沉默GOLM1对宫颈癌Siha细胞放射敏感性影响和机制研究

目的:研究GOLM1对人宫颈癌Siha细胞放射敏感性影响和可能机制。方法:构建慢病毒载体敲低宫颈癌细胞Siha中GOLM1的表达,qPCR检测干扰效率。采用4 Gy X线照射细胞后利用MTT实验检测细胞活性。将经射线照射后的宫颈癌细胞分为GOLM1-SiRNA组、NC-SiRNA组、GOLM1-SiRNA联合IGF1组,观察细胞形态,细胞侵袭和迁移实验观察侵袭和迁移能力,克隆形成实验检测细胞增殖能力。Western blot检测上皮间充质转化相关蛋白及PI3K/Akt通路蛋白。结果:经射线照射后,敲低Siha细胞中GOLM1表达组细胞活性下降最明显,细胞侵袭能力、迁移能力降低,克隆形成能力下降。GOLM1-SiRNA联合PI3K/Akt信号转导通路激活剂IGF1组细胞侵袭、迁移能力增加,克隆形成能力增强。降低GOLM1的表达增强了上皮标记蛋白E-cadherin的表达,同时降低了间质标记蛋白N-cadherin和p-Akt的表达,加入IGF1后E-cadherin蛋白的表达降低,N-cadherin和p-Akt蛋白的表达增强。结论:GOLM1表达降低增加了射线照射后宫颈癌细胞对放射线的敏感性。该作用可能通过介导PI3K/Akt信号转导通路影响细胞的侵袭及迁移能力实现的。

UbcH5a调控DNA损伤修复蛋白表达对食管癌细胞放射敏感性的影响

目的:构建过表达人泛素交联酶UbcH5a基因的稳定转染食管鳞癌EC109细胞株,研究UbcH5a影响食管癌放射敏感性的机制。方法:将EC109细胞分为空白对照组(不处理)、阴性对照组(转染pEGFP-C1质粒)和过表达组(转染pEGFP-UbcH5a质粒)。分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和western blotting法检测UbcH5a mRNA及蛋白表达以验证转染效率,克隆形成实验检测2 Gy X线照射后的细胞存活分数(SF2),免疫荧光检测DNA损伤灶点,western blotting法检测DNA损伤修复相关蛋白(ATM、ATR、p-ATM、p-ATR、Chk1、Chk2和BRCA1)表达。结果:与空白对照组相比,过表达组UbcH5a mRNA及蛋白表达水平升高,SF2降低,DNA损伤灶点增多(均P<0.05),而阴性对照组无明显变化(P>0.05)。与阴性对照组相比,过表达组经X线照射前、后ATM、ATR、p-ATM、p-ATR、Chk1、Chk2和BRCA1表达均显著下调(均P<0.05)。结论:UbcH5a通过抑制DNA损伤修复相关蛋白表达来增强食管癌细胞的放射敏感性。

腺苷脱氨酶ADAR1调控肺腺癌细胞放射敏感性的研究

目的研究下调ADAR1基因表达对肺腺癌细胞放射敏感性的影响。方法慢病毒转染下调肺腺癌细胞A549的ADAR1基因,分别设阴性对照组(shNC)和ADAR1敲降组(shADAR1),同时以单次剂量0 Gy和6 Gy X射线照射为干预条件。采用蛋白免疫印迹和RT-qPCR分别检测A549细胞转染后ADAR1的蛋白和mRNA表达水平。CCK-8实验、伤口愈合实验及Transwell迁移实验检测细胞增殖、迁移能力。克隆形成实验检测下调ADAR1对A549细胞放射敏感性的影响。流式细胞术、蛋白免疫印迹实验检测细胞凋亡及相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平。细胞免疫荧光、蛋白免疫印迹实验检测γ-H2AX的表达水平。彗星实验检测细胞DNA损伤程度。4~6周、体质量16~18 g雌性裸鼠12只,用随机数表法分为(n=3):shNC组、shADAR1组、阴性对照联合电离辐射(Ionizing radiation,IR)组(shNC+IR)和ADAR1敲低联合IR组(shADAR1+IR),通过皮下成瘤实验检测不同组细胞在体内生长情况。结果蛋白免疫印迹和RT-qPCR实验显示A549 shADAR1细胞ADAR1的蛋白及mRNA表达量均明显降低(P<0.05)。CCK-8实验、伤口愈合实验及Transwell迁移实验结果显示下调ADAR1抑制A549细胞的增殖、迁移能力,IR后这种抑制趋势更加明显(P<0.01)。细胞克隆形成实验结果显示随着辐射剂量增加,两组的克隆形成率均有下降,但shADAR1组形成的克隆数低于shNC组。流式细胞术及蛋白免疫印迹实验结果显示下调ADAR1增加A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达(P<0.01),减少Bcl-2蛋白表达(P<0.05),IR后A549 shADAR1细胞凋亡率、Bax蛋白水平进一步升高(P<0.01),Bcl-2蛋白水平进一步降低(P<0.01)。A549 shADAR1细胞经IR后γ-H2AX foci数目及蛋白表达量明显升高(P<0.05),彗星实验结果显示A549 shADAR1细胞经IR后DNA损伤更加明显(P<0.01)。裸鼠皮下成瘤实验结果显示A549 shADAR1细胞皮下成瘤经IR后其生长受到明显抑制(P<0.01)。结论下调ADAR1可显著抑制IR后A549细胞的增殖、迁移,促进细胞凋亡及DNA损伤,从而增加肺腺癌细胞的放射敏感性。

谷氨酰胺对结直肠癌HT-29细胞放射敏感性的影响及机制探讨

目的观察不同浓度谷氨酰胺(glutamine,Gln)对结直肠癌HT-29细胞放射敏感性的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HT-29细胞,将对数生长期的HT-29细胞按照Gln不同浓度设置对照组(2 mmol/L,培养基基础浓度)、实验组Ⅰ(4 mmol/L)、实验组Ⅱ(6 mmol/L)、实验组Ⅲ(8 mmol/L),预处理2 h后给予Co 60源放射。通过CCK-8法检测未放射与放射后不同浓度Gln对细胞活力的影响;克隆形成实验检测放射后不同浓度Gln对细胞放射敏感性的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测放射后24 h细胞ROS水平;流式细胞仪检测放射后48 h细胞凋亡率;蛋白印迹法测定放射后各组细胞Nrf2、HO-1、cleaved-Caspase3蛋白的表达水平。结果未放射的HT-29细胞在Gln干预24 h后实验组Ⅱ、实验组Ⅲ细胞活力明显高于对照组、实验组Ⅰ(P<0.05)。HT-29细胞放射24 h后,各实验组细胞活力明显高于对照组(P<0.05);放射后14 d,各实验组细胞克隆形成数均高于对照组(P<0.05);放射后24 h,各实验组ROS水平均低于对照组(P<0.05);放射后48 h,各实验组细胞凋亡率均低于对照组(P<0.05)。实验组ⅠNrf2表达高于对照组(P<0.05);实验组Ⅱ、ⅢNrf2、HO-1表达均高于对照组和实验组Ⅰ(P<0.05),cleaved-Caspase3表达均低于对照组和实验组Ⅰ(P<0.05);实验组Ⅲcleaved-Caspase3表达低于实验组Ⅱ(P<0.05)。结论谷氨酰胺能显著降低HT-29细胞的放射敏感性,其机制与减轻氧化应激损伤和减少细胞凋亡有关,这可能不利于结直肠癌患者放疗。

通过靶向噬菌体疗法促进非小细胞肺癌放射敏感性研究

本文分析了靶向噬菌体疗法促进非小细胞肺癌放射敏感性的机制与前景展望。靶向噬菌体疗法可以通过多种机制促进非小细胞肺癌(NSCLC)的放射敏感性。未来,靶向噬菌体疗法有望成为NSCLC治疗的重要手段之一。随着对靶向噬菌体疗法的研究不断深入,其在临床应用中的疗效和安全性也将得到进一步的验证和优化。同时,靶向噬菌体疗法与其他治疗方法的联合应用也将成为未来研究的重点,有望为NSCLC患者提供更加有效的治疗方案。

沉默长链非编码RNA HOTAIR对舌鳞状细胞癌细胞放射敏感性的影响

目的:研究下调长链非编码RNA HOTAIR的表达水平对舌鳞状细胞癌细胞株CAL-27和SCC-9放射敏感性的影响。方法:设计3条干扰HOTAIR的序列,通过慢病毒载体转染至CAL-27和SCC-9中,运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证干扰效率。将细胞分为空白组(CAL-27、SCC-9)、实验组(si-HOTAIR CAL-27、si-HOTAIR SCC-9)、阴性对照组(si-NC CAL-27、si-NC SCC-9),再将以上细胞给予8 Gy电子线照射,MTT法检测各组细胞增殖,划痕实验检测各组细胞迁移,流式细胞实验检测各组细胞凋亡情况。结果:在3条慢病毒载体中,si-2及si-3可下调HOTAIR在CAL-27和SCC-9中的表达(P<0.05),且si-3干扰效率最高(P<0.05),在接受8 Gy电子线照射后,与对照组(si-NC CAL-27、si-NC SCC-9)相比,实验组(si-HOTAIR CAL-27、si-HOTAIR SCC-9)的增殖能力明显减弱(P<0.05);细胞凋亡率增加[(23.87±1.97)%vs.(46.03±2.49)%,(15.99±0.76)%vs.(39.38±2.95)%],迁移率下降[65.85%vs. 58.82%,47.81%vs. 37.78%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论:降低HOTAIR的表达水平可提高舌鳞癌细胞CAL-27和SCC-9的放射敏感性。

CircYPEL2通过miR-498/MSMO1轴调节宫颈癌细胞的放射敏感性

目的研究环状RNA yippee样2(CircYPEL2)通过miR-498/甲基甾醇单加氧酶1(MSMO1)轴调节宫颈癌细胞放射敏感性的机制。方法检测人宫颈癌细胞株C33A及其放射线抵抗细胞C33A-RR中CircYPEL2、miR-498、MSMO1的表达。将体外培养的C33A-RR细胞随机分为对照组、放射组、放射+阴性对照组、放射+CircYPEL2敲低组、放射+CircYPEL2敲低+miR-498 inhibitor组,分组转染后,检测各组细胞CircYPEL2、miR-498及MSMO1的表达、增殖、凋亡及蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达。检测C33A-RR中CircYPEL2对miR-498的靶向调节与miR-498对MSMO1的靶向调节。结果与C33A细胞相比,C33A-RR细胞中CircYPEL2的表达、MSMO1 mRNA与蛋白表达升高(t值分别为-8.125、-11.600、-11.267,P<0.05),miR-498表达降低(t=8.104,P<0.05)。对照组、放射组、放射+阴性对照组、放射+CircYPEL2敲低组、放射+CircYPEL2敲低+miR-498 inhibitor组之间的CircYPEL2、miR-498、MSMO1 mRNA表达、MSMO1蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率、凋亡细胞比例、细胞凋亡率比较差异均有统计学意义(F值分别为44.747、34.977、16.762、7.460、18.603、16.039、161.266、174.878,P<0.05);C33A-RR细胞增殖与凋亡相关蛋白表达比较,各组PCNA、CCND1、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白比较差异均有统计学意义(F值分别为15.777、13.693、81.133、78.133、51.587,P<0.05)。进一步比较发现,与对照组相比,放射组细胞各指标无明显变化(P>0.05);与对照组、放射组分别相比,放射+阴性对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05);放射+CircYPEL2敲低组细胞增殖率、集落生成率、CircYPEL2表达、MSMO1 mRNA及蛋白表达、PCNA及CCND1、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡细胞比例、细胞凋亡率、miR-498表达、Bax及caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。miR-498 inhibitor可减弱CircYPEL2敲低对放射下细胞各指标的作用。CircYPEL2可靶向下调C33A-RR细胞的miR-498表达,而miR-498可靶向下调C33A-RR细胞MSMO1表达。结论敲低CircYPEL2可通过上调miR-498而降低MSMO1表达,从而增强宫颈癌细胞的放射敏感性,最终促进其凋亡。

miR-371a-5p靶向BTG3对结直肠癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨miR-371a-5p靶向B细胞转位基因3(BTG3)对结直肠癌细胞放射敏感性的影响。方法 以结直肠癌细胞HT-29为研究对象,在HT-29细胞中转染miR-371a-5p inhibitors, qPCR检测干扰效率,采用4 Gy剂量X射线照射转染后的HT-29细胞,CCK-8和流式细胞术分别检测HT-29细胞增殖和凋亡情况,克隆形成实验分析细胞的放射敏感性。生物信息学预测miR-371a-5p的靶基因,双荧光素酶报告系统验证miR-371a-5p和BTG3的靶向关系。在HT-29细胞中共转染miR-371a-5p inhibitors和BTG3 siRNA,4 Gy X射线照射处理,分析细胞放射敏感性的变化。结果 miR-371a-5p inhibitors能够有效降低HT-29细胞中miR-371a-5p的表达(P<0.05);下调miR-371a-5p的表达能够抑制HT-29细胞增殖并促进细胞凋亡,提高HT-29细胞的放射敏感性。miR-371a-5p能够靶向负调控BTG3的表达,抑制BTG3能够拮抗下调miR-371a-5p对HT-29细胞放射敏感性的增敏作用。结论 下调miR-371a-5p可通过靶向负调控BTG3的表达提高结直肠癌HT-29细胞的放射敏感性。

下调PRDX6对食管癌EC9706细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响

目的:探讨PRDX6表达水平对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响。方法:应用GEPIA数据库分析食管癌组织PRDX6表达情况;将抑制基因PRDX6表达的“PRDX6-shRNA”质粒转染到EC9706细胞(sh-PRDX6组)。qRT-PCR和Western Blot检测转染效果。CCK8法检测增殖活力。划痕实验检测迁移能力。Transwell实验检测侵袭能力。克隆形成实验检测克隆形成能力。Western Blot检测AKT、p-AKT的蛋白表达量。结果:食管癌组织中PRDX6表达水平明显高于癌旁组织。qRT-PCR和Western Blot证实“PRDX6-shRNA”质粒有效抑制PRDX6基因表达。与对照组相比,sh-PRDX6组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著下降,放射敏感性增强。sh-PRDX6组细胞中AKT的表达水平无明显变化,而p-AKT表达水平明显下降。结论:PRDX6促进食管癌细胞EC9706的增殖、迁移、侵袭及放射抵抗。

miR-24-3p靶向CHD5影响甲状腺癌细胞迁移能力、侵袭能力和放射敏感性

目的探讨miR-24-3p调控染色体质域解螺旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)表达对甲状腺癌细胞迁移能力、侵袭能力和放射敏感性的影响。方法选取2018年9月—2020年9月杭州市萧山区第一人民医院首次确诊为甲状腺癌的患者125例,收集其癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>4 cm)和相关临床病理资料。选取人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1和人甲状腺癌细胞系KTC1、SW579、TPC-1。检测癌组织、癌旁组织和4种细胞中miR-24-3p、CHD5蛋白的表达。对SW579细胞分别转染miR-24-3p抑制物anti-miR-24-3p(anti-miR-24-3p组)和阴性对照物anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、miR-24-3p模拟物miR-24-3p mimics(miR-24-3p mimics组)和阴性对照物miR-NC(miR-NC组)、共转染anti-miR-24-3p和si-NC(anti-miR-24-3p+si-NC组)、共转染anti-miR-24-3p和si-CHD5(anti-miR-24-3p+si-CHD5组)。分析各组细胞的迁移能力、增殖能力和放射敏感性。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-24-3p与CHD5的靶向关系。结果癌组织和甲状腺癌细胞系KTC1、SW579、TPC-1中miR-24-3p相对表达量均显著高于癌旁组织和正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1(P<0.05),CHD5蛋白相对表达量均显著低于癌旁组织和正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1(P<0.05)。SW579细胞miR-24-3p相对表达量最高,CHD5蛋白相对表达量最低。有无淋巴转移、不同临床分期的甲状腺癌患者之间miR-24-3p和CHD5蛋白表达差异有统计学意义(P<0.001)。抑制miR-24-3p表达可抑制SW579细胞的迁移能力和侵袭能力,并提高SW579细胞的放射敏感性(P<0.05);miR-24-3p靶向负调控CHD5的表达;沉默CHD5可逆转抑制miR-24-3p表达对SW579细胞迁移、侵袭和放射敏感性的影响(P<0.05)。结论抑制miR-24-3p表达可上调CHD5,进而抑制SW579细胞的迁移能力和侵袭能力,提高其放射敏感性。

过表达核凋亡诱导因子1增强鼻咽癌细胞放射敏感性

目的探究核凋亡诱导因子1(nuclear apoptosis-inducing factor 1,NAIF1)对鼻咽癌细胞CNE-2R放射敏感性的影响。方法采用Western blot检测NAIF1在鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-2R的表达水平。通过慢病毒感染技术将NAIF1过表达慢病毒(LV-NAIF1组)及其阴性对照慢病毒(LV-NC组)分别感染CNE-2R细胞,采用RT-qPCR和Western blot检测NAIF1的mRNA和蛋白表达水平;采用CCK-8、克隆形成实验分别检测各组细胞在不同照射剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射下的增殖能力、克隆形成能力并计算相应的存活分数,采用流式细胞术实验检测各组细胞6 Gy照射前后的细胞周期分布情况。结果与CNE-2细胞相比,NAIF1在CNE-2R细胞中的蛋白表达水平显著降低(P<0.001)。与LV-NC组相比,LV-NAIF1组CNE-2R细胞中NAIF1的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.001)。经不同剂量照射后,与LV-NC组相比,过表达NAIF1可以抑制CNE-2R细胞的增殖能力(均P<0.05),降低CNE-2R细胞的克隆形成数和存活分数(P<0.05)。经6 Gy照射后,与LV-NC组相比,过表达NAIF1可使更多的CNE-2R细胞滞留在G2/M期(P<0.01)。结论NAIF1在鼻咽癌细胞CNE-2R中低表达,过表达NAIF1可能通过抑制细胞增殖并将细胞周期阻滞在G2/M期,从而增强鼻咽癌细胞CNE-2R的放射敏感性。

NF-κB在ACC-2和CAL-27细胞中的表达及对^(125)I粒子放射敏感性的影响

目的探讨核转录因子(NF)-κB在腺样囊性癌ACC-2细胞和舌癌CAL-27细胞中的表达及对放射性^(125)I粒子放射敏感性的影响。方法分别用放射性^(125)I粒子对ACC-2细胞和CAL-27细胞进行持续低剂量率体外照射,用噻唑蓝(MTT)法观察细胞活力,用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹分别检测NF-κB中p65亚基的表达情况;然后用NF-κB抑制剂PDTC对NF-κB的活性进行抑制后,用MTT法和流式细胞术检测两种细胞受^(125)I照射后的细胞活力和凋亡情况,分析NF-κB表达量和活性与放射敏感性的关系。结果ACC-2细胞较CAL-27细胞对^(125)I更加敏感(P<0.05)。NF-κB在ACC-2细胞和CAL-27细胞中存在明显表达差异(P<0.05)。受照射后CAL-27细胞中磷酸化p65的水平明显较ACC-2细胞高(P<0.05)。用PDTC抑制NF-κB后,ACC-2和CAL-27细胞的放射敏感性均明显增强(P<0.05)。结论NF-κB在腺样囊性癌ACC-2细胞和舌癌CAL-27细胞中的表达存在明显差异,并与两种细胞对^(125)I粒子放射敏感性有关。

干扰PAG1介导肿瘤相关巨噬细胞自噬状态提高放射抗拒喉鳞癌的放射敏感性研究

目的:探究鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白(PAG1)在喉鳞癌(LSCC)组织中的表达,以及干扰肿瘤相关巨噬细胞PAG1表达对放射抗拒喉鳞癌细胞敏感性的影响。方法:收集武汉市第一医院收治的40例LSCC肿瘤组织及邻近癌旁组织,免疫组织化学染色和RT-qPCR检测PAG1表达;将人单核白血病细胞株THP-1诱导为M2型肿瘤相关巨噬细胞,通过脂质体介导法将PAG1-siRNA转染至M2型肿瘤相关巨噬细胞,RT-qPCR和蛋白质印迹法检测转染效果,ELISA法检测巨噬细胞分泌相关细胞因子IL-6、IL-12、IL-4及IL-10含量;建立肿瘤相关巨噬细胞与放射抗拒人喉鳞癌细胞Hep-2max的共培养体系,培养4 d后收集Hep-2max细胞,经8 Gy X射线照射24 h后,MTT法检测细胞活性,流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡,免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测细胞自噬水平。结果:喉鳞癌肿瘤组织中PAG1蛋白和mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01);THP-1细胞诱导后呈不规则多边形,且胞体有尾足伸出,CD86表达减少,CD206表达明显增加(P<0.01),提示成功诱导肿瘤相关巨噬细胞;在PAG1-siRNA转染肿瘤相关巨噬细胞后,细胞中PAG1 mRNA和蛋白相对表达量较对照组均显著下降(P<0.01),培养液上清中IL-6和IL-12水平升高,IL-4和IL-10水平降低(P<0.01);诱导后的肿瘤相关巨噬细胞转染PAG1-siRNA与Hep-2max共培养,再经过8 Gy X射线照射,细胞活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.01),TUNEL阳性率升高(P<0.01),同时,LC3蛋白绿色荧光强度明显减弱,细胞中Beclin-1蛋白表达水平下降(P<0.01),P62蛋白表达水平升高(P<0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ下调(P<0.01)。结论:干扰肿瘤相关巨噬细胞中PAG1表达可改变放射抗拒人喉鳞癌细胞自噬状态,增强放射抗拒人喉鳞癌细胞的放射敏感性,诱导放疗后细胞凋亡发生。

芦荟大黄素对肝癌HepG2细胞放射敏感性的影响

目的探讨芦荟大黄素(AE)对肝癌HepG2细胞放射敏感性的影响。方法采用MTT法测定AE对HepG2细胞的IC50值,作为后续实验的药物浓度。将对数生长期HepG2细胞分为对照组、AE组、γ射线组及联合组,对照组给予常规培养液处理,AE组给予IC50浓度的AE处理,γ射线组给予8 Gyγ射线处理,联合组给予IC50浓度的AE联合8 Gyγ射线处理,每组细胞均培养48 h。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,微核试验检测细胞DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡,克隆形成实验观察AE对HepG2细胞的放射增敏作用,Western blotting检测p53及γ-H2AX蛋白表达水平。结果AE对HepG2细胞的IC50值为60μmol·L^(-1),以此作为后续实验的药物浓度。与对照组比较,AE组、γ射线组及联合组细胞增殖抑制率、微核率、凋亡率及p53、γ-H2AX蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),且联合组升高趋势最为明显(P<0.05);与γ射线组比较,联合组D_(0)、Dq及SF显著降低(P<0.05),SER为(1.81±0.24)。结论AE和γ射线均对HepG2细胞的增殖有抑制作用,并且AE对HepG2细胞具有放射增敏作用。

circ_PITX1/miR-129-5p对食管癌细胞增殖凋亡及放射敏感性的影响

目的探讨circ_PITX1对食管癌细胞增殖凋亡及放射敏感性的影响及分子机制。方法选取2018年1月至2021年1月51例食管癌患者癌组织及癌旁组织,运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定circ_PITX1和miR-129-5p的表达;将食管癌细胞EC109分为对照组、干扰circ_PITX1组、miR-129-5p Inhibitor组、干扰circ_PITX1+miR-129-5p Inhibitor组、2 Gy组、2 Gy+干扰circ_PITX1组、2Gy+干扰circ_PITX1+miR-129-5p Inhibitor组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;克隆形成实验检测细胞克隆数;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;circ_PITX1和miR-129-5p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验分析。结果食管癌组织中circ_PITX1表达比癌旁组织增加,miR-129-5p表达比癌旁组织减少(P<0.05)。单独沉默circ_PITX1或沉默circ_PITX1后用射线照射,EC109细胞抑制率和凋亡率升高,克隆数减少,Cleaved-caspase3和Cleaved-caspase9表达水平升高(P<0.05)。circ_PITX1靶向调控miR-129-5p的表达。抑制miR-129-5p可逆转沉默circ_PITX1对EC109细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响。结论沉默circ_PITX1通过靶向食管癌细胞的miR-129-5p,抑制细胞增殖,促进凋亡及增强其放射敏感性。

长链非编码RNA TUG1对鼻咽癌细胞生物学行为及放射敏感性的影响

目的对长链非编码RNA TUG1进行泛癌分析,并评估其对鼻咽癌生物学行为及放射敏感性的影响。方法基于TCGA数据库检测TUG1在泛癌中的表达情况和预后价值。用qPCR方法检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中TUG1的表达情况。用TUG1 siRNA或阴性对照siRNA转染鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞。采用MTS法、transwell实验和划痕实验检测鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。细胞克隆形成实验测定细胞放射敏感性。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。结果基于TCGA数据库的分析发现,在12种癌症类型中TUG1的表达上调。TUG1表达增加与多种癌症类型的较差预后相关。体外实验研究发现lncRNA TUG1在鼻咽癌细胞系和组织中也显著上调。TUG1高表达与TNM分期恶化有显著相关性。TUG1的高表达与鼻咽癌患者不良预后有显著相关性。下调TUG1的表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进鼻咽癌细胞凋亡,提高鼻咽癌细胞放射敏感性。结论TUG1在多种癌症类型中发挥重要作用,并与鼻咽癌的不良预后相关。TUG1可能作为鼻咽癌治疗的潜在治疗靶点。

LINC01426调控miR-384对直肠癌细胞SW1463增殖、凋亡及放射敏感性的影响

直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,放射治疗是局部晚期直肠癌治疗的重要组成,术前放疗联合化疗有利于降低直肠癌局部复发率,同时又能提高患者的保肛率及总生存率[1-2]。因此,提高直肠癌细胞对放射的敏感性具有重要意义。提高放射敏感性需寻找相关的生物标志物,研究发现lnc-RNA和miRNA影响癌细胞的放射敏感性,且与直肠癌新辅助放化疗有关[3-4]。

香菇多糖通过细胞凋亡和细胞周期阻滞增强食管癌细胞的放射敏感性

目的观察香菇多糖(LNT)对人食管癌细胞Eca109放射敏感性的影响及机制。方法常规培养Eca109细胞,MTT实验检测不同质量浓度(0、6.125、12.5、25、50、100、200、400、800μg·mL^(-1))LNT对Eca109细胞增殖的影响,并筛选后续实验浓度;LNT+放疗组和单纯放疗组细胞均经不同放疗剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后,克隆形成实验检测LNT对Eca109细胞的放射敏感性;Eca109细胞分为4组:对照组、LNT组、单纯放疗组、LNT+放疗组,流式细胞术检测各组细胞凋亡和细胞周期分布。结果与0μg·mL^(-1)LNT组比较,LNT呈浓度依赖性抑制Eca109细胞的增殖,后续LNT质量浓度选择200μg·mL^(-1);与单纯放疗组比较,LNT+放疗组Eca109细胞存活率下降,放疗增敏比SER为1.27;对照组、LNT组、单纯放疗组、LNT+放疗组细胞凋亡率分别为(4.82±1.42)%、(32.21±1.90)%、(14.14±3.07)%和(55.58±1.87)%,其中LNT+放疗组与其他3组间差异有统计学意义(t=37.301、t=15.13、t=19.937,均P<0.01);对照组、LNT组、单纯放疗组、LNT+放疗组G2/M期的比例分别为(12.55±1.18)%、(20.91±1.38)%、(38.96±1.53)%、(48.86±3.94)%,其中LNT+放疗组G2/M期比例显著高于其他3组(t=15.256、t=11.572、t=4.049,均P<0.01)。结论LNT对人食管癌细胞Eca109具有放疗增敏作用,其机制可能与细胞凋亡增强和细胞周期G2/M期阻滞有关。

SLC1A5对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株放射敏感性的影响及作用机制

目的探讨溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株放射敏感性的影响及其作用机制。方法采用直线加速器X射线和SLC1A5抑制剂L-γ-谷氨酰-对-硝基苯胺(L-γ-glutamyl-p-nitroanilide,GPNA)处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株,选取4 Gy、8 Gy剂量单独照射或分别联合3 mmol/L GPNA处理,采用CCK-8法检测细胞增殖能力;然后选取8 Gy剂量单独照射或联合3 mmol/L GPNA进行处理,分为对照组(DMSO组)、SLC1A5抑制剂组(GPNA组)、照射组(IR组)、联合组(IR+GPNA组)。采用细胞克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力。采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光探针(DCFH-DA)检测细胞内的ROS水平,丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞内的MDA含量,Mito-Tracker Red CMXRos染色实验观察细胞线粒体形态,RT-qPCR法检测前列素内环氧化物合成酶2(prostaglandin synthase 2,PTGS2)基因的表达水平。结果与DMSO组相比,4 Gy组、8 Gy组、4 Gy+GPNA组和8 Gy+GPNA组细胞增殖能力均下降(均P<0.01),且4 Gy+GPNA组、8 Gy+GPNA组细胞增殖能力均低于对应的单纯照射组(均P<0.01),其中高辐射剂量组下降更明显;与DMSO组相比,IR组、GPNA组和IR+GPNA组的细胞克隆形成能力、迁移能力、侵袭能力均降低(均P<0.01),且IR+GPNA组降低更明显。与DMSO组相比,GPNA组、IR组和IR+GPNA组都存在不同程度的细胞内ROS水平增加,线粒体形态缩小,MDA含量升高以及PTGS2基因表达升高(均P<0.05),其中IR+GPNA组变化更为明显。结论SLC1A5抑制剂在照射的基础上进一步抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力,提高细胞放射敏感性,其机制可能与铁死亡激活有关。

乐伐替尼对甲状腺癌SW579细胞放射敏感性及血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子受体表达的影响

目的:探究乐伐替尼对甲状腺癌SW579细胞放射敏感性以及对血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体(bFGFR)表达的影响。方法:体外培养甲状腺癌SW579细胞,筛选最佳放射剂量,取培养至对数生长期的SW579细胞分为对照组(常规培养SW579细胞)、放射组(使用4 Gy X射线照射SW579细胞)、乐伐替尼低(在含SW579细胞的培养基中加入5μmol/L的乐伐替尼后,再使用4 Gy X射线照射SW579细胞)、高(在含SW579细胞的培养基中加入10μmol/L的乐伐替尼后,再使用4 Gy X射线照射SW579细胞)浓度组,培养48 h后。检测SW579细胞存活率、细胞凋亡率和细胞中B细胞淋巴瘤-2相关X(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、活化胱天蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、VEGF、bFGF、bFGFR蛋白表达。结果:随着放射剂量的升高,SW579细胞存活率依次降低(均P<0.05),选取4 Gy X射线进行后续实验;与对照组相比,放射组、乐伐替尼低、高浓度组SW579细胞存活率、Bcl-2、VEGF、bFGF、bFGFR蛋白表达依次降低(均P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达依次升高(均P<0.05)。结论:乐伐替尼能增强SW579细胞的放射敏感性,其机制可能与抑制VEGF、bFGF、bFGFR蛋白表达有关。