放射配体受体分析法对日本血吸虫体内5-HT受体的测定

采用放射配体-受体分析法(RLBA)测定了日本血吸虫体内5-羟色胺(5-HT)受体及螺环哌啶酮(spiroperidol)对5-HT受体与3H-5-HT结合反应的影响。结果证实:日本血吸虫体内存在5-HT受体,与配体5-HT可进行饱和的、特异的结合,其Scatchard图呈下凹曲线,表明5-HT受体的复杂性和不均一性。其最大结合容量(Bmax)为210.4fmol/mgprotein,解离常数(Kd)为0.585pmol/L,螺环哌啶酮对3H-5-HT与受体的结合无影响,计算Bmax为270.3fmol/mgprotein,Kd为0.327pmol/L,与前值比较,差异不显著(P>0.05)。

川芎嗪对VEGF受体与其放射性配体结合的抑制

目的探讨川芎嗪对VEGF受体与其放射性配体结合的影响。方法采用血清药理学方法,分别制备川芎嗪大剂量、小剂量、阳性对照组鱼精蛋白、生理盐水各组含药血清,采用反相高效液相色谱法测定川芎嗪含药血清中药物浓度。将各组血清作用于人脐静脉内皮细胞ECV304,采用放射配体受体结合分析法(RBA)观察川芎嗪对VEGF受体最大结合容量(Bmax)和解离常数(Kd值)的影响。结果川芎嗪大剂量组Kd=343.30±36.64pmol·L-1,Bmax=46.26±5.85fmol/2×105cells,与生理盐水组相比Kd增大(P<0.05),Bmax减小(P<0.05)。川芎嗪小剂量组与生理盐水组相比Kd有增大趋势、Bmax有减小趋势,但差异无显著性。阳性对照组Kd=179.07±25.65pmol·L-1,受体最大结合容量Bmax=38.65±9.83fmol/2×105cells,与生理盐水组相比Kd差异无显著性(P>0.05),Bmax减小(P<0.05)。结论在川芎嗪作用下VEGF受体与125IVEGF结合的亲和力下降,VEGF受体数目下降,川芎嗪抑制VEGF受体与125IVEGF结合。川芎嗪含药血清(143.0mg·kg-1组)抑制VEGF受体与125IVEGF结合。

脂多糖刺激下的人肺微血管内皮细胞血管紧张素Ⅱ受体1放射受体分析法的建立

目的建立一种脂多糖（LPS）刺激下人肺微血管内皮细胞（HPMEC）血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）1型受体（ATR1）与其配体AngⅡ结合的放射配体结合分析法（RLBA）。方法体外培养的HPMEC接种于24孔培养板,当细胞达到80%-90%融合,饥饿24 h后用浓度为100 ng/ml的LPS刺激8 h,用0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.62、.0 fmol 8个不同剂量的放射性配体125I-AngⅡ（TL表示其放射性）在板孔中与ATR1结合（存在或不存在5μg AngⅡ）,然后γ计数仪计数,测定ATR1的总结合（TB）与非特异性结合（NSB）,TL减去TB得游离放射配体（F）,TB减去NSB得ATR1的特异性结合（B）。由TB与TL作图得ATR1饱和曲线;由B/F与B作图得出Scatchart曲线。结果随放射性配体125I-AngⅡ加入量的增加,NSB也相应逐渐增加,且由直线相关与回归分析得到NSB与加入125I-AngⅡ剂量呈直线关系（r2=0.9929）;Scatchart作图得B/F与B也呈直线关系,其相关系数r2=0.9514。HPMEC上仅存在单一亲和力的AngⅡ受体,反应亲和力的Kd值为109 pmol/5×10^5细胞,从Scatchart曲线与X轴截距得到ATR1的最大结合位点Bmax为29 pmol/5×10^5细胞;ATR1饱和曲线分为两段,前段斜率较大,随125I-AngⅡ加入量的增加TB增加明显;后端曲线较为平坦,TB随125I-AngⅡ的增加变化不明显,125I-AngⅡ在1600 pmol/5×10^5细胞与2000 pmol/5×10^5细胞之间TB的增加与NBS增加基本相当,能使ATR1饱和的125I-AngⅡ剂量为1600 pmol/5×10^5细胞。结论本实验建立的RLBA方法能得到ATR1的Kd与Bmax两个基本参数,可用于LPS刺激下HPMEC的ATR1功能研究。

生长激素促进体外培养的Bel-7402肝癌细胞增殖

【目的】了解重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7402肝癌细胞增殖的影响。【方法】应用放射性配体法了解GHR在Bel-7402肝癌细胞株的表达情况;采用肿瘤细胞计数、噻唑蓝比色法和集落形成实验了解Bel-7402肝癌细胞株在不同浓度rhGH(0、1、10、100、1000、10000ng/mL)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率,集落形成率;并用3H-TdR渗入法了解肿瘤细胞DNA代谢情况。【结果】放射配体法发现Bel-7402肝癌细胞表达GHR,rhGH对体外培养的7402肝癌细胞的生长具有一定程度的刺激作用,表现为rhGH在100ng/mL的浓度时促进肝癌细胞的增殖较为显著,而rhGH在其它浓度时(1、10、1000、10000ng/mL)的部分时段,对肝癌细胞的增殖虽也能表现出一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH在100ng/mL浓度时为弱。【结论】一定浓度范围的rhGH对7402肝癌细胞的增殖有促进作用,原因可能与7402肝癌细胞表达GHR有关。

原发性肝癌癌旁组织生长激素受体的基因研究

目的探讨原发性肝癌癌旁组织生长激素受体(GHR)的基因表达情况或变化。方法采用放射配体法、半定量的逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)对45例原发性肝癌(HCC)的癌旁组织进行了生长激素受体(GHR)的检测,以8例正常肝组织作为对照,并随机选择12例RT-PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定。结果在蛋白表达水平,应用放射性配体法于正常肝组织与45例HCC癌旁组织中检测到单一的GH特异性结合位点(即GHR)。对照组肝组织GHR的RT值为40.2932±3。5667.fmol/mg;protein,Kd为0.6167±0.1007nmol/L。HCC癌旁组织GHR的RT为33.6283±3.6218fmol/mg。protein,Kd值为0.6319±0.1978nmol/L,与正常肝组织相比,HCC癌旁GHR的RT降低(P<0.05),而Kd无显著性改变(P>0.05)。半定量的RT-PCR法发现GHRmRNA在正常肝组织与HCC癌旁组织的表达率均为100%。GHR mRNA在正常肝组织与原发性肝癌癌旁组织的表达两者之间差异无显著性(P>0.05)。结论全部肝癌癌旁组织在蛋白与mRNA水平均表达GHR,在其受体功能未明的情况下,目前rhGH在肝癌患者中的使用应慎重,以免造成肿瘤的增殖与复发。

重组人生长激素对体外培养的QGY-7701肝癌细胞生长的影响

目的了解重组人生长激素(rhGH)对体外培养的QGY-7701肝癌细胞生长的影响。方法采用肿瘤细胞计数、噻唑蓝比色法了解7701肝癌细胞株在不同浓度rhGH(0、1、10、100、1000、10000ng/ml)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率;用流式细胞计了解肝癌细胞在上述浓度rhGH作用下细胞周期各时相细胞比率、细胞增殖指数(PI)以及凋亡率的变化;采用放射配体法了解两种肝癌细胞生长激素受体(GHR)的表达情况。结果rhGH对QGY-7701肝癌细胞的生长无促进作用,各实验组在肿瘤细胞计数、MTT比色法、肝癌细胞DNA含量,细胞增殖指数的变化以及凋亡率等指标方面,与对照组同期比较,差异均无显著性;放射配体法未发现7701肝癌细胞表达GHR。结论rhGH对QGY-7701肝癌细胞的增殖无促进作用,原因可能与QGY-7701肝癌细胞不表达GHR有关。

激素难治性前列腺癌组织中雄激素受体蛋白表达的研究

背景与目的:近来有研究报道,在激素难治性前列腺癌(hormonerefractoryprostatecarcinoma,HRPC)中发现有雄激素受体(androgenreceptor,AR)基因扩增,并提出AR基因扩增可能是导致激素治疗失败的一个新的分子机制。本研究拟对前列腺癌在激素治疗前和治疗失败后的AR蛋白表达作定量测定,进一步探讨AR表达与HRPC发生的关系。方法:采用放射配体结合分析方法测定28例晚期前列腺癌患者在激素治疗前以及治疗失败后原发癌组织中的AR蛋白含量。结果:28例前列腺癌在治疗前、后癌组织中的AR蛋白平均水平分别为(390.0±204.1)和(690.4±444.0)fmol/mgProtein,两者间差异有显著性(P<0.001)。其中10例在治疗后12个月内复发,其AR蛋白平均水平在治疗前、后分别为(398.2±199.5)和(448.2±274.1)fmol/mgProtein两者间差异无显著性(P>0.20),其余18例的AR蛋白平均水平在治疗前、后分别为(386.4±212.3)和(824.9±468.6)fmol/mgProtein,两者间差异有显著性(P<0.001)。结论:AR蛋白水平升高可能是前列腺癌对激素治疗不敏感的原因之一。

糖皮质激素受体水平在白血病、肾病治疗中临床意义的探讨

目的:探讨糖皮质激素受体(GCR)水平高低对急性淋巴性白血病(ALL)、肾病综合征(NS)疗效的影响。方法:采用受体放射配体结合技术测定ALL、NS和对照组外周血淋巴细胞糖皮质激素高亲和力受体GCRH和低亲和力受体GCRL位点数,分析GCR与疗效之间的关系;并通过动物实验观察中药小柴胡汤对应用糖皮质激素所产生的GCR“降调节”效应的影响。结果:疗前GCRH>4000位点/细胞的ALL患者对激素联合化疗疗效好,化疗后GCRH明显降调,但GCRL治疗前后无明显变化。NS患者疗前GCRH>6000位点/细胞,则对GC疗效好,当GCRH<3000位点/细胞,则GC治疗无效。SD大白鼠实验表明,小柴胡汤具有显著的调控GCR水平作用。结论:对ALL患者和NS患者治疗前检测GCR水平,有助于制定个体化的治疗措施。

动脉中的雌激素受体与一氧化氮合酶活性的关系

目的 :探讨动脉壁中雌激素受体在雌激素调控一氧化氮合酶 (NOS)活性中的作用。方法 :用放射配体结合分析技术检测大鼠主动脉中雌激素受体的含量。离体主动脉条药物孵育法观察雌激素和受体拮抗剂tamoxifen对NOS活性的影响。结果 :1 雌性大鼠主动脉中存在雌激素受体。 2 1nmol17β 雌二醇作用 8h能使大鼠主动脉NOS的活性显著增强 (P <0 0 1)。 3 雌激素受体拮抗剂tamoxifen能显著抑制雌激素的上述作用 (P <0 0 1)。结论 :17β 雌二醇对血管NOS活性的影响由动脉壁中雌激素受体介导 ,该作用可能是雌激素降低血管阻力、抑制动脉粥样硬化作用的重要机理之一。

普鲁泊福对GABA_A受体结合功能的影响

目的 :观察普鲁泊福对离体小鼠脑细胞膜GABAA 受体结合功能的影响。 方法 :采用放射配体受体结合分析法 ,测定普鲁泊福对小鼠脑细胞膜3 H GABA特异性结合以及GABAA 受体饱和曲线的影响。 结果 :特异性结合试验显示 ,与对照组相比 ,1 0～ 30 0 μmol/L浓度组的普鲁泊福明显增强3 H GABA与脑细胞膜GABAA 受体的特异性结合 ,并呈浓度依赖性 (P <0 .0 5 ) ,而浓度低于 1 0 μmol/L的普鲁泊福无明显增强作用 (P >0 .0 5 )。GABAA 受体饱和试验显示 ,普鲁泊福组 (1 0 μmol/L)的饱和曲线解离常数Kd2 值明显低于对照组 (P <0 .0 1 ) ,但 2组的Kd1 、Bmax1 及Bmax2 值相比无统计学差异 (P >0 .0 5 )。 结论 :临床相关浓度的普鲁泊福可显著增强内源性GABA与GABAA 受体的结合功能 ,其主要机制是通过提高GABA低亲和力结合位点的亲和性而起作用的。

利用国产^(125)碘源制备^(125)I-心得静及实验考核

用国产Na^(125)I源、氯胺-T法、制备(-)^(125)I心得静标记配体【(-)^(125)I-IPIN】,放射色谱法分离复合物,测得(-)_(125)I-IPIN的Rf值为0.35,比活度为46.12～55.32TBq/mmol,标记率为37％,放射化学纯度达95％以上,该标记配体与小鼠脑细胞膜β受体的结合用受体的放射配体结合分析法(RBA)考核,呈典型的饱和曲线,Scatchard分析呈一直线,平衡解离常数(Kd)为0.041±0.001nM,Hill系数接近于1(0.99)。

大肠癌雄激素受体表达的临床病理研究

目的 探讨大肠癌组织、癌周粘膜组织及外周血白细胞雄激素受体(AB)的含量与大肠癌发生发展的关系。方法 应用放射配体结合分析法(RBA)测定38例行手术切除的大肠癌组织、癌周粘膜组织及外周血白细胞雄激素受体的含量;同时用放射免疫法(RIA)测定大肠癌患者及正常人血浆雄激素(睾酮T)的水平,结合临床病理资料进行统计分析。结果 癌组织与癌周粘膜组织相比,AR含量明显升高,结肠癌组织蛋白AR:56±10pmol/g^(-1);直肠癌组织AR蛋白:57±12pmol/g^(-1);结肠癌和直肠癌周粘膜组织AR蛋白分别为34±10pmol/g^(-1)和27±12pmol/g^(-1))(P<0.01);高分化的癌组织蛋白AR含量(63±8pmol/g^(-1))明显高于低分化者(38±4pmol/g^(-1)(P<0.01);大肠癌患者血浆睾酮水平轻度增加;但白细胞AR表达:男(1186±127)位点·细胞^(-1);女(894±109)位点·细胞^(-1)明显高于正常对照组男(785±112)位点·细胞^(-1);女(697±105)位点·细胞^(-1)(P<0.01)。结论 大肠癌的发生可能与癌组织AR含量升高有关,AR含量与肿瘤的分化程度存在相关性。

不同性别大鼠心脏雌激素受体比较

目的比较雄性和雌性大鼠心脏中雌激素受体的表达情况并探讨其意义.方法用放射配体结合分析法检测雌性和雄性大鼠(各10只)心脏中雌激素受体的含量。结果雌性大鼠心脏雌激素受体为2.21±13(fmol·mg^(-1)·pro^(-1)),雄性大鼠心脏雌激素受体为2.03±0.11(fmol·mg^(-1)·pro^(-1)),两者比较无显著差异(P>0.05)。结论大鼠雄性与雌性之间心脏中雌激素受体含量无显著差异,两性冠心病发病率存在差异的原因可能与两性存在不同的雄性激素受体后信号转导途径有关。

大肠癌雄激素受体表达与临床病理相关性研究

目的 探讨大肠癌、癌周粘膜组织及外周血白细胞雄激素受体(AR)的含量与大肠癌发生发展的关系。方法 应用放射配体结合分析法(RBA)测定38例行手术切除的大肠癌、癌周粘膜组织及外周血白细胞雄激素受体的含量；同时用放射免疫法(RIA)测定大肠癌患者及正常人血浆雄激素(睾酮T)的水平，结合临床病理资料进行统计分析。结果 癌组织与癌周粘膜组织相比：①AR含量明显升高(P<O．01)；②高分化癌组织蛋白AR含量明显高于低分化者(P<O．01)；③大肠癌患者血浆睾酮水平轻度增加，但白细胞AR表达明显高于正常对照组(P<O．01)。结论 大肠癌的发生可能与癌组织AR含量升高有关，AR含量与肿瘤的分化程度存在相关性。

肝细胞性肝癌生长激素受体的基因分析

目的对肝细胞性肝癌生长激素受体（GHR）的表达进行基因分析。方法分别采用放射配体法、半定量的逆转录-多聚酶链式反应（RT—PCR）对40例肝细胞性肝癌（HCC）组织进行GHR的检测，以8例正常肝组织作为对照，并随机选择15例RT—PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定。结果在蛋白表达水平，应用放射性配体法于正常肝组织与34例HCC组织中检测到GHR，对照组肝组织GHR的RT值为（40．2932±3．5667）fmol／mg·蛋白，Kd为（0．6167±0．1007）nmol／L；HCC组织GHR的RT为（19．8870±3．7549）fmol／mg·蛋白，Kd值为（0．6247±0．2011）nmol／L，与正常肝组织比较，HCC组织GHR的RT降低（P〈0．05），而Kd无显著性改变（P〉0．05），有6例肝癌组织在蛋白水平未检测到GHR；半定量的RT—PCR法发现GHRmRNA在正常肝组织的表达率为100％，在HCC组织的表达率为90％（36／40），GHRmRNA在正常肝组织与HCC组织的表达量两者之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论大部分肝细胞性肝癌组织在蛋白与mRNA水平均表达GHR，肝癌与正常肝组织GHR在蛋白表达水平上差异的原因可能并非由于两者在mRNA水平表达量的不同所造成。在肝癌受体功能未明的情况下，目前rhGH在肝癌患者中的使用应慎重，以免促进肿瘤的增殖与复发。

重组人生长激素对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞生长的影响

目的探讨重组人生长激素（rhGH）对体外培养的Bel-7721肝癌细胞生长的影响及机制。方法采用放射配体法检测SMMC-7721肝癌细胞生长激素受体（GHR）的表达。采用噻唑蓝（MTR）比色法检测Bel-7721肝癌细胞株在不同浓度rhGH（0、1．33、13．33、133．30、1333．00μg／L）作用下的药物敏感性，计算细胞生长率；用流式细胞仪检测肝癌细胞在上述浓度rhGH作用下细胞周期各时相细。胞比率、增殖指数（PI）以及凋亡率。结果rhGH对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞的生长具有一定程度刺激作用，表现为rhGH在133．30μg／L浓度促进肝癌细胞增殖较显著，而rhGH在其他浓度（1．33、13．33、1333．00μg／L）对肝癌细胞增殖虽也表现出一定程度的促进作用，但总体效果较rhGH在133．30μg／L浓度为弱。rhGH作用48h后流式细胞检测各实验组S期所占比率、PI均较对照组升高（P〈0．05）；G2-M细胞所占比率，13．33、133．30与1333．00μg／L组较对照组显著增高（P〈0．05），1．33μg／L与对照组比较差异无统计学意义；各实验组凋亡率与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。放射配体法发现SMMC-7721肝癌细胞株表达GHR。结论一定浓度范围的rhGH对7721肝癌细胞生长有促进作用，原因可能与7721肝癌细胞表达GHR，rhGH可促进肝癌细胞DNA合成，提高细胞分裂增殖能力有关。

原发性肝癌及其癌旁组织、Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体的定量研究

目的定量测定原发性肝癌(HCC)及其癌旁组织、国内常用Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达水平,探讨重组人生长激素(rhGH)在原发性肝癌患者中的适用性。方法采用放射配体分析法对45例原发性肝癌组织及其癌旁组织、8例正常肝组织、Bel-7402人肝癌细胞株进行GHR的检测,肝组织及肝癌细胞的GHR受体最大结合量(RT)采用Scatchard法计算;并分析肝癌组织GHR的表达量与肝癌患者各临床病理参数的关系。结果在38例HCC组织与45例癌旁组织,以及7402肝癌细胞株均检测到GHR的存在,GHR受体结合容量(RT)在有GHR表达的肝癌组织为(19.673 00±3.876 6)fmol/mg蛋白,癌旁组织GHR的RT值为(33.628 3±3.621 8)fmol/mg蛋白,GHR在7402肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891;同正常肝组织相比,肝癌与癌旁组织GHR的表达量均降低(P<0.05),肝癌组织GHR的表达量又低于癌旁组织;肝癌组织GHR的表达量与肿瘤大小、患者临床分期的延迟呈负相关,而与肿瘤分化程度、患者年龄、是否合并肝硬化无关;有7例肝癌组织未检测到GHR存在。结论大多数原发性肝癌组织及全部癌旁组织均表达一定水平的GHR,在它们受体功能未明的情况下,rhGH在肝癌患者中的应用可能需慎重。

重组人生长激素对体外培养的Bel-7402肝癌细胞生长激素受体的调控作用

目的 了解重组人生长激素（rhGH）对体外培养的Bel-7402肝癌细胞生长激素受体（GHR）的调控作用。方法采用放射配体法了解7402肝癌细胞生长激素受体（GHR）的表达情况，检测不同浓度（0，1，10，100，1000，10000ng／m1）rhGH对肝癌细胞GHR表达的影响，用辣根过氧化酶法了解7402肝癌细胞培养上清液的胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF—Ⅰ）的变化，采用肿瘤细胞计数、噻唑蓝比色法了解肝癌细胞在不同浓度rhGH作用下药物敏感性，计算细胞生长率；用流式细胞计了解肝癌细胞在上述浓度rhGH作用下细胞周期各时相细胞比率、细胞增殖指数（PI）以及凋亡率变化。结果放射配体法发现7402肝癌细胞表达GHR，在rhGH作用后24h，7402肝癌细胞GHR的位点数量在10与100ng／ml实验组较对照组增加（P〈0．05），在10000ng／ml组较对照组降低（P〈0．05）；rhGH作用后的24h与48h，7402肝癌细胞上清液IGF—Ⅰ浓度在100ng／ml组较对照组显著增高（P〈0．05）；与此同时，rhGH对体外培养的7402肝癌细胞增殖具有一定程度刺激作用，表现为rhGH在100ng／ml浓度时促进肝癌细胞增殖较显著，而rhGH在其它浓度（1，10，1000，10000ng／ml）对肝癌细胞的增殖虽能表现出一定程度促进作用，但总体效果较rhGH在100ng／ml浓度为弱。rhGH作用48h流式细胞检测发现各实验组S期所占比率、PI均较对照组升高（P〈0．05）；G2-M细胞所占比率，10ng／ml组与100ng／ml组较对照组显著增高（P〈O．05）；各实验组凋亡率与对照组比较无显著差异。结论rhGH可促进7402肝癌细胞DNA的合成，提高肿瘤细胞分裂增殖能力，原因可能与7402肝癌细胞表达GHR，rhGH可在一定浓度范围内上调7402肝癌细胞GHR的表达，促进肿瘤细胞合成IGF—Ⅰ有关，其确切途径仍有待进一步验证。

糖皮质激素受体基因多态性与激素敏感性及结缔组织病的相关性

糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）是细胞内能与糖皮质激素（glucocorticoid，GC）特异结合并产生生物学效应的位点。GR在体内分布广泛，具有重要的生理作用，其功能如同一个转录激活因子。自1968年Munk和Shauburg等应用放射配体结合分析法首次证实大鼠胸腺细胞中存在GR以来，大量研究证实绝大多数动物或人体细胞内均存在GR，GC和GR结合后，在细胞内调节基因表达，进而产生一系列生物效应。GR基因突变在1991年首次被报道，至今在人类已有许多GR基因的突变被描述。现在已发现人GR（hGR）基因结构的多态性与糖皮质激素敏感性相关，同时与自身免疫病、心血管及脂质代谢相关。