骨骼肌型ryanodine受体放射配基分析法的建立

目的 探讨骨骼肌型ryanodine受体 (RyR1)放射配基分析法的建立及适宜条件。方法蔗糖梯度离心提取骨骼肌肌浆网膜蛋白质组分 ,用3H ryanodine进行放射配基结合实验 ,观察RyR1与3H ryanodine结合的适宜条件。结果 ① 37℃恒温水浴下 ,0～ 6 0min内 ,3H ryanodine与骨骼肌肌浆网膜蛋白质的结合量迅速增加 ,90min时基本达平衡 ,90～ 12 0min内无明显变化 ;②3H ryanodine在1～ 30nmol·L- 1 ,匀浆蛋白质质量浓度为 0 .4～ 1.0g·L- 1 范围内 ,3H ryanodine与RyR1结合的效果最佳。结论 用3H ryanodine在适宜的条件下可建立RyR1放射配基分析法。

某些因素对放射配基结合分析法的影响

目的探讨放射配基结合分析的膜受体蛋白浓度、酸碱度、温度、血清等因素对实验的影响，以减少应用中的误差。方法固定标记配基［３Ｈ］ＱＮＢ浓度，分别改变各种因素进行结合实验和数据分析。结果膜受体蛋白浓度，不同反应体系酸碱度、温度和血清等对受体结合实验有影响，特异性结合量变化差异有显著性。结论应用放射配基结合分析法必须选择简单、经济和易于掌握的实验条件，减少实验误差，使神经递质及药物含量测定准确，达到临床实际要求。

前列腺组织雄激素受体的测定方法

建立雄激素受体测定的放射配基结合分析法测得人前列腺组织中胞浆胞核雄激素受体均可被约5x10^(-9)mol/L的双氢睾酮饱和,其最大结合客量(B(-max))及平衡解离常数(Kd)分别为:胞浆129.4x10(-15)mol/mg,0.88x10(-9)mol/L;胞核176.2x10^(-15)mol/mg,3.2x10^(-9)mol/L。人前列腺癌胞浆、胞核雄激素受体均高于正常前列腺(n=3)及前列腺肥大者(n=32)。用融裱法放射自显影证实雄激素受体主要分布在前列腺组织的腺区,尤其是在腺上皮细胞核内。

关于慢性心力衰竭患者外周血淋巴细胞β肾上腺素能受体密度的研究──附92例分析

目的观察慢性心力衰竭(chronicheartfailure,CHF)患者外周血淋巴细胞β肾上腺素能受体(βadrenergicreceptor,βAR)密度的变化及卡维地洛对其的干预效果。方法92例心功能Ⅱ～Ⅳ级CHF患者随机分成卡维地洛组47例、美托洛尔组45例,分别于治疗前、治疗12周后行UCG测定左心室舒张末期内径(leftventricularenddiastolicdimension,LVEDd)、左心室收缩末期内径(leftventricularendsystolicdimension,LVEDs)、左心室射血分数(leftventricularejectionfraction,LVEF)、左心室内径缩短率(fractionalshortening,FS)、右心室内径(rightventriculardimension,RVD)及左心房内径(leftatrialdimension,LAD)。用同位素氢[3H]双氢烯丙洛尔(3Hdihydroalprenolol,3HDHA)放射配基结合分析法测定外周血淋巴细胞βAR密度最大值(themaximumoflymphocyteβARdensity,βmax)。结果治疗后两组患者LVEDd、LVEDs、RVD及LAD均显著缩小(均为P<0.01),LVEF、FS显著增加(均为P<0.01),且卡维地洛对LVEDs、LVEF、RVD的改善作用更优于美托洛尔(均为P<0.01)。CHF患者的βmax水平随着心功能的加重而降低(P<0.01)。经治疗后,美托洛尔组和卡维地洛组的βmax均较治疗前升高(均为P<0.01),且前者升幅高于后者(P<0.01)。结论CHF患者外周血淋巴细胞βmax水平下降,并与其严重程度密切相关。卡维地洛的非选择性βAR阻断作用使其对βmax的增高作用不如美托洛尔显著。

石菖蒲提取成分对大鼠脑皮质NMDA、M受体与其配体结合的影响

目的观察石菖蒲水提取成分对大鼠脑皮质NMDA、M受体与其配体结合的影响。方法提取脑皮质受体后,加入相应的石菖蒲提取成分,运用放射配基结合分析法检测NMDA、M受体与其相应配体的的结合。结果石菖蒲挥发油、去油水煎液、β-细辛醚均能拮抗NMDA受体与3H-MK 801的结合,但对M受体与3H-QNB的结合无影响。结论石菖蒲水提成分能拮抗大鼠脑皮质NMDA受体与其配体的结合,该作用可能是其醒脑开窍、治疗脑损伤的重要药理机制之一。

人肝细胞生成素受体的确定及特性

目的 研究人重组肝细胞生成素 (rhHPO)特异性刺激肝细胞增殖的信号转导是否通过特异性受体结合介导。方法 通过受体结合和特异性竞争抑制实验及Scatchard分析原代培养大鼠肝细胞、人胎肝细胞和肝癌细胞的特性。结果 原代培养大鼠肝细胞、人胎肝细胞和肝癌细胞存在HPO受体 ,受体数量分别为 10 0 0 0个 /细胞、2 0 0 0 0个 /细胞和 5 5 0 0 0个 /细胞 ,平衡解离常数(Kd)分别为 2、1.4及 0 .7pmol,HPO与受体结合的复合物分子量约为 90× 10 3 ,推算出HPO与该受体结合具有饱合性和特异性 ,此结合不能被EGF、TGF α和胰岛素所竞争抑制。通过交联反应在SDS PAGE电泳上显示此受体分子量约 75× 10 3 。结论 HPO促肝细胞增殖作用是通过肝细胞表面这种特异性膜受体介导的。

甲状腺激素对小鼠脑β-肾上腺素能受体的影响

甲状腺激素可通过调节外周组织β受体的数量,从而影响交感神经的活动。为证实甲状腺激素对中枢神经系统的影响是否也与β受体的变化有关,我们用注射T_3的方法使小鼠体内甲状腺激素增高(甲高),用放射配基结合分析法测定甲高小鼠脑β受体最大结合容量(B_(max))和亲和力(KD)的变化,并以滋阴药进行实验性治疗。结果表明:甲高小鼠脑组织β受体B_(max)较对照组显著增加(P<0.001),KD无明显变化。滋阴药生地可使甲高时升高的β受体结合位点数下降(P<0.001)。

帕金森病大鼠模型尾壳核多巴胺D2受体活性变化研究

目的 探讨帕金森病病程中多巴胺D2受体的活性变化及其规律。方法 在建立6-羟基多巴胺毁损的帕金森病大鼠模型基础上,应用放射配基结合分析法结合Scanchard作图,测定不同时间点模型大鼠及对照大鼠尾壳核多巴胺D2受体的最大结合容量（Bmax）和平衡解离常数（KD）。结果 大鼠模型毁损侧尾壳核多巴胺D2受体Bmax显著升高,而KD值显著降低,在1个月时达到高峰,受体的亲合力显著增高。结论 帕金森病大鼠模型毁损侧尾壳核存在D2受体上行调节,D2受体明显超敏。

胞核雄激素受体测定对评价前列腺癌、肝癌受体状态的意义

背景与目的:雄激素受体(androgenreceptor,AR)与前列腺癌(prostatecarcinoma,PC)、原发性肝癌(hepatocellularcacinoma,HCC)的发生、发展有关,对临床治疗方案选择及预后的评估等有一定影响,准确判断肿瘤组织的AR状态有重要的临床意义。本研究旨在通过对胞核雄激素受体(nuclearAR,AnR)进行分析,探讨AnR对评估前列腺癌、原发性肝癌雄激素受体状态的意义。方法:取94例PC和192例HCC患者的肿瘤组织及癌周组织,采用受体放射配基结合分析法(radioligandbindingassay,RBA)对组织中胞浆雄激素受体(cytosolAR,AcR)、胞核雄激素受体的亲和力(affinity,KD)、最大结合容量(maximumconcentrationofreceptor,Bmax)进行分析。结果:PC患者中肿瘤组织AcR、AnR的Bmax值(58.82±34.73)、(543.70±249.44)fmol/mgprotein明显高于癌周组织的(21.63±14.89)、(89.20±47.32)fmol/mgprotein(P<0.001);其KD值(0.84±0.52)、(2.15±0.79)nmol/L与癌周组织的(0.78±0.49)、(2.24±0.84)nmol/L之间的差异无统计学意义(P>0.50)。HCC患者中,肿瘤组织AcR、AnR的Bmax值(18.09±16.87)、(59.93±34.12)fmol/mgprotein亦明显高于癌周组织的(10.87±7.60)、(25.54±20.10)fmol/mgprotein(P<0.001);其KD值(0.76±0.57)、(1.89±0.74)

雄激素受体三螺旋形成寡核苷酸抗前列腺癌细胞增殖的研究

目的 探讨反基因策略对雄激素受体(AR)表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法 针对AR基因2 4 4 7～2 4 6 1核苷酸序列设计并合成三螺旋形成寡核苷酸(TFO) ,经脂质体介导转染LN CaP前列腺癌细胞株,于转染后2 4、4 8、72h分别采用3H 胸腺嘧啶核苷(TdR)参入实验测定癌细胞增殖活性,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测ARmRNA表达,用放射配基结合分析法(RBA)单点法检测AR蛋白质表达,并与反义寡核苷酸(ASON)相比较。结果 2 4、4 8、72hTFO组LNCaP细胞的AR表达水平明显低于ASON组(P <0 0 5 ) ,TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于ASON(P <0 0 5 )。结论 该TFO能有效抑制AR表达和前列腺癌细胞增殖。

小鼠肝细胞膜载脂蛋白CⅢ受体特性的进一步研究

目的 研究小鼠肝细胞膜载脂蛋白 (apo) C 受体与 apo C 、C 、C 及 E的结合特性。方法 用受体的放射性配基结合分析法 (RBA )观察血浆脂蛋白 (VL DL、L DL及 HDL )以及纯化的 apo C 、C 、C 及 E与小鼠肝细胞膜 apo C 受体结合的活性。结果 apo C 受体与 1 2 5I- apo C 的结合能被非标记 apo C 、C 、C 、E及 VL DL抑制 ,其中 apo C 、C 、C 及 VL DL抑制曲线相似 ,以 apo C 的抑制作用最强 ,apo C 次之 ,apo C 最弱 ,apo E与 apo C 受体亦有一定结合 ;而含 apo B10 0的 L DL以及含 apo A 及 apo A 的 HDL和人血清白蛋白则对结合无影响。结论 小鼠肝细胞膜上存在 apo C 受体 ,除能特异结合 apo C 及 VL DL外 ,亦能在一定程度上与apo C 、C 及 E结合。

电针对过敏性哮喘豚鼠肺组织β受体的影响

采用放射配基(~3H-DHA)结合分析法,测定过敏性哮喘模型组、模型加电针治疗组及正常对照组豚鼠肺组织中β受体的最大结合容量(Bmax)和亲和力(Kd)。结果表明:(1)对照组、模型组 Bmax 比较,P【0.05;电针组 Bmax 与前两组比较,P】0.05;(2)对照组、模型组和电针组 Kd 值3组比较,P】0.05。本研究提示电针对过敏性哮喘豚鼠肺组织β受体的含量减少及亲和力增高趋势有一定的调整作用。

乳腺癌组织核基质雌激素受体测定

采用放射配基结合分析法显示人乳腺癌组织核基质中存在与H^3-雌二醇(~3H-E_2)特异结合的雌激素受体,其~3H-E_2饱和浓度为16～20nmoI/L;平衡解离常数为6.05nmol/L;结合反应的时间、温度及非标记配基的浓度对特异性结合均有较大影响,乳腺癌组织核基质中蛋白及DNA含量分别占全核的8.3％、5.68％,与正常乳腺组织无差异,而核基质雌激素受体(EmR)含量有明显改变。

帕金森病大鼠模型尾壳核多巴胺受体活性的变化

在建立 6 羟多巴胺损伤的帕金森病大鼠模型基础上 ,应用放射配基结合分析法及Scanchard作图 ,测定不同时间点模型鼠及对照鼠尾壳核多巴胺D1和D2 受体的受体最大结合容量 (Bmax)和平衡解离常数 (KD)。结果显示 ,模型鼠毁损侧尾壳核多巴胺D2 受体Bmax显著升高 ,KD值显著降低 ,在 1个月模型组达到高峰。D1受体除了 2周模型组Bmax轻度升高、KD值轻度降低外 ,与对照组比较无差异。表明帕金森病模型鼠毁损侧尾壳核存在D2 受体上行调节 ,受体亲合力增高 ,D1受体活性无明显变化。

大鼠窒息心脏骤停期间心脏和肺脏β肾上腺素能受体的变化

目的 :研究心脏停搏期间机体 β肾上腺素能受体的变化。 方法 :采用放射性配基结合分析方法 ,检测大鼠在窒息心脏停搏期间心、肺 β肾上腺素能受体 (β受体 )的变化。动物随机分为正常对照 (A)、手术对照 (B)、窒息 10min (C)、2 0min (D)和 30min (E) 5组。结果 :心、肺C组 β受体分别为 (34 5 1± 3 2 5 )fmol/mgpr和(2 89 4 6± 19 96 )fmol/mgpr。心、肺D、E组 β受体分别为 (4 0 96± 2 91)和 (6 4 4 4± 3 2 0 )fmol/mgpr及 (4 2 6 33± 12 0 8)和 (4 5 5 6 7± 2 8 77)fmol/mgpr,与C组比较 ,差异极其显著 (P <0 0 1)。心、肺各窒息组间受体亲和力无明显变化。结论 :在窒息心停早期 ,心、肺β受体数量无明显变化 ,随着心脏停搏时间延长 ,其数量明显增加。

用完整淋巴细胞及其膜碎片测定β受体的比较

用完整淋巴细胞及其膜碎片测定β受体的比较关晏星（南昌核医学教研室３３０００６）胡雅儿，强永刚，夏宗勤（上海第二医科大学实验核医学教研室上海２０００２５）用放射配基结合分析法测定淋巴细胞β受体。有人用完整细胞与配基结合反应，直接测定细胞放射性，但由于配...

白术茯苓汤及水煎液提取分离组分对脾气虚大鼠血管活性肠肽受体亲和力的影响

目的:观察白术茯苓汤及其水煎液提取分离组分对脾气虚大鼠血管活性肠肽(VIP)受体亲和力的影响。方法:以耗气破气加饥饱失常法复制脾气虚大鼠模型,采用放射性配基结合分析法检测各组VIP受体最大结合容量(RT)和受体亲和常数(Kd)。结果:各组RT无统计学差异;与空白组比较,模型组Kd值升高(P<0.01);与模型组比较,总多糖、络合物组Kd值呈下降趋势,白术内酯Ⅲ组Kd值呈升高趋势,但皆无统计学意义;白术茯苓汤组、组分配伍组Kd值显著降低(P<0.05)。结论:白术茯苓汤及组分配伍组能提高VIP受体亲和力;不同组分对Kd的效应具有一定差异性,配伍则显示可能具有协同增效作用。

颅脑外伤后神经细胞糖皮质激素受体表达变化与激素抵抗

目的通过研究颅脑外伤后早期伤侧皮层细胞糖皮质激素受体(GR)表达的变化,探讨伤后糖皮质激素抵抗的时相特点,为临床外源性糖皮质激素的合理应用提供实验依据。方法采用Westemblot印迹分析法及放射配基结合分析法,检测大鼠伤后72h内伤侧皮层神经细胞核蛋白中GR表达的数量及其最大结合容量的变化情况。结果大鼠外伤后0.5hGR的表达即开始降低,12h降到最低,显著低于对照组(P<0.01),后逐渐回升,48h恢复至对照组水平,此后仍逐渐上升而高于对照组;伤后12hGR的最大结合容量开始下降,24h降至最低,此后逐渐回升,72h恢复至对照组水平。结论颅脑外伤后GR的数量及功能状态均明显下调,从而产生糖皮质激素效应抵抗现象。

胃癌及邻近黏膜表达胃泌素受体的差异及其意义

目的揭示胃泌素受体（即ｇａｓｔｒｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＲ）在胃癌自分泌生长中的作用。方法应用受体的放射配基结合分析法，测定３４例胃癌及其邻近黏膜的ＧＲ含量和亲和力（Ｋｄ），比较胃癌及其邻近黏膜表达ＧＲ的差异。结果３４例胃癌组织中，ＧＲ阳性者１６例。胃体癌表达高亲和力ＧＲ的阳性率为７７．８％（７／９），胃底贲门癌为５０．０％（３／６），而胃窦癌为２１．１％（４／１９）。晚期胃癌（Ⅲ、Ⅳ期）表达高亲和力ＧＲ的阳性率为５２.２％（１３／２４），早、中期胃癌（Ⅰ、Ⅱ期）为１０．０％（１／１０）。３４例黏膜组织中，ＧＲ阳性者１６例。有３０例胃癌及其邻近黏膜组织表达ＧＲ基本一致。胃癌表达高含量ＧＲ的平均含量较邻近黏膜高。结论 胃癌较周围黏膜易于表达高含量ＧＲ，其表达与肿瘤的部位和分期相关。