放射性配体结合分析法测定鸡视网膜多巴胺D1受体

用放射性配体[3H]SCH23390建立鸡视网膜多巴胺D1受体的放射性配体结合分析法，并测定不同试验组鸡视网膜多巴胺D1受体的Bmax值有显著性差异，KD值无明显差异．同时探讨了干，湿滤膜片对放射性测定结果的影响，以及影响试验结果的其它因素．实验表明湿滤膜片测量效果优于干滤膜片，膜受体即使贮存在-20℃条件下亦只能一周，否则影响受体的活性．

不同种属动物肝细胞膜载脂蛋白CⅢ受体的放射性配体结合分析

目的 探讨不同种属动物肝细胞膜 apo C 受体的存在及结合特性。方法 以 1 2 5I标记的人 apoC 为配体 ,利用放射性配体结合分析法对不同种属动物肝细胞膜与 1 2 5I- apo C 的结合特性进行了初步研究。结果大鼠、狗、羊、猪、兔、鸡、鸽、蛇等动物的肝细胞膜与人 1 2 5I- apo C 有可饱和、高亲合、可逆的结合。竞争性抑制实验表明该结合能被过量非标记 apo C 抑制 ,而人血浆白蛋白对结合无影响。未观察到鲤鱼和牛蛙的肝细胞膜与 1 2 5I-apo C 有可饱和、高亲合的结合。结论 提示肝细胞膜 apo C 受体在进化上具一定保守性。

放射性配体-结合研究的实验设计和数据分析

放射性配体-结合研究是现代药理学的一个分支,它有助于阐明药物在分子水平上与受体结合的作用机理。文中对试验设计、结果分析作了详尽的介绍。此外,就当前采用的分析方法提出了以 Tobler 程序与非线性回归相结合的最佳程序方案。

芳烷酮哌嗪类化合物SCP-1和SCP-2与5-HT_(1,2)受体的结合实验

目的:研究芳烷酮哌嗪类化合物SCP-1和SCP-2与5-HT1和5-HT2受体体外是否有结合作用。方法:5-HT1受体取材于大鼠大脑皮质,5-HT2受体取材于大鼠海马。采用受体-配体结合测定法测定10-3mol·L-1的SCP-1和SCP-2对5-HT1,5-HT2受体的最大结合率、半数抑制浓度(IC50)和Hill系数。结果:10-3mol·L-1的SCP-1和SCP-2与5-HT1受体的最大结合率分别为75％和63％。SCP-1和SCP-2与5-HT1受体结合的IC50分别为1．584和5．495μmol·L-1,二者与5-HT1受体结合的Hill系数分别为0．98和1．02。10-3mol·L-1的SCP-1和SCP-2与5-HT2受体的最大结合率分别为92％和87％。SCP-1和SCP-2与5-HT2受体结合的IC50分别为1．0和2．512μmol·L-1,二者与5-HT2受体结合的Hill系数分别为0．86和0．88。结论:SCP-1和SCP-2与5-HT1受体的结合方式是与单一受体位点结合,并且这种结合服从质量作用定律(Hill系数接近于1)。SCP-1和SCP-2与5-HT2受体呈现不规则性结合,也可能有负相互作用或多种结合位点(Hill系数偏离1)。

vMIP对细胞膜上趋化因子受体亲和力的结合特性研究

目的通过病毒巨噬细胞炎性蛋白(vMIP)对外周血中单个核细胞(PBMC)膜上趋化因子受体结合的比较性研究,阐明vMIP与受体的结合能力。方法通过放射性配体受体结合实验,利用饱和实验、动力学实验和特异性分析,鉴定vMIP的受体结合能力。结果vMIP与人、食蟹猴PBMC膜上受体结合的Kd分别为11.1、14.3nmol/L,对趋化因子受体CCR5和CXCR4竞争结合的IC50分别为3.4、4.5nmol/L。结论提示了vMIP与膜上受体有较高的亲和力,并对CCR5和CXCR4具有高度特异性,可能对防治炎症及HIV1感染等具有重要意义。

经前平颗粒对经前期综合征肝气逆证模型大鼠不同脑区γ-氨基丁酸A受体结合活性的影响

目的通过检测经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气逆证模型大鼠大脑皮质和海马γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)结合活性变化,探讨中药经前平颗粒对PMS肝气逆证的干预作用。方法多因素综合刺激法复制PMS肝气逆证大鼠模型。放射性配体受体结合技术测定大鼠皮质和海马GABAAR的结合活性变化。结果与正常组相比,肝气逆证造模组大鼠大脑皮质和海马GABAAR结合活性均明显增加。与模型组相比,经前平颗粒组大鼠皮质和海马GABAAR活性均明显下降。结论大鼠皮质和海马GABAAR结合活性增加可能是PMS肝气逆证的重要机制之一。中药经前平颗粒可对GABAR结合活性含量异常变化起到调节作用。

VLDL-R中配体结合重复序列的结合特性及结构分析

目的 研究VLDL R中 8个配体结合重复序列 (ligand bindingrepeats ,LBR)在配体结合中的作用并探讨结合位点的结构。方法 采用基因缺失诱变方法 ,构建不同LBR缺失的VLDL R重组体。将其分别导入无LDL R功能性表达的ldl A7细胞。配体结合实验观察转染细胞与荧光标记的VLDL、β VLDL的结合能力 ,并采用同源建模的方法预测受体N 端 32 8个氨基酸的配体结合域的空间结构。结果 配体结合实验显示LBR1和LBR2对受体结合VLDL、β VLDL最为重要 ;LBR3对结合VLDL也有重要作用 ,但对结合 β VLDL无明显影响。模型显示受体N 端32 8个氨基酸的配体结合域呈现弧形口袋样结构 ,前 3个LBR结构紧凑 ,呈棒状 ,负电荷相对集中 ,与功能特性吻合 ,LBR5与LBR6之间的连接区赋予口袋结构一定的伸缩性 ,适应配体大小的变化。结论 受体N 端的前 3个LBR含有与配体结合的位点。该区域特定的空间结构与理化特性是结合功能的重要基础。

荷瘤裸鼠整合素α_y β_3受体显像的实验研究

目的探讨(99)~Tc^m 标记精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)小分子多肽(GY11)作为肿瘤显像剂的可能性。方法利用 SnCl_2直接还原法进行 GY11的(99)~Tc^m 标记。建立荷人黑色素瘤 A375、肺癌 H460和宫颈癌 HeLa BALB/c 裸鼠肿瘤模型,分别进行体内分布和肿瘤显像研究。结果 GY11的(99)~Tc^m 标记率为80%。黑色素瘤 A375荷瘤裸鼠体内分布显示,(99)~Tc^m-GY11主要经肾脏快速从血液中清除,注射后2 h 肿瘤摄取量为3.13%ID/g,肿瘤/血和肿瘤/骨骼肌比值随时间的推移而增加,注射后1和6 h 比值分别为3.0、4.3和8.1、15.1。对于黑色素瘤 A375和肺癌 H460荷瘤裸鼠,(99)~Tc^m-GY11静脉注射后2 h 肿瘤均能清楚显示,24 h 后显像更清晰;2 h 后宫颈癌 HeLa 肿瘤能显影,但6 h后肿瘤放射性基本清除。结论 (99)~Tc^m-GY11有望成为肿瘤α_vβ~3受体显像剂。

实验性自身免疫性脑脊髓炎脑内咪唑啉受体密度变化初步观察

目的:探讨咪唑啉2受体(I2R)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病的关系。方法:采用放射性受体-配体饱和实验,以[3H]idazoxan标记I2R,检测EAE大鼠脑内I2R受体密度和亲和力变化。结果:EAE大鼠脑组织的I2R受体密度上调74.5%(n=3,P<0.05),I2R亲和力与对照组相比无统计学差异。结论:I2R在EAE大鼠脑组织中受体密度上调,可能与EAE发病有联系。

一氧化氮和M受体在艾灸治疗实验性豚鼠哮喘病中的作用及其相互关系的研究

目的 :观察艾灸治疗实验性豚鼠哮喘病中NO(一氧化氮 )与M受体的相互关系。方法 :采用 50只 2 50～ 3 0 0 g的雄性豚鼠 ,随机分成 :A 健康对照组 ,B 实验哮喘组 ,C 哮喘 +艾灸组 ,D 哮喘 +L NAME组 ,E 哮喘 +L NAME(L 精氨酸甲酯 ) +艾灸组共五组 ,用放射性配基结合实验的方法测定肺组织细胞膜M受体Bmax和平衡离解常数 ,用NO检测试剂盒测各组豚鼠BALF(支气管肺泡灌洗液 )、肺组织、血中NO的含量。结果 :与健康组相比 ,哮喘组豚鼠BALF中NO含量升高 ,肺细胞膜制剂对3H QNB结合的Bmax上升 ;与哮喘组相比 ,哮喘 +艾灸组及哮喘 +L NAME +艾灸组豚鼠BALF中NO含量下降 ,肺细胞膜制剂对3H QNB结合的Bmax降低 ,哮喘 +L NAME组豚鼠BALF中NO含量降低 ,而肺细胞膜制剂对3H QNB结合的Bmax无明显变化。结论 :艾灸“肺俞”等穴可降低哮喘引起的肺组织和肺泡灌洗液中NO水平及细胞膜Bmax的增加 。

一氧化氮和β受体在艾灸治疗实验性豚鼠哮喘病中的作用及其相互关系的研究

为观察艾灸在治疗实验性豚鼠哮喘病中NO(一氧化氮 )与β受体的相互关系 ,采用 5 0只 2 5 0～ 30 0 g雄性豚鼠 ,随机分成 :健康对照组、实验哮喘组、哮喘 +艾灸组、哮喘 +L NAME(L 精氨酸甲酯 )组、哮喘 +L NAME +艾灸组共五组 ,用放射性配基结合实验的方法测定肺组织细胞膜β受体Bmax和平衡离解常数 ,用NO检测试剂盒测各组豚鼠BALF(支气管肺泡灌洗液 )、肺组织、血中NO的含量。结果 :与健康组相比 ,哮喘组豚鼠BALF中NO含量升高 ,而肺细胞膜制剂对3H DHA结合的Bmax下降 ;与哮喘组相比 ,哮喘 +艾灸组豚鼠BALF中NO含量下降 ,而肺细胞膜制剂对3H DHA结合的Bmax上升 ;与哮喘组相比 ,哮喘 +L NAME组豚鼠BALF中NO含量降低 ,而肺细胞膜制剂对3H DHA结合的Bmax无明显变化 ;与哮喘组相比 ,哮喘 +L NAME +艾灸组豚鼠BALF中NO含量下降 ,而肺细胞膜制剂对3H DHA结合的Bmax增加。表明哮喘豚鼠及对其艾灸治疗过程中 ,NO与β受体Bmax呈负相关 ,而L NAME对β受体Bmax无明显影响。

放射性配体结合实验检测人脑胶质瘤细胞表皮生长因子受体的数目和活性

胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，经过各种综合治疗后疗效依然欠佳。部分胶质瘤存在表皮生长因子受体（EGFR）的扩增，抗EGFR治疗有助于抑制EGFR异常的肿瘤的增殖和进展。我们应用放射性配体结合实验（RBA）检测EGFR的数目和活性。

^(125)I-VIP与小鼠肝癌H22细胞受体结合特性研究

目的 探讨放射性碘标记血管活性肠肽(VIP)与肝癌细胞的体内、外结合特性。方法 氯胺 T法标记、Seph adexG 5 0柱层析分离纯化制备1 2 5I VIP。通过饱和结合实验与竞争结合实验,评价1 2 5I VIP与鼠H2 2肝癌细胞受体的体外介导结合特性;进行体内动态生物分布及非标记VIP竞争分布实验,观察1 2 5I VIP在荷H2 2小鼠体内尤其在移植瘤中的分布变化规律,评价其体内受体结合特性。结果 1 2 5I标记率为73 8% ,1 2 5I VIP比活度18 2TBq mmol,放射化学纯度(RCP)98%。1 2 5I VIP与H2 2细胞受体的结合具有饱和性,Scatchard作图显示为双位点系统,高、低亲和力结合位点的解离常数(Kd)分别为1 74nmol L与2 8 63nmol L ,最大结合容量(Bmax)分别为0 2 7pmol 10 6 细胞与5 75pmol 10 6 细胞,非标记VIP以剂量依赖方式抑制1 2 5I VIP与H2 2细胞结合。各时相肿瘤组织放射性均高于肌肉(P <0 0 5 ,P <0 0 0 1) ,2 0minT NT比值达最大为2 68,肺放射性高于血液与肝脏(P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,体内放射性主要经肾脏排泄;10 μg和40 μg非标记VIP对T NT比值的抑制率分别为2 6 87%与3 5 82 %。结论 1 2 5I VIP在体内、外与鼠H2 2肝癌细胞的结合由受体介导。此结果为进一步应用放射性核素标记VIP靶向诊治肝细胞癌研究提供了理论依据。

受体结合实验及其在放射性显像剂研究中的应用

受体结合实验是一种重要的药物筛选方法，它通过体外实验来考察配体与受体的结合能力。目前，很多放射性显像剂是利用放射性配体与体内受体结合的高度选择性来进行受体显像的。因此，受体结合实验是放射性显像剂研究中广泛使用的一种体外评价方法，在放射性显像剂设计与筛选中发挥了重要作用。

β_2-肾上腺素受体在新生大鼠心肌成纤维细胞中的分布及其促增殖作用

为了明确 β 肾上腺素受体 (AR)亚型在新生大鼠心肌成纤维细胞中的分布及其在成纤维细胞增殖反应中的作用 ,采用放射配体结合实验和 [3H] thymidine掺入法检测了新生大鼠心肌成纤维细胞的 β AR密度和DNA合成速率。结果显示 ,在培养心肌细胞和心肌成纤维细胞中 β AR密度 (Bmax)和解离常数 (KD)无显著性差异 ;竞争抑制曲线分析结果提示 ,心肌成纤维细胞对CGP 2 0 712A和ICI 1185 5 1单位点拟合均显著优于两位点拟合 (P <0 0 1) ,表现为对选择性 β1 AR拮抗剂CGP 2 0 712A的低亲和性 (IC50 值 :10 1μmol/L)和对选择性 β2 AR拮抗剂ICI 1185 5 1的高亲和性(IC50 值 :0 147μmol/L)。异丙肾上腺素 (ISO)促心肌成纤维细胞增殖作用可被ICI1185 5 1和心得安 (非选择性 β AR拮抗剂 )完全抑制 ,而CGP 2 0 712A则无此作用。上述结果提示 ,在培养心肌成纤维细胞中β2 AR亚型占绝对优势 ,并且ISO引起的心肌成纤维细胞增殖反应是由 β2

富马酸戊乙奎醚消旋体(R,R')-光学异构体及其溴化季铵盐对M1和M3受体亚型亲和力的比较

目的比较富马酸戊乙奎醚消旋体、(R,R')-光学异构体及其溴化季铵盐对M1和M3受体亚型的亲和力。方法应用放射性配体受体饱和实验测定[氚]N-甲基东莨菪碱([3H]-NMS)对M1和M3受体亚型的最大结合力及平衡解离常数,竞争性抑制试验比较富马酸戊乙奎醚消旋体、(R,R')-光学异构体及其溴化季铵盐对M1和M3受体亚型的亲和力。结果 [3H]-NMS对M1和M3的最大结合力(Bmax)值分别为(2.8±0.22)、(3.6±0.14)pmol/mg,平衡解离常数(Kd)值分别为(0.29±0.04)×10-9、(0.53±0.09)×10-9mol/L。富马酸戊乙奎醚消旋体、(R,R')-光学异构体及其溴化季铵盐对M1受体的竞争抑制平衡解离常数(Ki)依次为(2.54±0.71)×10-11、(3.86±0.94)×10-12、(6.73±1.71)×10-11mol/L,对M3受体的Ki依次为(1.06±0.57)×10-11、(1.97±0.85)×10-12、(2.94±0.53)×10-11 mol/L。结论环丙甲基戊乙奎醚溴化季铵盐对M1和M3受体亚型的亲和力低于富马酸戊乙奎醚消旋体及其(R,R')-光学异构体,但对M3受体亚型仍具有高选择性。

IL-6受体在人白血病细胞膜上的表达及亲和力

目的 :研究各种白血病细胞膜IL 6R的表达、密度及亲和力 ,为深入探讨对IL 6 /IL 6R系统介导IL 6 PE40外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞的敏感性提供可靠依据。方法 :采用放射性配基结合实验 (RBA)并结合Scatchard作图法 ,系统分析IL 6R在 8种极具代表性的人类白血病细胞系U937,HL 6 0 ,KG1,TF1,K5 6 2 ,CEM ,HuT2 8和Raji上的表达密度及亲和力 ,同时应用流式细胞术 (FACS)检测IL 6R的α和 β亚单位蛋白在这些白血病细胞上的表达。结果 :RBA表明 ,粒、单、红白血病细胞系HL 6 0 ,U937,KG1和TF1表面存在着高亲和力IL 6R ,平均IL 6R密度 /细胞分别为 2 5 0 2个 ,2 874个 ,2 319个及 932 9个 ,而淋系白血病细胞系CEM ,HuT2 8和Raji以及慢粒K5 6 2细胞系则未测到IL 6R。FACS显示 ,HL 6 0 ,KG1,U937和TF1均高表达IL 6R的α亚单位蛋白 ,而CEM ,HuT2 8及K5 6 2则不表达IL 6Rα亚单位蛋白 ;IL 6Rβ亚单位蛋白在U937,KG1,TF1,HuT2 8及CEM中呈阳性表达 ,而在HL 6 0 ,Raji和K5 6 2细胞中则为阴性。结论 :鉴于粒、单、红白血病细胞异常高表达IL 6R ,而淋系和慢粒白血病呈阴性表达这一事实 ,提示急非淋白血病可能更适合用重组IL 6 PE40外毒素融合蛋白进行IL 6 /IL 6R介导的靶向治疗。

二苯氰胂对毒蕈碱性受体的抑制作用

目的研究了日本在我国遗弃的化学武器———二苯氰胂(DC)对离体豚鼠回肠纵肌和毒蕈碱性受体的作用机制,为评估DC的毒理学作用及其对环境的影响提供依据。方法取豚鼠8只,分离豚鼠回肠纵肌16条,分4组,用累积给药法,从低到高分别给予不同浓度的DC,记录离体豚鼠回肠纵肌收缩的幅度,求出DC作用于离体回肠纵肌的EC50值,并通过DC与乙酰胆碱(AChR)的相互作用,研究DC的作用机制。在放射性配体-受体结合实验中,从10只大鼠大脑中提取受体,通过DC与[3H]QNB的竞争结合作用,研究了DC对毒蕈碱性受体的作用。结果DC可抑制离体豚鼠回肠纵肌的收缩作用,其对离体豚鼠回肠纵肌的EC50值为(7.335±2.377)×10-7mol/L,AChR可收缩离体豚鼠回肠,并可反转DC引起离体豚鼠回肠纵肌的舒张作用。在放射性配体-受体结合实验中,DC与毒蕈碱性受体结合的Ki值为(9.19±1.52)nmol/L,IC50值为(16.00±2.65)nmol/L。结论DC可作用于mAChR受体上,初步断定为AChR的拮抗剂。

左旋千金藤啶碱对β肾上腺素受体的拮抗作用

目的 研究左旋千金藤啶碱 (l- SPD)对β肾上腺素受体的作用。方法 应用放射配体结合实验 ,通过竞争[3H]双氢烯丙洛尔 ([3H]DHA)特异性结合 ,研究 l- SPD对 β肾上腺素受体的亲和力 ;在离体猪冠状动脉环实验中 ,观察 l- SPD对 β肾上腺素受体的拮抗作用。结果 l- SPD能竞争 [3H]DHA和兔肺细胞膜的结合部位 ,其 K i值为(5 .75± 0 .5 6 ) μmol/ L;l- SPD使去甲肾上腺素 (NA)对数累加量效曲线 (L CCRC)右移又压低 ,其 PA2 和 PD′2 值分别为 7.2 1± 0 .78,5 .32± 0 .13,而普萘洛尔 (Pro)使 NA的 L CCRC平行右移 ,PA2 值 9.19± 0 .17。结论 l- SPD对β受体有拮抗作用。此外 。