三种试剂盒与放射配体法检测谷氨酸脱羧酶抗体的比较

目的为合理选择谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)检测试剂盒及准确判定结果提供依据。方法采用2种酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒和1种免疫放射(IRMA)试剂盒检测88例已经放射配体(RLA)法核实抗体滴度的血清标本,对比各试剂盒检测结果与 RLA 法的一致性并选择一致性较好的试剂盒;与 RLA 法同时检测140例门诊连续就诊糖尿病患者的血清标本,确定经该试剂盒筛查后需采用 RLA 法复查标本的浓度范围。结果①3种试剂盒与 RLA 法检测结果一致性为Medizym 试剂盒(75%)>RSR 试剂盒(73.9%)>Biomerica 试剂盒(62.5%),Kappa 值分别为Medizym 试剂盒(0.408,中度)>RSR 试剂盒(0.405,中度)>Biomerica 试剂盒(0.185,较差);②3种试剂盒受试者工作特征(ROC)曲线下面积:Medizym 试剂盒(0.812)>RSR 试剂盒(0.727)>Biomerica 试剂盒(0.666);③3种试剂盒检测结果与 RLA 法相关性为 RSR 试剂盒(r=0.992)>Medizym 试剂盒(r=0.791)>Biomerica 试剂盒(r=-0.055);④RSR 试剂盒检测标本浓度为0.25～0.99 U/ml 者需进一步采用 RLA 法复查。结论 RSR 和 Medizym 试剂盒检测 GAD-Ab 效果较好。RSR 试剂盒检测GAD-Ab 浓度值为0.25～0.99 U/ml 时,建议采用 RLA 法复查。

EB病毒受体的放射配基结合分析

用３Ｈ－ＴｄＲ标记爱波斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）进行结合饱和实验和竞争性抑制实验检测３种类型细胞的ＥＢＶ受体。结果表明，Ｂ淋巴细胞性白血病细胞系Ｒａｊｉ细胞存在高低两种亲和性ＥＢＶ结合位点，其Ｋｄ１＝１．２５×１０（－１３）ｍｏｌ／Ｌ，Ｂ（ｍａｘ）１＝９．８９病毒粒子／细胞；Ｋｄ２＝２．８０×１０（－１２）ｍｏｌ／Ｌ，Ｂ（ｍａｘ）２＝１７０．３５病毒粒子／细胞，而ＥＢＶ不与红白血病细胞系Ｋ５６２细胞结合。上皮细胞性低分化鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ细胞也表达ＥＢＶ受体，其Ｋｄ＝６．１７×１０（－１３）ｍｏｌ／Ｌ，Ｂ（ｍａｘ）＝１０．２４病毒粒子／细胞。ＥＢＶ及α干扰素均能阻止３Ｈ－ＥＢＶ与Ｒａｊｉ细胞或ＣＮＥ－２Ｚ细胞的特异性结合。

MEC-1、Mc3细胞的生长抑素受体表达及其与放射配基结合特性的研究

目的 探讨人涎腺粘液表皮样癌细胞系 (MEC 1)及人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)生长抑素受体 (SSTR) 2种亚型 (SSTR1、SSTR2 )的表达 ,及两者与SSTR的放射配基1 2 5I RC 16 0的结合差异。方法 ①采用细胞计数法、软琼脂法等观察MEC 1及Mc3细胞株生物学特性 ;②以原位杂交法检测MEC 1、Mc3细胞株SSTR1及SSTR2亚型的表达情况 ;③以放射配基结合分析法分析MEC 1、Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0结合情况。结果 ①MEC 1、Mc3细胞生长稳定 ,Mc3细胞较MEC 1生长速度略快 ,克隆形成率高 ;②MEC 1细胞高度表达SSTR1及SSTR2 ,表达率分别为 82 .6 %和 81.7% ;Mc3细胞未见 2种亚型表达 ;③MEC 1和Mc3细胞与1 2 5I RC 16 0的特异结合率分别为 (2 3.8± 9.4 ) %和 (3.2± 2 .3) % ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 MEC 1高度表达SSTR1及SSTR2 ,其与SSTR配基RC 16 0的特异结合率显著高于Mc3细胞。

IL-2受体放射配基结合分析法的建立

为建立一种稳定可靠的白细胞介素-2受体(IL-2R)放射配基结合分析(RBA)法,对6例健康男性取血分离并培养外周血单个核细胞(PBMC),进行 IL-2R 多点法 RBA;10例健康男性进行 PBMC IL-2R 单点法 RBA。结果:多点法 RBA测得每个细胞高亲和力 IL-2R 的数量为1125.7±180.4个,其 Kd_(高)=(7.060±2.928)×10^(-11)mol/L;低亲和力 IL-2R 的数量为12 524.5±3 816.0个,其 Kd_(低)=(2.374±0.924)×10~9mol/L。单点法 RBA 测得每个细胞表面高亲和力 IL-2R 的数量为1180.4±291.8个;低亲和力 IL-2R 的数量为12430.1±3161.2个。两种方法所测数据无明显差异。因此,单点法RBA 是一种简单有效的测定 IL-2R 方法。

淋巴细胞β受体与放射配基结合所需孵育时间的确定

介绍理论运算和实验测量相结合，确定淋巴细胞膜碎片β受体与标记配基结合所需平衡时间的方法。结果表明：二种方法所得平衡时间基本一致，多点法时平衡时间需２５～３０ｍｉｎ；单点法时需５～７ｍｉｎ。

人脐带和胎盘血管β受体的放射配基检测

建立放射配基结合实验方法,并用此法检测人脐带和胎盘血管是否存在β受体,为开拓β受体拟似剂改善子宫胎盘血循的用途提供依据。

钙释放通道放射配基分析法的建立

目的用心肌匀浆建立心肌肌浆网钙释放通道检测方法，并观察其在高血压中的变化。方法用３Ｈ标记兰尼定（ｒｙａｎｏｄｉｎｅ），探索在大鼠心肌匀浆中建立钙释放通道放射配基分析的最佳条件，并对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）左室心肌钙释放通道进行饱和实验。结果①保温时间在０～６０分钟内，３Ｈｒｙａｎｏｄｉｎｅ与心肌钙释放通道结合量迅速增加，９０分钟达平衡；匀浆蛋白在０～４００μｇ，３Ｈｒｙａｎｏｄｉｎｅ结合量与蛋白质浓度呈直线关系；反应介质中游离钙浓度直接影响３Ｈｒｙａｎｏｄｉｎｅ的结合量。②ＳＨＲ及正常对照组（ＷＫＹ）标准饱和曲线及Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图显示，３Ｈｒｙａｎｏｄｉｎｅ的特异性结合高，呈单位点结合等特点，ＳＨＲ组最大结合量（Ｂｍａｘ）值明显高于ＷＫＹ组（Ｐ＜００１）。结论用３Ｈｒｙａｎｏｄｉｎｅ可在心肌匀浆中进行钙释放通道放射配基分析，且发现３ＨｒｙａｎｏｄｉｎｅＢｍａｘ升高与高血压左室肥厚密切相关。

吗啡成瘾大鼠四个脑区μ阿片受体的变化

目的 :观察吗啡成瘾大鼠下丘脑、额叶皮质、海马和纹状体内μ阿片受体数量和基因表达的变化。方法 :剂量递增腹腔注射吗啡建立大鼠成瘾模型 ,断头处死大鼠后分离四个脑区 ,以 3H - DAGO为标记配体进行放射配体测定 ;以β- actin为内参照进行 RT- PCR。结果 :腹腔注射吗啡 9d后成功建立成瘾大鼠模型。在放射配体实验中 ,对照组下丘脑、额叶皮质、海马、纹状体的μ受体数量 (fm ol/ mg)分别为 12 6 .5± 2 7.9、12 2 .6± 2 1.2、135 .3± 12 .6、178.7± 2 6 .7;在成瘾组分别为 76 .9± 2 7.3、95 .9± 2 0 .1、6 7.8± 15 .6、138.9± 19.8,较对照组显著下降 (P<0 .0 5 )。 RT- PCR结果显示 ,对照组下丘脑、额叶皮质、海马、纹状体内μ受体 m RNA表达量分别为 9.3± 1.2、3.2± 0 .8、3.7± 0 .3、5 .0± 1.7;成瘾组分别为 1.0± 0 .7、2 .5± 1.1、1.3± 0 .5、1.7± 0 .8,除额叶皮质外均较对照组显著降低 (P<0 .0 5 )。结论 :大鼠在吗啡成瘾过程中脑内出现 μ受体基因表达的下降和 μ受体的下调。推测 μ受体的下调可能是引起吗啡成瘾的原因之一 。

大鼠感染性脑水肿时NMDA受体的变化

测定百日咳菌液（ＢＰ）所致大鼠感染性脑水肿（ＩＢＥ）对３ＨＭＫ８０１与大脑皮层神经细胞特异结合的影响。从大鼠左颈总动脉注入ＢＰ，制备ＩＢＥ模型。雄性ＳＤ大鼠随机分３组：①对照组（ＮＳ，ｎ＝１１）；②ＩＢＥ组（ＢＰ，ｎ＝１２）；③ＭＫ８０１＋ＢＰ预处理组（ＭＫ８０１，ｎ＝４）。０２ｍｌ／ｋｇ体重生理盐水或ＢＰ注入左颈总动脉作为ＮＳ或ＢＰ组；每天腹腔注射０５ｍｇＭＫ８０１／ｋｇ体重，共２天，然后注入ＢＰ为ＭＫ８０１组。注射ＢＰ２４小时后断头取脑。Ｎ甲基Ｄ天冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体与３ＨＭＫ８０１的特异结合用放射配体结合分析法测定，Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图。结果，ＮＳ及ＢＰ组的Ｂｍａｘ分别为０６２３±００８２和０６０６±００８７ｐｍｏｌ／ｍｇ蛋白质（ｔ＝０４８，Ｐ＞００５），Ｋｄ分别为４３１±４２和３０５±３０μｍｏｌ／Ｌ（ｔ＝７８，Ｐ＜００５）。ＭＫ８０１预处理减少ＮＭＤＡ受体的特异结合。表明在此脑水肿模型中ＮＭＤＡ受体总数未发生变化，但亲和力明显增高，其增高能被预先腹腔注入的ＭＫ８０１抑制。

肥胖者外周脂肪组织中leptin受体水平的研究

目的 研究肥胖者外周脂肪组织瘦素 (leptin)受体表达及探讨肥胖发生发展的机制。方法 用放射配基受体结合方法 ,检测 71例受检者 (其中肥胖 32例 ,超重 1 9例 ,正常对照 2 0例 )外周脂肪组织leptin受体密度。结果 随着体重指数 (BMI)的增加 ,肥胖组和超重组leptin受体密度与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1 ) ,肥胖组与超重组比较差异亦有显著性 (P <0 0 1 ) ;而受体与leptin的结合能力 (Kd 值 )差异无显著性 (P >0 0 5)。 3组间Kd 值差异无显著性 ,表明leptin受体与配基的结合能力与BMI无关。从散点分布图看 ,BMI越大其leptin受体密度越小 ,BMI与最大结合量相关 (r=- 0 76 ,P <0 0 1 )。结论 肥胖者外周脂肪组织中leptin受体的表达与BMI密切相关 ,而肥胖者血液中leptin水平升高 ,表明体内存在leptin受体水平下调致leptin耐受 ,继而形成肥胖。

原代培养脑细胞衰老过程中M胆碱受体的变化

为代培养脑细胞衰才过程中Ｍ受体密度及其反应性的动态变化，采用＾３Ｈ＿ＱＮＢ结合分析法测定Ｍ受体结合位点数，以Ｍ受体激动剂Ｃａｒｒｂａｃｈｏｌ刺激ＣＧＭＰ升高的程度作为Ｍ受体反庆性的指标。ＣＧＭＰＩ要用放射免疫分析法。结果：培养２周后脑细胞的突起开始断裂，脑体萎缩，出现明显衰老的特征。Ｍ受体结合位点于１２天达到高峰，而Ｍ受体对Ｃａｒｂａｃｈｏｌ的反应性于９天达到高峰，至１２天已明显下降。

胞核雌激素受体分析对判断乳腺癌、卵巢癌组织雌激素受体状态的临床意义

采用放射配基结合分析法,在测定胞浆雌激素受体(EcR)的同时分析胞核雌激素受体(EnR)含量,以评估其对乳腺癌、卵巢癌组织 ER 状态的影响。在151例乳腺癌组织中,EcR、EnR 同时阳性的检出率为36.42%,叫显低于 EcR 的阳性率(55.63%);124例卵巢癌组织中,EcR、EnR 同时阳性的检出率为34.68%,亦明显低于 EcR 的阳性率(51.61%)。在 EcR 阳性组织中有65.48%的乳腺癌和67.19%的卵巢癌可以同时在胞浆胞核中测到较高水平的 ER,提示在判断 ER状态时,综合评价 EcR、EnR 较单纯分析 EcR 含量更为准确。

大肠癌雄激素受体的表达

目的探讨大肠癌组织、癌周粘膜组织及外周血白细胞雄激素受体(AR)的含量与大肠癌发生发展的关系。方法应用放射配体结合分析法(RBA)测定38例行手术切除的大肠癌组织、癌周粘膜组织及外周血白细胞雄激素受体(AR)的含量;同时用放射免疫法(RIA)测定大肠癌患者及正常人血浆雄激素(睾酮T)的水平,结合临床病理资料进行统计分析。结果癌组织与癌周粘膜组织相比,AR含量明显升高,结肠癌组织蛋白AR:56±10pfmol/g^(-1);直肠癌组织AR蛋白:57±12pmol/g^(-1);结肠癌和直肠癌周粘膜组织AR蛋白分别为34±10pmol/g^(-1)和27±12pmol/g^(-1)(P<0.01);(2)高分化的癌组织蛋白AR含量(63±8pmol/g^(-1))明显高于低分化者(38±4pmol/g^(-1))(P<0.01);(3)大肠癌患者血浆睾酮水平轻度增加;但白细胞AR表达:男(1186±127)位点,细胞^(-1);女(894±109)位点。细胞^(-1)明显高于正常对照组男(785±112)位点,细胞^(-1);女(697±105)位点,细胞^(-1)(P<0.01)。结论大肠癌的发生可能与癌组织AR含量升高有关,AR含量与肿瘤的分化程度存在相关性。

门静脉高压症大鼠内脏血管壁上血管紧张素Ⅱ受体的变化

为探讨门静脉高压症（ＰＨＴ）内脏高动力循环的发生机理，我们采用放射配基结合分析法检测肝前型ＰＨＴ大鼠内脏血管壁上血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）受体的最大结合容量（Ｂｍａｘ）和平衡解离常数（Ｋｄ）变化。结果：ＰＨＴ组（ｎ＝２０）肠系膜上动脉和门静脉壁上ＡⅡ受体的Ｂｍａｘ（分别为２０６．９±３９．３ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白和３１．５±９．２ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白）较对照组（ＳＯ，ｎ＝１６，分别为２９７．２±４４．７ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白和５３．４±１２．１ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白）明显降低（Ｐ＜０．０１）；肠系膜上动脉的Ｋｄ值（１．０３±０．１１ｎｍｏｌ／Ｌ）较ＳＯ组（０．８８±０．０８ｎｍｏｌ／Ｌ）明显升高（Ｐ＜０．０５），门静脉的Ｋｄ值虽较ＳＯ组略有升高，但无统计学意义。本实验结果表明，ＰＨＴ大鼠内脏血管对ＡⅡ反应性下降的原因之一在于血管壁上ＡⅡ受体的数量减少和亲和力下降，从而对高动力循环形成起一定的介导作用。

良性增生前列腺组织上皮和间质细胞雄激素受体测定

用~3H-Mibolerone为放射性配体,分别测定了正常人(n=8)及良性增生(n=20)前列腺上皮、间质细胞雄激素受体(AR),结果表明,AR含量以fmol/mgDNA表示时,正常前列腺组织上皮、间质部分分别为352.3±150.9和728.7±369.4;良性前列腺增生(BPH)组织上皮、间质部分分别为358.0±161.8和471.9±254.0,经统计学处理,AR在BPH及正常前列腺组织上皮、间质部分之间差异无显著性,表明AR在前列腺组织中的分布和含量与BPH的发病无直接关系。

抗大鼠M_1、M_2胆碱能受体亚型抗体的制备及鉴定

人工合成大鼠Ｍ１和Ｍ２受体亚型的羧基末端１７肽（Ｍ１）和１９肽（Ｍ２），联接血蓝蛋白后免疫家兔，用固相放射免疫分析法及酶联免疫吸附分析鉴定抗体．７只家兔抗血清均在１００００倍稀释度以上仍显示一定的特异结合，并具很好的特异性．免疫化学分析显示两种抗血清都能与大鼠脑组织切片发生特异结合．竞争结合反应则表明它们不影响放射配基与Ｍ受体的结合．初步进行了大鼠脑Ｍ１和Ｍ２受体的放射配基结合免疫沉淀分析，两种抗体都得到典型的单位点饱和曲线，非特异结合较低．