小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体放射配基受体结合分析方法

目的 建立简便、快速的小鼠腹腔巨噬细胞PAF放射配基受体结合分析法 ,考察巨噬细胞表面PAF受体的特性。方法 以♂C5 7BL/ 6小鼠腹腔巨噬细胞为受体材料 ,[3 H] PAF为标记配基 ,非膜过滤法进行结合放射配基分离 ,液闪计数测定。结果 小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体结合符合简单单位点受体结合模型 ,Scatchard分析求出的PAF受体结合参数Bmax=10 0 2fmol·1× 10 6cells-1,KD=3 2nmol·L-1。 [3 H] PAF与小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体的结合呈现单一、饱和特点 ,并可被特异性PAF受体拮抗剂BN5 2 0 2 1竞争性抑制。结论 利用小鼠腹腔巨噬细胞贴壁特性 ,采用非滤过法处理细胞 ,能够在保持受体生理学活性的状态下 。

组织片放射配基受体结合微量分析法

现代技术的发展与应用,使受体研究成为现代生物医学科学中最活跃的领域之一。其中,放射配基受体结合分析法(RBA)又是当前受体研究的主要手段,为了简化检测流程、保持样品内受体活性和提高灵敏度,利用完整细胞进行受体的研究,我们在改制“简易恒冷切片箱”和采用国产^(125)碘标记配基的基础上,研究建立了组织切片放射配基受体结合微量分析法,为受体研究提供一项适合临床应用的微量分析技术。

大鼠胃壁细胞胃泌素受体的放射配基结合法

目的 建立大鼠胃壁细胞胃泌素受体放射配基结合实验方法。方法 以12 5I [Leu15] gastrin17 I为标记配基 ,以大鼠胃壁细胞悬液为受体制备 ,反应体系总体积为 2 0 0 μl,37℃恒温水浴振荡孵育 30min ,以 49型玻璃纤维滤膜分离结合和游离配基。结果 胃泌素受体结合符合简单单位点结合模型 ,Scatchard作图求出胃泌素受体结合参数Bmax=4 46 0 4× 10 -12 mol·L-1,Kd=1 2 49× 10 -10 mol·L-1。单点法求出特异结合位点数 70 3 2sites·cell-1。细胞浓度在0 2 5× 10 9～ 2× 10 9cells·L-1范围内 ,与标记配基特异性结合容量成正比。同一样品特异结合测定方法变异系数为7 0 4%。竞争抑制实验证明12 5I Gastin与大鼠胃壁细胞结合特异性良好。

左旋咪唑与咪唑啉2受体的放射性受体配基实验观察

目的:观察左旋咪唑(LMS)在体外实验中能否与正常大鼠脑组织咪唑啉2受体(I_2R)结合;LMS在体内长期处理能否引起大鼠脑内I_2R的变化。方法:通过正常大鼠脑组织I_2R与放射性配基的竞争结合实验,测定其平衡解离常数(K_i)及50%的放射性配基结合被取代所需的竞争剂浓度(IC_(50)),观察LMS与I_2R在体外的结合能力。通过LMS长期体内处理大鼠脑组织I_2R饱和结合实验,测定LMS长期处理大鼠和对照组大鼠脑组织I_2R密度和亲和力的变化。结果:体外实验发现,LMS能与[~3H]-2BFI竞争结合大鼠脑组织的I_2R,且具有浓度依赖性。IC_(50)值为1.292×10^(-5)mol·L^(-1),K_i值为9.796×10^(-6)mol·L^(-1)。大鼠体内长期LMS处理,其脑组织I_2R密度明显上调(P<0.05),而亲和力两组相比差异无统计学意义。结论:左旋咪唑在体外能与脑组织I_2R直接结合,可能是I_2R的配基。左旋咪唑长期作用于体内能引起脑组织I_2R密度的上调。

小鼠脑内注射Aβ_(25-35)记忆和M受体变化及梓醇的调节作用

目的建立小鼠脑内定位注射淀粉样肽Aβ25-35和鹅蕈膏酸(IBO)造成的拟痴呆模型,并观察梓醇对于拟痴呆模型动物的短期记忆功能和脑M受体密度的不同影响。方法小鼠单侧脑基底核部位一次性定位注射淀粉样肽Aβ25-35和IBO造成拟痴呆模型后,设立梓醇用药组、模型组和对照组,冠状切片考察注射轨迹,Y-迷宫测定学习能力及放射配基结合分析法测定注射同侧脑内M胆碱受体密度,并用直线回归法检测两者的相关性。结果模型小鼠注射部位与图谱脑基底核部位一致,学习成绩和脑M受体密度明显低于对照组。连续2个月每天喂服梓醇50 mg/kg的小鼠学习和记忆能力显著好于模型组,脑M受体密度也显著提高,而且脑M受体密度与动物的学习记忆能力呈显著正相关。结论小鼠单侧脑基底核部位一次性定位注射淀粉样肽Aβ25-35和IBO可造成稳定的拟痴呆模型,梓醇能明显改善拟痴呆小鼠的短期记忆能力,同时能显著提高脑内M受体密度,两者的变化呈显著正相关。

知母皂甙元对大鼠脑内总M及M_1受体的影响

目的观察知母皂甙元对青年和老年大鼠脑M及M1受体的不同影响。 方法以对M1受体有相对选择性的哌仑西平为非标记竞争剂 ,3H -QNB为非选择性标记配基 ,建立M和M1受体的放射配基竞争结合分析方法 ,观察知母皂甙元对青年大鼠和老年大鼠脑M和M1受体的影响。 结果与青年大鼠相比 ,老年大鼠脑M及M1受体减少 ,知母皂甙元能上调M和M1受体 ;对正常青年大鼠脑M及M1受体的密度 ,知母皂甙元没有影响。结论知母皂甙元对下降的M及M1受体密度有明显的上调作用 ,但不超过正常值 ,对正常水平的M及M1受体密度 。

补中益气汤药物血清对脾虚大鼠离体胃壁细胞胃泌素受体结合容量的影响

目的观察补中益气汤等药物血清对离体脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合容量的影响。方法放射配基受体结合测定方法。结果脾虚大鼠胃泌素受体结合容量减少,经补中益气汤含药血清作用后结合位点数上升。结论补中益气汤药物血清对脾虚大鼠的结合位点数下降具有上调作用。

红花黄色素及羟基红花黄色素A对Pindolol-β受体结合力的影响

目的:观察红花黄色素(SY)和羟基红花黄色素A(HSYA)对β受体结合力的影响。方法:以放射配基受体结合实验观察SY及HSYA拮抗125Ⅰ-s-(-)-Pindolol与大鼠心室肌细胞膜β受体特异性结合的作用。结果:SY及HSYA抑制125Ⅰ-s-(-)-Pindolol与大鼠心室肌细胞膜β受体的特异性结合具量效关系,SY的IC50为(17.5±1.3)g/L,KiSY值为12.9g/L;HSYA的IC50为(35.6±1.4)mmol/L,KiHSYA值为26.4mmol/L。结论:SY及HSYA对Pindolol-β受体结合力有一定的影响。

大鼠心房、心室M受体密度的增龄性变化

目的观察成年大鼠心房肌和心室肌M受体密度的增龄性变化.方法运用放射性配基受体结合法测定不同月龄(2～30个月)大鼠心房肌和心室肌M受体与其强阻断剂氚标记二苯羟乙酸奎宁酯(3H-QNB)的最大结合力(Bmax,可转化成密度值RT)及解离常数(Kd)值.结果①随着年龄的增长,SD大鼠心房肌M受体密度逐渐减少:从(259±9)pmol/g 蛋白下降至(174±13)pmol/g蛋白,且24个月以后的老龄鼠心房肌M受体密度减少更快.② M受体在各年龄段大鼠心室肌分布密度基本相当.③Kd值在各个年龄段大鼠心房和心室无明显差异.结论 M受体在大鼠心房的分布密度随着年龄的增长而减少,而在心室的分布密度与年龄的增长没有显著相关性,亲和活性在各个年龄段大鼠心房和心室差异不明显.

心房和心室M受体密度的种属差异性比较

目的:比较大鼠、豚鼠和家兔心房肌和心室肌M受体分布密度及与其强阻断剂氚标记二苯羟乙酸奎宁酯(3HQNB)亲和活性的种属差异性。方法:运用放射性配基受体结合法测定不同动物心房肌和心室肌M受体密度及解离常数(Kd)值。结果:①大鼠心房M受体的分布密度约为心室的3.0倍,家兔心房是心室的4.0倍,而豚鼠心房是心室的1.7倍。②M受体在不同种动物心房肌密度排序:家兔>大鼠>豚鼠。心室肌密度排序:豚鼠>大鼠>家兔。Kd值在心房、心室及种间均无统计学差异。结论:①M受体在大鼠、豚鼠和家兔心脏的分布密度不仅具有房室间差异性,而且还有种间差异性。②M受体与其阻断剂3HQNB亲和活性的种间差异性不明显。

胞核雄激素受体测定对评价前列腺癌、肝癌受体状态的意义

背景与目的:雄激素受体(androgenreceptor,AR)与前列腺癌(prostatecarcinoma,PC)、原发性肝癌(hepatocellularcacinoma,HCC)的发生、发展有关,对临床治疗方案选择及预后的评估等有一定影响,准确判断肿瘤组织的AR状态有重要的临床意义。本研究旨在通过对胞核雄激素受体(nuclearAR,AnR)进行分析,探讨AnR对评估前列腺癌、原发性肝癌雄激素受体状态的意义。方法:取94例PC和192例HCC患者的肿瘤组织及癌周组织,采用受体放射配基结合分析法(radioligandbindingassay,RBA)对组织中胞浆雄激素受体(cytosolAR,AcR)、胞核雄激素受体的亲和力(affinity,KD)、最大结合容量(maximumconcentrationofreceptor,Bmax)进行分析。结果:PC患者中肿瘤组织AcR、AnR的Bmax值(58.82±34.73)、(543.70±249.44)fmol/mgprotein明显高于癌周组织的(21.63±14.89)、(89.20±47.32)fmol/mgprotein(P<0.001);其KD值(0.84±0.52)、(2.15±0.79)nmol/L与癌周组织的(0.78±0.49)、(2.24±0.84)nmol/L之间的差异无统计学意义(P>0.50)。HCC患者中,肿瘤组织AcR、AnR的Bmax值(18.09±16.87)、(59.93±34.12)fmol/mgprotein亦明显高于癌周组织的(10.87±7.60)、(25.54±20.10)fmol/mgprotein(P<0.001);其KD值(0.76±0.57)、(1.89±0.74)

EAE大鼠脑组织咪唑受体变化的研究

目的观察炎性脱髓鞘脑病动物模型(EAE)大鼠脑组织咪唑啉2受体(12R)的变化,探讨12R是否参与了炎性脱髓鞘白质脑病的病理过程。方法将大鼠分为EAE模型组及CFA对照组,EAE模型组通过免疫当天予四足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)-CFA的方式免疫大鼠,后予腹腔注射NS0.4mL每12h一次,于发病高峰期处死。CFA对照组大鼠通过免疫当天予四足垫皮下注射NS-CFA的方式免疫大鼠,后予腹腔注射NS0.4mL每12h1次,连续19d;所有大鼠均予免疫0,48h腹股沟皮下注射百日咳菌苗0.1mL(1×109菌体)。两组大鼠脑组织12R进行饱和结合试验,检测其密度和亲和力变化。结果 CFA对照组大鼠没有发病,EAE组6只大鼠,发病4只。CFA对照组脑组织12R的Kd和Bmax值分别是3.367±0.94nM和162±22.19fmol·mg-1蛋白。EAE组大鼠脑组织12R的Kd和Bmax值分别是5.416±1.153nM和263.0±31.99fmol·mg-1蛋白;与CFA对照组相比,其受体密度明显上调(n=6,P<0.05),而亲和力明显下降(n=6,P<0.01)。结论炎性脱髓鞘脑病模型EAE大鼠脑内12R受体密度上调,亲和力降低。

天麻甙元衍生物的合成及作为脑苯二氮受体基的体外筛选

α-第二丁基对羟基苄醇(简称天-018)是中枢苯二氮革受体的新型配基。作者以天-018为先导化合物,设计并合成了17个目标化合物,其中13个未见文献报道。通过体外竞争性放射配基受体结合分析,对所合成的化合物进行筛选,发现有7个化合物选择性地作用于脑苯二氮(艹卓)受体,其亲和力与结构相关。以α-苄基对碘苄醇竞争抑制作用最强,IC_(50)为3.4×10^(-8)mol/L,表明其对该受体的亲和力最高。

胆汁胆固醇对胆囊收缩素受体表达的影响

目的 :探讨胆汁胆固醇对胆囊收缩素受体 (CCK R)表达的影响。方法采用放射免疫分析法和受体放射配基结合法检测对照组、高胆固醇组、自然恢复组及治疗组豚鼠门静脉血CCK水平、胆囊CCK R的最大结合容量(Bmax)和亲和力 (Kd) ,同时观察空腹胆囊体积 (FV)、胆囊胆汁量 (FB)和餐后胆囊体积 (RV)、胆囊胆汁量 (RB)及胆囊收缩率 (E % )、胆汁胆固醇浓度的变化。结果与对照组比较 ,高胆固醇组豚鼠FV、FB增大 (P <0 .0 5 ) ,RV、RB也增大 ,胆囊收缩率下降 (P <0 .0 1) ,胆汁胆固醇浓度升高 (P <0 .0 5 ) ,门静脉血CCK水平及CCK R的Kd无改变 ,而CCK R的Bmax下降 (P <0 .0 1) ;治疗组上述各项指标正常。结论胆汁中的高胆固醇通过下调胆囊CCK R表达而导致胆囊收缩功能障碍 。

小鼠肝细胞膜载脂蛋白CⅢ受体特性的进一步研究

目的 研究小鼠肝细胞膜载脂蛋白 (apo) C 受体与 apo C 、C 、C 及 E的结合特性。方法 用受体的放射性配基结合分析法 (RBA )观察血浆脂蛋白 (VL DL、L DL及 HDL )以及纯化的 apo C 、C 、C 及 E与小鼠肝细胞膜 apo C 受体结合的活性。结果 apo C 受体与 1 2 5I- apo C 的结合能被非标记 apo C 、C 、C 、E及 VL DL抑制 ,其中 apo C 、C 、C 及 VL DL抑制曲线相似 ,以 apo C 的抑制作用最强 ,apo C 次之 ,apo C 最弱 ,apo E与 apo C 受体亦有一定结合 ;而含 apo B10 0的 L DL以及含 apo A 及 apo A 的 HDL和人血清白蛋白则对结合无影响。结论 小鼠肝细胞膜上存在 apo C 受体 ,除能特异结合 apo C 及 VL DL外 ,亦能在一定程度上与apo C 、C 及 E结合。

耐力训练对性成熟前后心肌Beta—肾上腺素受体的影响

1 引言 有氧耐力训练可导致安静心动过缓或极限负荷时心率降低,已为公认。这一效应与交感神经系统兴奋性降低有关。从理论上说,该系统活性降低的主要环节是Beta—肾上腺素受体(Beta—AR)系统,其中包括Beta—AR,腺苷酸环化酶(AC)以及鸟核苷酸结合调节蛋白(Gs)的活性、数量及其间偶联变化,对此,国外近年已有较多报导。

平律复方抗实验性心律失常的作用及其机理研究

目的:研究平律复方(PL)抗实验性心律失常的作用,并初步探讨其作用机理。方法:采用氯仿、氯化钙以及心肌缺血再灌注三种心律失常动物模型,监测标准Ⅱ导联心电图;测定缺血再灌注大鼠血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;放射配基受体结合法分析心肌组织血小板激活因子(plate-let activating factor,PAF)受体蛋白表达水平;RT-PCR法检测PAF受体mRNA表达水平;测定心肌脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:PL(ig,0.04、0.20、1.00 g.kg-1)对氯仿引起的小鼠心室纤颤有一定的保护作用;能减少氯化钙致大鼠室颤的发生率,降低死亡率;可显著降低心肌缺血再灌注大鼠心律失常的发生率,缩短持续时间,与模型对照组比较,PL小、中、大剂量组心肌CK和LDH分别降低了35.4%、51.8%、57.5%和22.4%、34.4%、38.4%;剂量依赖性下调心肌细胞PAF受体蛋白及mRNA表达水平,升高心肌SOD活性、降低MDA含量。结论:PL对氯仿、氯化钙以及心肌缺血再灌注诱发的心律失常均有较好的保护作用,其作用机制可能与下调心肌细胞PAF受体水平,抑制脂质过氧化有关。