肝纤维化病变 ,可分为急性放射性肝炎期 (1～ 2周 ) ;肝纤维化前期 (1～ 3个月 ) ;肝纤维化期 (6个月后 )。结论 照射后 6个月 10Gy组肝损伤基本恢复 。

肝纤维化模型的研究述评

动物模型是肝纤维化研究中的一个重要问题,研究肝纤维化的病理生理及其防治必须建立合适的模型。本文介绍了国内外制作肝纤维化模型的常用方法及其优缺点。 1 肝毒质诱导的肝纤维化模型 1.1 四氯化碳（CCl4）诱发的肝纤维化模型CCl4是实验室中最早使用诱发肝纤维化的毒剂。如Cameron曾给大鼠每周2次皮下注射0.1mlCCl4,第6次注射后可见肝纤维化;注射21次后肝硬化已甚为明显,但停止注射后仍可痊愈;注射40次后肝纤维化即不可复原。此法造模时间长。

亚低温对SD大鼠放射性肝损伤的保护作用

目的探究亚低温对SD大鼠放射性肝损伤的保护作用。方法 60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、亚低温预防组及亚低温治疗组,每组15只。除对照组外,其余组对大鼠右半肝进行单次20 Gy照射,亚低温预防组于照射前将大鼠体温降至亚低温状态(肛温32~34℃),亚低温治疗组于照射后将大鼠体温降至亚低温状态(肛温32~34℃)。照射后8周处死大鼠,采用HE染色和Masson染色观察大鼠肝组织病理变化;采集大鼠血标本,检测其肝功能指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)及碱性磷酸酶(ALP)和炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β及肿瘤坏死因子(TNF-α)]变化情况;Western blotting检测大鼠肝组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col1aⅠ)、核因子(NF-κB)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)及蛋白激酶B(AKT)的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肝组织病理损伤严重,血清ALT、AST、ALP、IL-6、IL-1β、TNF-α,肝组织TGF-β1、α-SMA、Col1aⅠ、p-NF-κB/NF-κB、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT水平明显升高(P <0.05);与模型组比较,亚低温处理后大鼠肝组织病理损伤明显减轻,纤维化程度降低,血清ALT、AST、ALP、IL-6、IL-1β、TNF-α,肝组织TGF-β1、α-SMA、Col1aⅠ、p-NF-κB/NF-κB、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT水平明显降低(P <0.05),但亚低温预防组和亚低温治疗组之间无显著差异(P> 0.05)。结论亚低温干预可有效减轻放射性肝损伤,提高大鼠抗纤维化和抗炎能力。

放射性肝纤维化的实验研究中TNF-α、NF-κB p65和TGF-β1动态变化及表达意义

近年来随着放疗技术发展，放疗越来越多地应用于中晚期肝癌患者，然而放射诱导的肝损伤却成为放疗的瓶颈，放射诱导的RILF是放射性肝损伤的最终转归，因此减轻和治疗放射性晚期损伤在放射生物学的研究中越来越重要。目前用于评价及预测RILF的新型特异性细胞因子鲜少报道，本研究通过观察RILF模型大鼠不同时期TNF—α、NF—κB p65及TGF-β1的动态变化，探讨其在RILF发生发展中的作用机制及意义。

赤芍总苷对大鼠放射性肝纤维化的保护作用及机制

目的:探讨赤芍总苷对大鼠放射性肝纤维化的保护作用及机制。方法:雄性大鼠放射性肝纤维化动物模型,将大鼠随机分为正常对照组、模型组、赤芍总苷组(50 mg/kg、25mg/kg),除正常对照组外,其余各组均制备成放射性肝纤维化模型,造模后各组每天给予相应药物灌胃。于照射后第26周末剖杀大鼠,取血和肝脏标本,ELISA法检测大鼠中TGF-β1、TNF-α、IL-6、HA、PC-Ⅲ、LN含量,碱水法检测大鼠肝脏组织中Hyp含量;光镜下观察肝脏HE染色、MASSON染色病理改变;免疫组化法测肝脏组织TGF-β1、Smad3/4/7蛋白表达情况。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肝脏损伤和胶原纤维增生明显,血清中TGF-β1、TNF-α、IL-6、HA、PC-Ⅲ、LN含量明显增加(P<0.01),肝脏组织中Hyp含量增加(P<0.01),肝脏组织中TGF-β1、Smad3/4/7蛋白表达增加(P<0.01)。与模型组比较,赤芍总苷治疗组(50mg/kg)可显著降低肝纤维化大鼠血清中TGF-β1、TNF-α、IL-6、HA、PC-Ⅲ、LN的含量,同时可降低肝脏组织中Hyp含量及降低肝脏损伤程度及胶原纤维增生程度,还可减少大鼠脏肝组织中TGF-β1和Smad3/4蛋白表达,增加肝脏组织中Smad7蛋白表达。结论:赤芍总苷具有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与其阻断TGF-β1/Smad信号传导通路有关。

血清转化生长因子β1在大鼠放射性肝纤维化中的动态表达及其相关性研究

目的:肝癌的放射治疗可导致放射性肝损伤(RILD)、甚至肝纤维化及肝硬化等并发症的发生,因此寻找较佳的血清标记物对放射性肝纤维化的无创诊断及监测具有重要意义。本文通过建立放射性肝纤维化大鼠模型,检测血清转化生长因子β1(TGF-β1)的动态表达,从而探讨其与放射性肝纤维化严重程度的相关性及其作为血清标记物的诊断价值。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为模型组(30只)和对照组(10只)。除对照组外,模型组大鼠右半肝均接受单次6MV X线25Gy照射,于照射2月、4月、6月后,随机抽取10只,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TGF-β1的表达,同时将大鼠肝组织进行HE染色,观察肝组织病理变化及大鼠肝纤维化程度,将后者与血清TGF-β1值进行相关性分析。结果:在照射第2月、4月、6月后,模型组大鼠血清TGF-β1值(分别为551.03±69.00 ng/L、645.31±109.29 ng/L、737.89±118.11 ng/L)逐渐升高,均明显高于对照组(451.71±51.12 ng/L,P<0.05)。通过相关性分析表明,大鼠血清TGF-β1值与肝纤维化程度正相关(r=0.82,P<0.01)。结论:在放射性肝纤维化发生发展中,TGF-β1随着肝纤维化严重程度增加,其表达亦升高。本研究为放射性肝纤维化严重程度的监测提供了一种新的无创、操作简单的手段,为后续TGF-β1作为血清标记物应用于放射性肝纤维化的临床研究奠定了理论基础。

PI3K/Akt信号通路与肝星状细胞活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（PI3 K/Akt）信号通路与肝星状细胞（HSC）活化的关系及其在放射性肝纤维化中的作用.方法 6MVX射线照射,联合PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂处理HSC,分为空白对照组、抑制剂组、10 Gy照射组、10 Gy＋抑制剂组、20 Gy照射组和20 Gy＋抑制剂组.检测各组的细胞凋亡率、细胞上清液转化生长因子β1（TGF-β1）浓度、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA表达量和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达量.结果 与空白对照组相比,10和20 Gy照射组细胞的凋亡率随照射剂量的增加而增加（=8.43、11.63,P＜0.05）;与10和20 Gy照射组比较,分别加抑制剂后细胞的凋亡率降低（t=8.09、4.88,P＜0.05）.与10 Gy照射组比较,20 Gy照射组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量增加（t=6.91、7.80、9.28,P＜0.05）,10 Gy＋抑制剂组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量降低（t=6.17、15.11、10.34,P＜0.05）.与20 Gy照射组比较,20 Gy＋抑制剂组TGF-β1、α-SMA、p-Akt的量同样降低（t=10.04、6.85、23.84,P＜0.05）.结论 X射线通过激活PI3K/Akt信号通路使HSC活化,导致放射性肝纤维化的发生.

一氧化氮拮抗肺成纤维细胞增殖的量效关系

目的 应用硝普钠 (SNP)作为一氧化氮 (NO)供体观察NO对60 Coγ射线照射的人胚肺成纤维细胞 (HELF)增殖活力及其分泌功能的影响 ,以探讨NO的抗纤维化机理。方法 应用MTT比色法、Griess一氧化氮浓度测定法、免疫组化和原位杂交等方法检测成纤维细胞增殖活性及内皮素 (ET)、血管紧张素II(AII)和转化生长因子 β(TGFβ)的表达情况。 结果 低剂量的60 Coγ射线照射对人胚肺成纤维细胞有促增殖作用 ,以 5Gy剂量的促增殖作用最强 ;30h以内 ,硝普钠基本以线性方式释放NO ,平均增幅为 4 2 5μmol L ,初步认为 4～ 5μmol L的NO为抑制成纤维细胞增生的最佳浓度 ;未照射成纤维细胞不表达或仅微弱表达ET、AII和TGFβ ;照后细胞ET和TGFβmRNA及其蛋白表达显著增强 ,AII合成增加。结论 NO供体硝普钠可明显抑制成纤维细胞的过度增殖和分泌活动 ,随浓度的加大 ,抑制作用增强 。