间充质干细胞来源的外泌体通过抑制核因子κB信号通路减轻放射性肺纤维化的机制研究

目的探讨间充质干细胞来源的外泌体(MSCs-EXO)对放射性肺纤维化(RIPF)的作用机制。方法将15只雄性SD大鼠随机分为对照组、放射(irradiation,IR)组、IR+MSCs-EXO(IR+EXO)组,每组5只。IR组及IR+EXO组大鼠右肺给予单次照射,剂量为30 Gy。IR+EXO组分别于照射后1 h、14 d两个时间点,采用尾静脉推注方式给予每千克1×109个的外泌体;对照组和IR组大鼠同步尾静脉推注等体积的生理盐水。于照射后12周处死各组大鼠,收集大鼠右侧新鲜肺组织。采用HE和Masson染色检测肺组织病理损伤和胶原纤维沉积情况,采用免疫组织化学染色和RT-qPCR检测肺组织中纤维化相关分子α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原蛋白alpha 1链(COL1A1)的表达,采用Western blot检测肺组织中核因子κB(NF-κB)信号通路相关分子表达。结果照射后12周,与IR组相比,IR+EXO组大鼠肺组织病理受损明显减轻,Ashcroft score评分明显降低(P<0.001);IR+EXO组肺组织中胶原纤维沉积明显减少,胶原容积分数显著低于IR组,差异有统计学意义(P<0.001);IR+EXO组中α-SMA和COL1A1蛋白阳性表达水平明显低于IR组,α-SMA和COL1A1 mRNA表达水平也均明显低于IR组,差异有统计学意义(P<0.01);与IR组相比,IR+EXO组p-NF-κB p65(Ser536)蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.01),α-SMA和COL1A1蛋白表达也明显下调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论MSCs-EXO可能通过抑制NF-κB信号通路减轻放射性肺纤维化。

血小板反应蛋白-1敲除对放射性肺纤维化的影响及其机制

目的探讨血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)对放射性肺纤维化的影响及其可能机制。方法选取6~8周龄雄性野生型C57BL/6小鼠(wild type,WT)和全身性敲除TSP-1小鼠(TSP-1^(-/-)),将小鼠分为野生辐照组(WT+IR)和TSP-1敲除辐照组(TSP-1^(-/-)+IR),每组各6只。采用60 Coγ射线全肺照射16 Gy建立放射性肺纤维化小鼠模型。照射后第16周,HE染色观察小鼠肺组织形态变化,天狼猩红染色观察肺组织胶原表达水平,qRT-PCR法检测小鼠肺组织中TGF-β1和CollagenⅠ的mRNA表达水平,micro-CT评价肺损伤和肺实变情况,FlexiVent系统评价小鼠肺功能水平,免疫荧光染色检测肺组织LC-3和p62的蛋白表达,透射电镜观察肺组织细胞自噬体。结果与野生辐照组相比,TSP-1敲除辐照组小鼠肺损伤减轻,肺组织胶原沉积减少,TGF-β1和CollagenⅠ的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),肺功能水平有所改善。免疫荧光和透射电镜结果显示TSP-1敲除辐照组小鼠肺组织出现细胞自噬。结论TSP-1敲除能够减轻放射性肺纤维化,其机制可能与细胞自噬激活有关。

细胞外基质的异常黏滞力经talin1-vinculin结合促进放射性肺纤维化进展

目的细胞外基质(ECM)硬化可促进成纤维细胞活化和纤维化进展。但在放射性肺纤维化(RIPF)早期阶段(胸部照射后2个月),ECM的硬化尚不明显时,ECM的力学特征及对RIPF进展的影响尚不清楚。方法采用胸部照射法建立小鼠RIPF。制备了脱细胞的肺组织ECM(dECM),并通过生物原子力显微镜、基质组学、RNAi和点突变等方法检测了其生物力学特性及其对talin-vinculin结合、成纤维细胞活化的影响。结果与正常肺组织的dECM(dECM-Nor)相比,RIPF早期(照射后2个月)的dECM-RIPF的基质蛋白组成发生了明显变化,同时,dECM-RIPF硬度没有增加(1.44 kPa vs 1.35 kPa),但黏滞力显著增加(85.55 pN vs.39.35 pN)。使用自制的粘弹性水凝胶,我们证明了异常黏滞力可以促进成纤维细胞的活化。将成纤维细胞培养于dECM上,具有异常黏滞力的dECM-RIPF增加了talin1-vinculin的结合,上调了FAK的活化,并增强了成纤维细胞的活化。敲低vinculin可阻碍dECM-RIPF的上述作用,而过表达具有结构激活的vinculin突变体不能自动增加talin1-vinculin结合。采用口咽吸入慢病毒的方式敲低肺组织中vinculin的表达,可减轻RIPF的进展。结论RIPF的早期基质重塑导致ECM黏滞力增加,异常的黏滞力通过talin1-vinculin结合/FAK磷酸化促进RIPF的进展。

Vinculin蛋白对放射性肺纤维化的调节作用

目的肺纤维化中过多的成纤维细胞(FBs)活化推动着基质蛋白沉积、纤维化进展。黏着斑蛋白(Vinculin)是一种黏着斑成分蛋白,课题组前期研究发现vinculin与FBs活化有关,但体内改变FBs的vinculin表达量对肺纤维化进程的影响尚不清楚。方法C57BL/6小鼠全肺照射形成放射性肺纤维化(RIPF),静脉注射vinculin敲低细胞及vinculin突变细胞,于照射后4个月取小鼠肺组织,采用Masson染色、血相分析了解肺纤维化病理变化及炎症情况,RT-PCR、Western blot及免疫荧光法了解肺组织中基质蛋白含量、FBs活化等的变化。结果体外实验显示敲低vinculin可下调FBs的增殖、活化及迁移能力,而过表达突变vinculin在体外培养中未见对FBs的显著调节作用。给RIPF小鼠分别注射vinculin敲低细胞和vinculin突变细胞,结果发现注射vinculin敲低细胞可减少胶原蛋白沉积,下调血相炎症指标,下调肺组织中vinculin及α-SMA表达量,而注射vinculin突变细胞对RIPF的部分上述指标具有上调作用。结论本实验结果显示vinculin表达量与RIPF的进展有关,注射vinculin敲低细胞具有一定的缓解RIPF的作用。

氧化应激在放射性肺纤维化中的作用及中药防治研究进展

放射性肺纤维化(RILF)是临床胸部肿瘤患者放疗后发生的常见并发症,伴有咳嗽、呼吸衰竭等症状,危及患者生命。大量证据表明,电离辐射引发的氧化应激效应与RILF的发生发展密切相关,氧化应激的初始产物活性氧(ROS)贯穿整个RILF的发病过程,对RILF具有直接促进作用。本文总结了ROS在DNA损伤、炎症反应、自噬、上皮-间充质转化、细胞外基质沉积等RILF病理进展中发挥的重要作用,并概述了中药及其有效成分通过抗氧化等机制治疗RILF的研究进展,旨在为中医药防治RILF提供思路与理论支持。

放射性肺纤维化大鼠动物模型的建立及其病变规律

用 60 Coγ射线对二级雌性 Wistar大鼠 (体重 ( 2 2 0± 2 0 ) g) 2 2 3只进行 30 Gy全胸单次照射 ,其中照射野为 4 .5cm× 4 .0 cm,照距为 3m,剂量率为 2 .7Gy/ min。分别于照后 3、7、1 4、2 1、2 8、4 2、56、70、90、1 80、2 70、36 5d共 1 2个时间点进行了取材观察。结果表明 ,肺脏病变初期呈急性变化 ,以后转为亚急性或慢性进行性发展过程 ,可大致分为 2个阶段 4个期。早期即急性炎症期或渗出期 ,中期为增生期 ,这 2期合为疾病的第 1阶段 ,称为放射性肺炎。后期即纤维化期 ,晚期即胶原化期 ,这 2期共同构成本病的第 2个阶段 。

雷公藤内酯醇减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞活化与抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路相关

目的通过体内外实验,观察雷公藤内酯醇(TPL)减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞(MFBs)活化与TGF-β1/ERK/Smad3通路的相关性。方法以TGF-β1刺激成纤维细胞建立体外MFBs活化模型,C57BL/6小鼠胸部照射形成体内MFBs活化、放射性肺纤维化模型。MFBs活化状态通过检测小鼠成纤维细胞中α-SMA(RT-PCR、Western blot方法)和ColⅠ(RT-PCR、ELISA方法)的表达,通路活性采用Western blot法检测p-ERK、p-Smad3(Ser208)、p-Smad3(Ser423)的水平。ERK siRNA及Smad3 siRNA观察ERK、Smad3在MFBs活化中的地位。结果 TGF-β1激活p-ERK/p-Smad3(Ser208)及p-Smad3(Ser423),诱导成纤维细胞表达α-SMA,活化为MFBs,合成Col I明显增多;使用ERK siRNA及Smad3 siRNA确定了ERK及Smad3均参与α-SMA、ColⅠ的表达,其中ERK可能通过磷酸化Smad3连接区(Ser208)起相关作用。小鼠胸部照射可致肺组织中p-ERK、p-Smad3(Ser208)、p-Smad3(Ser423)的水平上调,α-SMA表达增加,显示多量MFBs活化。TPL对体内和体外实验中ERK、Smad3(Ser208)、Smad3(Ser423)的磷酸化活化均有明显抑制作用,可明显下调α-SMA表达及ColⅠ合成,减少MFBs的活化。结论 TPL可通过抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路,减少肺部照射后MFBs活化,从而抑制放射性肺纤维化进展。

异甘草酸镁对小鼠放射性肺纤维化的改善作用及其机制的初步研究

目的探讨异甘草酸镁(magnesium isoglycyrrhizinate,MgIG)对小鼠放射性肺纤维化的影响及其机制。方法 50只♀C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control组)、辐照组(RT组)、异甘草酸镁组(MgIG组)、异甘草酸镁治疗组(RT+MgIG组)和地塞米松治疗组(RT+DXM组),每组10只。除Control组和MgIG组外,其余各组小鼠均给予15Gy^(60)Coγ射线全胸单次照射。各组小鼠于辐照前2 h及辐照后每日给药:MgIG组和RT+MgIG组腹腔注射MgIG(100 mg·kg^(-1));Control组和RT组腹腔注射生理盐水(20 m L·kg^(-1));RT+DXM组腹腔注射DXM(0.5 mg·kg^(-1))。辐照后12周取材,行HE染色及Masson染色观察小鼠肺泡炎和肺纤维程度,免疫组化检测肺组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达。结果 RT组小鼠肺泡炎和肺纤维化程度及CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达较Control组明显增强(P<0.05),而RT+MgIG组与RT+DXM组肺泡炎、肺纤维化程度及蛋白表达相较于RT组明显降低(P<0.05)。结论异甘草酸镁可有效改善小鼠放射性肺纤维化,其机制可能与调控TGF-β信号通路有关。

磷酸羟基哌喹对大鼠放射性肺纤维化的防治作用

目的:研究磷酸羟基哌喹(hydroxypiperquin phosphate,HPQP)对大鼠放射性肺纤维化的防治作用。方法:选雄性成年SD大鼠给予0、15 Gy、20 Gy、25 Gy四种剂量60Co γ射线单次半胸照射。各剂量组再分服药(HPQP)组与不服药组(对照组)。照射后4个月和6个月两个时间点对各组的肺组织羟脯氨酸(HP)含量及肺病理形态变化(光镜和电镜)进行研究。结果:照射剂量愈大,肺组织HP含量亦愈高,其中20 Gy、25 Gy组与对照组相比有非常显著差别(P<0.01),而服药组肺HP含量明显低于不服药组(P<0.01)。病理形态变化(肺泡壁增厚、胶原增多、肺泡腔内巨噬细胞和泡沫样细胞出现、肺毛细血管腔狭窄、闭塞等)亦随着照射剂量的加大而愈趋严重,服药组可明显减轻上述改变。结论:证实HPQP可抑制胶原形成和减轻照射所引起的病理变化,对大鼠放射性肺纤维化具有一定的防治作用,并复制了放射性肺纤维化的动物模型。

异甘草酸镁对小鼠放射性肺纤维化的改善作用及其机制的初步探讨

目的探讨异甘草酸镁(Mg IG)对放射性肺纤维化的作用及其抗纤维化的机制。方法将SPF级雌性C57小鼠随机分为正常对照组、辐照模型组、异甘草酸镁对照组、异甘草酸镁治疗组和地塞米松治疗组,每组10只。除正常对照组和异甘草酸镁对照组,其余各组小鼠均给予单次15 Gy60Coγ射线全肺照射,照射后12周处死小鼠取左肺下叶组织,免疫组化法观察肺组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白及转化生长因子-β(1TGF-β1)信号通路蛋白表达变化。结果各组小鼠肺组织均有Ⅰ型、Ⅲ型胶原及TGF-β1,Psmad2,Psmad3不同程度的表达,模型组明显高于正常对照组,异甘草酸镁治疗组与地塞米松治疗组相较于模型组各蛋白表达均有下降。结论异甘草酸镁可通过抑制小鼠肺组织TGF-β1信号通路改善放射性肺纤维。

银翘温胆汤干预大鼠放射性肺纤维化的初步实验研究

目的应用大鼠放射性肺纤维化模型观察银翘温胆汤对早期放射性肺炎和晚期肺纤维化的干预效果。探讨其在治疗放射性肺纤维化中的作用机制,以期为临床应用提供实验依据。方法将雄性大鼠45只随机分为对照组(0Gy+生理盐水)、照射组(20Gy+生理盐水)、银翘温胆汤组(20Gy+中药),单次6MV X线20Gy照射大鼠双肺,建立放射性肺纤维化模型。分别于2、4、6周时各处死5只大鼠取肺组织,进行HE染色观察肺组织病理变化,检测肺系数,用免疫组化法测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果照射组大鼠肺损伤明显,肺系数、肺纤维化和TGF-β1的表达较对照组明显增高(P<0.05),而银翘温胆汤组大鼠比照射组的肺充血、出血、渗出性改变及肺泡壁增厚、肺纤维化程度减轻,且肺系数和TGF-β1的表达有一定程度的下降。结论银翘温胆汤对大鼠早期放射性肺炎和肺纤维化有一定程度的保护作用,其机制可能是通过抑制TGF-β1表达,使放射性肺炎及肺纤维化病变减轻。

吡格列酮在大鼠放射性肺纤维化中保护作用的研究

目的探讨吡格列酮在放射性肺纤维化中的保护作用,以及对AT1R(血管紧张素Ⅱ1型受体表达的影响。方法 SD大鼠60只,共分为5组。空白组:不接受任何干预;照射+安慰剂组:接受12 Gy照射+安慰剂干预;单独给药组:接受吡格列酮10 mg/(kg·d)干预;照射+吡格列酮a组:接受12 Gy照射+吡格列酮10 mg/(kg·d)干预;照射+吡格列酮b组:接受12 Gy照射+吡格列酮20 mg/(kg·d)干预。采用HE及M asson染色观察大鼠肺组织纤维化情况;采用免疫组化观察AT1R在肺组织中的分布情况;采用蛋白免疫印迹杂交及RT-PCR检测AT1R蛋白及mRNA的表达情况。结果 HE及M asson染色显示,受照射大鼠肺组织细胞出现变性、坏死,肺组织出现明显纤维化;大鼠给予吡格列酮干预后,受照射大鼠的肺组织损伤减轻,肺组织纤维化减轻;免疫组化提示,照射后大鼠肺组织及上皮细胞中AT1R表达较空白组及单独给药组明显,照射+吡格列酮组的AT1R表达较照射+安慰剂组少;Western blot及RT-PCR提示,接受吡格列酮干预的受照射大鼠,AT1R蛋白及mRNA表达水平被明显抑制。结论吡格列酮在放射性肺纤维化中具有保护作用,其可能通过下调AT1的表达来实现对放射性肺损伤的保护作用。

化瘀濡肺汤联合激素治疗放射性肺纤维化24例临床观察

目的观察化瘀濡肺汤联合激素治疗放射性肺纤维化的临床疗效。方法将入选的放射性肺纤维化患者分为单纯激素治疗者(对照组)23例与化瘀濡肺汤联合激素治疗者(治疗组)24例,以放射性肺纤维化疗效、X线胸片疗效、激素撤减疗效及患者肺功能的改善为指标进行疗效对照。结果治疗组治疗后放射性肺纤维化的治疗效果、X线胸片疗效、激素撤减疗效及患者肺功能改善均优于对照组。结论化瘀濡肺汤联合激素治疗放射性肺纤维化疗效优于单纯激素治疗,且患者激素服用量减少,生活质量改善。

兔放射性肺纤维化形成过程中一氧化氮含量变化及诱导型一氧化氮合成酶的表达

目的:观察兔放射性肺纤维化形成过程中一氧化氮(NO)含量变化及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达。方法:实验兔20只,采用6mVX线对左全肺进行照射,25Gy,1次。分别于照射前、照射后1,3,6个月各处死5只动物,处死前进行左肺肺泡灌洗。采用铜-镉还原法检测灌洗液中的NO含量,免疫组化法检测肺组织中iNOS的表达。结果:NO含量在照射后1个月明显升高,照射后3～6个月显著降低;在照射前及照射后3～6个月,肺间质细胞内几乎未见iNOS阳性表达;在照射后1个月,肺间质中iNOS表达阳性细胞明显增多。结论:NO可能是放射性肺纤维化形成过程中的一个独立影响因素,其含量的变化可能与iNOS蛋白活性改变有关。

双黄连配合香丹注射液治疗放射性肺纤维化合并感染32例

目的:探讨双黄连配合香丹注射液治疗放射性肺纤维化合并感染的临床疗效。方法:治疗组应用双黄连配合香丹注射液治疗本病32例,并设对照组观察。结果:治疗组总有效率93.8%;对照组总有效率70%;提示:本方法对本病具有抗菌消炎,抗病毒,解热及增强机体免疫功能作用。

清透伏热法干预放射性肺纤维化理论探析

针对放射性肺纤维化的病机为热毒伏络,气伤阴亏血瘀,病理特点为热伏、气耗、阴伤、血瘀,内伏热毒在放射性肺损伤的发生及向肺纤维化转变进程中起关键作用。课题组总结出清透伏热、益气养阴、活血充络的治疗原则,注重清透伏热治法,以干预放射性肺损伤肺纤维化的发生为切入点,探析清透伏热治疗方法在干预放射性肺纤维化进程中的作用机制。

钙结合蛋白S100A8在放射性肺纤维化早期的表达及意义

本研究结合体内外实验,探讨了钙结合蛋白S100A8在放射性肺纤维化早期的表达及意义。20Gy60Coγ射线全胸照射大鼠,建立大鼠放射性肺纤维化模型,分别于照射后1周、2周及4周活杀后取肺,采用免疫组化方法检测S100A8蛋白水平的变化;采用RT-PCR方法检测S100A8及与其形成复合物的S100A9 mRNA水平的变化。对于体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用RT-PCR方法检测该细胞受γ射线与脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)处理后S100A8 mRNA水平的变化。照射后4周,S100A8蛋白在大鼠肺部巨噬细胞胞浆增强表达,S100A8和S100A9 mRNA在大鼠肺部也增强表达。结果表明,RAW264.7细胞中,γ射线与LPS能够协同作用增强该细胞S100A8 mRNA的表达。S100A8在放射性肺纤维化早期于巨噬细胞表达增强,发挥其趋化活性,参与炎症发生,进而在放射性肺纤维化形成过程中发挥作用。

老年非小细胞肺癌患者放疗发生放射性肺纤维化的影响因素

目的探讨老年非小细胞肺癌(NSCLC)患者放疗发生放射性肺纤维化的影响因素。方法回顾性分析200例老年NSCLC患者临床资料,患者均实施放疗治疗,统计放疗4个月后放射性肺纤维化的发生率。统计所有患者的临床资料,纳入所有可能的影响因素,经单因素及多因素分析找出老年NSCLC患者放疗后发生放射性肺纤维化的影响因素。结果200例老年NSCLC患者放疗后有50例(25.00%)发生放射性肺纤维化。经Logistic回归结果显示,有吸烟史、采用静态适形调强放疗方案、有肺部疾病史、肺部总照射剂量高、卡氏功能状态(KPS)评分低、血清转化生长因子(TGF)-β水平高是老年NSCLC患者放疗后发生放射性肺纤维化的影响因素(OR>1,P<0.05)。结论老年NSCLC患者放疗后放射性肺纤维化发生率略高,有吸烟史、采用静态适形调强放疗方案、有肺部疾病史、肺部总照射剂量高、KPS评分低、血清TGF-β水平高是老年NSCLC患者放疗后发生放射性肺纤维化的影响因素。

大鼠放射性肺纤维化病理过程的形态计量学研究

为阐明放射性肺纤维化的病变规律和发生机理提供形态依据，应用图像分析技术，对放射性肺纤维化形成过程中肺间质、肺泡腔、肺内基质弹力纤维含量、肺内肥大细胞嗜碱性颗粒含量及肺内成纤维细胞胶原ｍＲＮＡ含量进行了定量测定。结果显示，随照射时间延长，肺泡壁渐增厚、肺间质所占面积增大，肺泡腔进行性缩小。弹力纤维于照后１个月时即见增多持续至６个月，而于照射后９－１２个月近于正常。肥大细胞嗜碱性颗粒含量于照射１、２个月明显减少，３－９个月恢复近正常水平。肺内成纤维细胞胶原ｍＲＮＡ含量于照射后每个时间点均有不同程度增加。表明放射性肺纤维化病变是个动态发展过程；肺内肥大细胞可能参与了纤维化的形成；肺内胶原的转录增强可能是放射性肺纤维化形成的关键步骤之一。

乌司他汀对胸部肿瘤患者放射性肺炎和放射性肺纤维化的影响

目的探究乌司他汀对胸部肿瘤患者放射性肺炎、放射性肺纤维化的影响。方法选取我院2014年5月~2015年10月收治的80例行根治性放疗治疗的胸部肿瘤患者作为研究对象。所有患者经诊断均为Ⅲ期肿瘤,无法行手术治疗。随机将其分为对照组40例,采用三维适行放射疗法;实验组40例,在三维适行放疗基础上加用乌司他汀进行治疗,同时给予对照组安慰剂治疗。比较两组患者治疗前后肺功能指标中第1秒用力呼气量（FEV1）、用力肺活量（FVC）、一氧化碳弥散量（DLCO）变化、血清中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）指标变化及放射性肺炎发生率。结果治疗后24周对照组患者肺功能改善效果较实验组差,对照组患者血清中IL-6、TNF-α、TGF-β1水平均高于实验组,差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗后对照组患者放射性肺炎发生率（55.0%）高于实验组（25.0%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论采用乌司他汀治疗可有效改善胸部肿瘤患者肺功能,降低放射性肺炎、放射性肺纤维化的发生率。