Cyclin G1对肝癌细胞HepG2放射敏感度的影响及其机制

目的探讨Cyclin G1对肝癌HepG2细胞放射敏感度的影响及其可能的分子机制。方法通过转染Cyclin G1-siRNA构建HepG2-Cyclin G1-siRNA细胞,通过成克隆分析观察Cyclin G1对肝癌细胞放射敏感度的影响,流式细胞仪检测肝癌细胞细胞周期分布,ELISA法检测乏氧因子HIF-1α及ROS的表达,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 q-PCR显示HepG2-Cyclin G1-siRNA细胞中,Cyclin G1表达下降至正常细胞的43.5%左右,成克隆分析显示Cyclin G1-siRNA可使HepG2细胞放射敏感度增高,与正常对照组相比,放射增敏比SER_(Dq)为1.41。流式细胞分析显示HepG2-Cyclin G1-siRNA细胞与正常HepG2细胞相比,G_2/M期细胞比例增加,G_0/G_1期细胞比例下降;ELISA显示X线照射可引起HepG2细胞的HIF-1α升高,而Cyclin G1-siRNA可以引起HIF-1α的含量显著下降。ROS含量在X射线照射后表现为轻度升高,Cyclin G1-siRNA可以使ROS含量增加,联合X线照射变化更明显。Western blot显示X线照射及Cyclin G1-siRNA均可使BCL-2表达下降及Bax表达增加,其中HepG2联合X线照射组改变最明显。结论 Cyclin G1-siRNA可以上调肝癌细胞HepG2的放射敏感度,其机制可能与调节HIF-1α、ROS及凋亡相关蛋白有关。

外周血淋巴细胞微核变化值与鼻咽癌颈淋巴结转移灶放射敏感度的关系

外周血淋巴细胞微核变化值与鼻咽癌颈淋巴结转移灶放射敏感度的关系王捷１何玲２郎锦义１卢铀１王冀川１王琼２王静波关键词鼻咽肿瘤淋巴细胞微核放射敏感度中图号Ｒ７３９．６３外周血淋巴细胞微核（ＭｉｃｒｏｎｕｃｌｅｉｏｆｐｅｒｉｐｈｅｒａｌＢｌｏｏｄＬｙｍｐ...

靶向沉默RNF2基因对食管癌细胞放射敏感度的影响

目的探讨RNF2基因表达对X射线照射后食管癌细胞放射敏感度的影响。方法针对RNF2mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列(siRNA1、siRNA2和siRNA3)和阴性对照序列。瞬时转染细胞,分别命名为RNF2 siRNA1组、RNF2 siRNA2组、RNF2 siRNA3组,转染空载体组和未转染组分别命名为NC组和control组。RT-PCR和Western blot法观察食管癌ECA109细胞各组中RNF2表达变化。MTT法检测RNF2基因对ECA109增殖能力的影响。克隆形成实验检测RNF2对ECA109放射敏感度的影响。流式细胞术测定RNF2基因干扰后对细胞周期和凋亡分布的影响。结果 3对干扰序列组的RNF2基因在mRNA和蛋白表达水平低于control组和NC组,尤以siRNA1组效果最明显。选择siRNA1作为干扰组进行MTT和流式细胞术检测。MTT结果表明照射后干扰组细胞增殖明显受抑;克隆形成实验的结果显示干扰组的的D0、Dq、SF2显著低于control组和NC组,而干扰组的外推数N(extrapolation number N)值明显高于后者,可见干扰组细胞的放射敏感度高于control组和NC组;流式细胞术显示照射后RNF2 siRNA组G0/G1期明显高于control组和NC组,S期显著低于control组和NC组。结论 siRNA干扰技术有效地抑制了食管癌ECA109细胞中RNF2基因的表达,联合X线照射后显著抑制了细胞增殖,消除了细胞周期阻滞在S期,增加了食管癌的放射敏感度。

复方苦参注射液增加肺癌H1299细胞放射敏感度的研究

目的观察复方苦参注射液对肺癌H1299细胞放射敏感度的影响,并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐法检测放射对H1299细胞增殖的影响;采用流式细胞法检测H1299细胞凋亡率;克隆形成试验检测各组H1299细胞的存活率。结果不同浓度复方苦参注射液处理H1299细胞24、48、72 h的IC50分别为14.46、8.51、3.52 mg/mL,对H1299细胞的毒性有一定的剂量和时间依赖性。苦参放射组H1299细胞增殖抑制率分别为33.03%、34.00%,单纯放射组抑制率分别为12.73%、15.44%,差异有统计学意义(P<0.05)。苦参放射组H1299细胞的凋亡率为11.0%,单纯放射组凋亡率为6.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。单纯放射组H1299细胞的存活率为16.3%,复方苦参注射液联合放射可使H1299细胞存活率降为12.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论复方苦参注射液能增加放射线诱导的肺癌H1299细胞凋亡,从而提高肺癌H1299细胞的放射敏感度。

丁酸钠对胶质瘤细胞放射敏感度的影响

目的研究丁酸钠(sodium butyrate,NaB)对胶质瘤细胞U-251的放射增敏作用及其机制。方法采用克隆形成实验分析NaB对U-251细胞的放射增敏作用;采用反转录PCR以及Western blot的方法评价NaB对DNA损伤修复相关基因Ku70的mRNA及蛋白表达水平的影响。结果 NaB作用组细胞放疗后存活率明显降低,放射增敏比值(SER)为1.23;而且其在mRNA及蛋白水平降低了DNA损伤修复基因Ku70的表达(P<0.05)。结论丁酸钠能增加胶质瘤细胞的放射敏感度,这可能与丁酸钠能下调Ku70蛋白表达有关。

NF-κB调节肿瘤放射敏感度机制的研究进展及临床应用展望

NF-κB作为核转录因子调节众多基因的转录活性包括免疫调节、生长调节、肿瘤的发生和细胞的损伤修复。放射治疗是肿瘤治疗的主要方法,提高肿瘤细胞的放射敏感度可以显著提高肿瘤的控制率和患者的生存期。本文将对NF-κB调节肿瘤细胞放射敏感度的机制及其在放射治疗方面的临床应用前景进行综述。

Ki-67在下咽鳞状细胞癌中的表达及其与放射敏感度的关系

目的探究Ki-67在下咽鳞状细胞癌组织中的表达情况及其与下咽鳞癌患者放射敏感度的关系。方法收集180例放疗前经活检诊断为下咽鳞状细胞癌的肿瘤组织标本,另取20例正常下咽黏膜组织标本,采用免疫组化方法检测组织标本中Ki-67蛋白表达情况。采用6MV-X线直线加速器对下咽鳞癌患者进行常规放射治疗,放疗结束后根据X线片评价标准评估疗效。分析Ki-67表达与患者临床病理特征及单纯放疗疗效的关系。采用Kaplana-Meier法评估Ki-67表达与患者放疗后生存率间的关系。结果 Ki-67在下咽鳞癌组织中的蛋白表达强度(97.7%)显著高于正常下咽黏膜组织(0.0%),差异有统计学意义(P <0.05);Ki-67表达与下咽鳞癌患者临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05),与患者性别、年龄、原发肿瘤直径及组织分化程度等差异均无统计学意义(P>0.05);Ki-67表达强度与近期放疗疗效呈正相关(P <0.05);Ki-67表达强度与远期PFS和OS均有关(P>0.05)。多元Logistic回归分析表明临床分期、淋巴结转移、Ki-67表达强度与放疗疗效相关。结论 Ki-67的表达能反映出下咽鳞状细胞癌放射敏感度,可作为预测下咽鳞癌放疗效果的重要指标。

人基因BAG-1高表达载体的构建及其对肺腺癌细胞放射敏感度的影响

目的通过构建BAG-1高表达载体来研究BAG-1在肺腺癌细胞放射敏感度中的作用。方法提取人肺癌A549细胞中总RNA,通过RT-PCR扩增BAG-1基因,构建pcDNA3.1-BAG-1表达载体,转染肺癌细胞A549,通过Western blot筛选出BAG-1高表达A549细胞株。通过克隆形成实验,研究BAG-1对肺腺癌细胞放射敏感度的影响。结果成功构建pcDNA3.1-BAG-1载体;筛选出BAG-1高表达A549细胞株;BAG-1高表达降低肺腺癌细胞放射敏感度。结论 BAG-1高表达参与放射抵抗,有望成为肿瘤治疗的新靶点。

EGFR抑制剂调节DNA双链断裂修复对放射敏感度影响的研究进展

0引言 肿瘤放射治疗过程中DNA损伤具有多样性，包括碱基和核苷酸水平的损伤以及DNA链断裂等。其中DNA双链断裂（double-strand breaks，DSBs）是最常见的损伤，DSBs的修复是一个很复杂的过程，通过以下两条途径进行修复：非同源末端连接（nonhomologous end-joining，NHEJ）和同源重组修复（homologous recombination，HR）。

靶向notch1的siRNA对U87-EGFRv Ⅲ胶质瘤细胞株凋亡和放射敏感度的影响

目的探讨靶向notch1的siRNA对过表达EGFRvⅢ的U87胶质瘤细胞株U87-EGFRvⅢ凋亡和放射敏感度的影响。方法利用脂质体转染合成的si RNA转染U87-EGFRvⅢ细胞。用RT-PCR和免疫印迹法来分别检测notch1的蛋白和m RNA的表达水平;用AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;用平板集落形成实验检测转染后细胞的放射敏感度。结果合成的notch1 siRNA可有效抑制notch1在m RNA和蛋白水平的表达(P<0.05)。转染notch1 si RNA作用后细胞凋亡率比对照组明显增加(P<0.05)。平板集落形成实验初步证明notch1 siRNA可提高U87-EGFRvⅢ细胞的放射敏感度。结论下调notch1基因可促进U87-EGFRvⅢ细胞的凋亡和提高其放射敏感度,为研究notch1基因在肿瘤放疗中的作用及其靶向联合治疗胶质瘤提供基础。

lncRNA SBF2-AS1低表达提高食管鳞癌的放射敏感度

目的探究长链非编码RNA SBF2-AS沉默后对食管鳞癌细胞放射敏感度的影响。方法用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TE-13和HET-1A细胞中SBF2-AS1的表达水平。将TE-13细胞分为si-NC组、si-SBF2-AS1组、IR+si-NC组、IR+si-SBF2-AS1组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)和EDU(胸腺嘧啶核苷酸类似物)检测各组细胞增殖。流式细胞术检测各组细胞凋亡。蛋白质印记(Western blot)法检测各组细胞中E2F1蛋白的变化。结果TE-13细胞中SBF2-AS1的表达水平明显高于HET-1A(P<0.05)。与IR+si-NC组比较,IR+si-SBF2-AS1组细胞存活分数呈剂量依赖性显著下降(P<0.05)。与si-NC组比较,IR+si-NC组、si-SBF2-AS1组和IR+si-SBF2-AS1组在48h和72h的A值显著降低(P<0.05)。与IR+si-NC组比较,IR+si-SBF2-AS1组48h和72h的A值显著降低(P<0.05)。与si-SBF2-AS1组比较,IR+si-SBF2-AS1组48h和72h的A值显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,IR+si-NC组、si-SBF2-AS1组和IR+si-SBF2-AS1组增殖率显著降低(P<0.05)。与IR+si-NC组比较,IR+si-SBF2-AS1组增殖率显著降低(P<0.05)。与si-SBF2-AS1组比较,IR+si-SBF2-AS1组增殖率显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,IR+si-NC组、si-SBF2-AS1组和IR+si-SBF2-AS1组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与IR+si-NC组比较,IR+si-SBF2-AS1组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与si-SBF2-AS1组比较,IR+si-SBF2-AS1组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与IR+si-NC组比较,IR+si-SBF2-AS1组E2F1蛋白的表达量显著下降(P<0.05)。结论敲除SBF2-AS1可以通过抑制TE-13细胞增殖,促进其凋亡,来增强其对放射治疗的敏感度,为提高食管鳞癌放射治疗疗效提供一个新的靶点。

抑制DLK1表达对食管癌细胞放射敏感度的影响

目的探讨抑制DLK1的表达对食管癌细胞放射敏感度的影响。方法采用克隆形成实验验证KYSE-R与KYSE细胞的放射敏感度差异,RT-PCR和Western blot检测DLK1的表达。选用最佳DLK1干扰序列转染KYSE-R细胞,4 Gy射线处理后克隆形成实验检测KYSE-R细胞放射敏感度,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果KYSE-R细胞表现出比KYSE细胞更强的放射抗拒性,DLK1在KYSE-R中的表达显著高于KYSE,且siDLK1-3干扰效果最佳(均P<0.05)。4 Gy射线照射后DLK1干扰组细胞存活力显著低于对照组,而DLK1干扰组细胞凋亡率和G2/M期细胞比例明显高于对照组(均P<0.05)。结论抑制DLK1表达可通过降低细胞存活、促进细胞凋亡和增加G2/M期细胞比例、增强放射敏感度,为食管癌放射增敏研究提供新的靶点。

胶质瘤能量代谢与放射敏感度的研究进展

放射治疗是胶质瘤重要的辅助治疗手段,尽管近年来胶质瘤的综合治疗取得了一定进展,然而其预后仍然较差,如何提高胶质瘤的放射敏感度是当前胶质瘤研究的热点之一。胶质瘤能量代谢改变促进了其恶性进展及放化疗抵抗,然而其确切机制仍然不清,该文就胶质瘤能量代谢改变及其与胶质瘤放射敏感度的研究进展进行综述,旨在为进一步提高胶质瘤放射敏感度奠定基础。

双泛素蛋白诱导自噬对肝癌细胞放射敏感度的影响

目的探讨双泛素蛋白(FAT10)对肝癌细胞自噬水平的调节作用,并进一步明确FAT10诱导自噬对肝癌细胞放射敏感度的影响。方法本实验首先通过Western blot及免疫组织化学方法分别从肝癌细胞及临床标本中验证FAT10对自噬相关蛋白的调控作用,进而通过克隆存活实验以明确FAT10诱导自噬对肝癌细胞放射敏感度的调节作用。结果 FAT10过表达可促进自噬相关蛋白Beclin1和LC3-Ⅰ/Ⅱ表达并抑制p62的表达,且经X射线照射后上述表达改变更明显。免疫组织化学分析结果显示FAT10与Beclin1具有显著相关性(P<0.01),高表达FAT10的肝癌标本同时伴有Beclin1表达升高。克隆存活实验表明FAT10过表达增加肝癌细胞的放射抵抗性,敲除FAT10则增加肝癌细胞的放射敏感度。当使用自噬抑制剂3-MA或特异性干扰Beclin1以抑制肝癌细胞发生自噬后则上述FAT10表达改变不能引起肝癌细胞的放射敏感度的改变。结论 FAT10表达增加可通过诱导自噬形成进而增强肝癌细胞的放射抵抗性。

沉默UBE2N对人喉鳞癌hep-2细胞放射敏感度的影响

目的探讨泛素交联酶UBE2N在喉鳞癌hep-2细胞放射敏感度中的作用。方法采用qPCR和Westernblot技术检测UBE2N小分子沉默RNA(siRNA)在hep-2细胞中沉默UBE2N表达的效率;运用RNA沉默技术抑制UBE2N基因表达,经0、2、4、6、8GyX线照射后,CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果 UBE2N siRNA显著抑制了hep-2细胞中UBE2N mRNA和蛋白的表达;沉默UBE2N显著增强hep-2细胞增殖能力;沉默UBE2N,经一定剂量射线照射后,hep-2细胞增殖能力显著高于对照组、细胞S期比例显著高于对照组,而G2期比例显著降低,细胞凋亡率显著低于对照组,而克隆形成能力显著高于对照组。结论UBE2N作为一个抑癌基因,通过调控细胞增殖、周期、凋亡及克隆形成能力调节喉鳞癌放射敏感度。

下调VEGF表达影响鼻咽癌细胞放射敏感度的机制

目的应用RNA干扰技术抑制人鼻咽低分化鳞状上皮细胞癌细胞株CNE-2中血管内皮生长因子(VEGF)表达,研究阻断VEGF基因表达对鼻咽癌细胞放射敏感度的影响及机制。方法构建针对VEGF的siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA(CNE-2组)、1个阴性对照质粒(CNE-2/Neg-siRNA组)、经脂质体转染至CNE-2细胞(CNE-2/VEGF-siRNA组),用平板克隆形成实验检测在6MV-X线0、2、4、6、8、10 Gy照射后克隆形成能力及通过单击多靶模型、线性二次模型拟合放射生物学参数,流式细胞检测分析细胞周期和细胞凋亡的变化,用RT-PCR定量分析三组细胞中Cyclin D1、Cyclin E、P16和P53的mRNA表达。结果经6MV-X线0、2、4、6、8、10 Gy照射后细胞存活率显著下降,CNE-2/VEGF-siRNA组细胞经D0和2 Gy照射后的存活分数明显低于CNE-2组、CNE-2/Neg-siRNA组;CNE-2/VEGF-siRNA组中G1/S期细胞周期阻滞更为明显。在Cyclin D1、Cyclin E、p16和p53基因中,Cyclin D1mRNA表达在放疗后6、12和24 h进行性升高,差异有统计学意义,而其他基因变化差异无统计学意义,Western blot检测显示Cyclin D1蛋白表达在放疗后24 h明显升高。结论下调VEGF表达可增加鼻咽癌细胞的放射敏感度,其机制可能是通过Cyclin D1信号通路途径使细胞周期发生G1/S期阻滞。

靶向抑制CPEB4对鼻咽癌细胞的影响及放射增敏的机制研究

目的本研究于2016年3~6月期间探讨靶向抑制CPEB4对鼻咽癌细胞生物学行为以及放射敏感度的影响。方法利用RNAi技术构建慢病毒载体靶向抑制CPEB4基因的干扰序列;采用CCK-8法绘制CNE-2-sh CPEB4、5-8Fsh CPEB4、CNE-2及5-8F的生长曲线(增殖能力);采用Transwell法检测CNE-2-sh CPEB4、5-8F-sh CPEB4迁移能力的改变;采用流式细胞术法检测CNE-2-sh CPEB4、5-8F-sh CPEB4凋亡率的改变;采用克隆形成实验检测CNE-2-sh CPEB4、5-8F-sh CPEB4、CNE-2及5-8F细胞的放射敏感度差异。采用Western blot法检测CNE-2-sh CPEB4,5-8F-sh CPEB4、CNE-2及5-8F细胞EMT相关蛋白表达改变。结果 CNE-2-sh CPEB4、5-8F-sh CPEB4分别与CNE-2及5-8F对照,增殖速度以及迁移能力减弱;凋亡率无明显改变,放射敏感度增加。Western blot法检测了CPEB4靶向抑制后EMT表型相关蛋白表达改变,结果提示E-cadherin表达上调,slug、snail以及vimentin的表达下调相关,推测靶向抑制CPEB4后鼻咽癌放射敏感度增强可能与EMT相关蛋白及因子的表达改变相关。结论靶向抑制CPEB4蛋白表达后,鼻咽癌细胞系的增殖能力、体外迁移能力显著减弱,放射敏感度明显增强,其机制可能与CPEB4抑制EMT表型相关,E-cadherin表达上调,vimentin表达下调,E-cadherin表达上调可能与抑制E-cadherin表达的转录因子slug、snail表达下调相关。

X线辐射剂量对结直肠癌细胞中microRNA-221和p57^(kip2)表达的影响

目的探讨不同剂量X线辐射对人结直肠癌Caco2细胞系中microRNA-221(miR-221)和p57kip2表达的影响。方法常规培养Caco2细胞系并分为5组,分别给予不同剂量X线(0、2、4、6和8 Gy)照射,24 h后提取细胞总RNA和蛋白质,应用real-time Q-PCR检测细胞中miR-221和p57kip2mRNA的表达水平,Western blot检测p57kip2蛋白的表达变化。结果 Caco2细胞系在不同照射剂量下,miR-221表达水平随着照射剂量的增加而增加,而p57kip2蛋白表达水平则随着照射剂量的增加而逐步降低,且呈剂量依赖效应,两者差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论放射线辐射剂量可影响结直肠癌细胞中miR-221/p57kip2调控通路,抑制miR-221表达可能会提高结直肠癌细胞的放射敏感度。

儿童X线检查中的防护

随着医疗健康水平的提高，X线检查在儿童疾病检查中的应用越来越广泛，同时对儿童的有害效应也引起了家长的普遍关注。儿童的放射敏感度是中年成人的10倍多，女孩高于男孩’年龄越小危险系数越高，，因此，应重视儿童的辐射防护。在满足临床诊断需要的前提下，为使儿童在检查中接受最小的X线照射剂量，得到最佳的诊断信息，笔者采取了一些相应的方法，现与同道交流，报告如下。

人肝癌细胞BEL-7402非常规照射模式生物效应探讨

目的探讨不同照射模式对人肝癌细胞株BEL-7402生物效应变化影响及其与人肝细胞株QSG-7701放射敏感度差异。方法 6MVX线两种模式照射BEL-7402细胞(包括0、1、2、3、5、7、9、10Gy共8个吸收剂量点,剂量率3Gy/min):(1)急速照射组,照射完成时间0～4min;(2)模拟三维适形照射组:照射完成时间:12～15min。成克隆分析法计算存活分数,多靶单击数学模型拟合曲线,求出SF2、D0、Dq等参数值;6MVX线单次5Gy照射体外培养的BEL-7402、QSG-7701细胞,采用MTT比色法、流式细胞术测定细胞受照后不同时间存活率、凋亡率、细胞周期。结果 BEL-7402细胞模拟急速照射组和三维适形照射组D0、Dq、SF2值分别为1.78和1.69、1.45和1.54、0.625和0.654;QSG-7701细胞照后24h凋亡率最高(18%),而BEL-7402细胞照后12h凋亡率最高(32%),存活率最低(65%),两株细胞照后12h凋亡率和存活率差异最大(P<0.01)。结论三维适形照射模式下分次照射时间延长,生物效应下降;BEL-7402及QSG-7701两株细胞在照后存在放射敏感度差异。