利用抗坏血酸过氧化物酶揭示生防放线菌XFS-4对大豆胞囊线虫的抗性

于2021年在黑龙江省黑河市从大豆根际土壤中分离获得1株对大豆胞囊线虫具有较高活性的放线菌XFS-4,为了解该生防放线菌XFS-4对大豆胞囊线虫的作用机理,以黑河市主栽大豆品种黑河43为试材,用XFS-4发酵液做种子包衣处理,盆栽条件下人工接种大豆胞囊线虫,以未接种作对照,接种后4、7、11、14 d取样,测定大豆叶内抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性变化。同时,以抗坏血酸过氧化物酶基因序列设计引物,利用RT-PCR技术,分析该基因在菌株XFS-4包衣黑河43后抗大豆胞囊线虫过程中的表达差异,从基因转录表达水平上对大豆抗坏血酸过氧化物酶基因(Gm-Apx)进行研究,以发现该基因与大豆胞囊线虫(SCN)抗性之间的关系。结果表明,XFS-4包衣黑河43接种大豆胞囊线虫4、7 d后,APX活性明显高于对照,接种条件下的黑河43 APX活性随大豆生长一直升高。在接种大豆胞囊线虫后,其菌株XFS-4包衣黑河43处理组中,Gm-Apx相对表达量在接种后4、7 d表达上调,而在接种11、14 d表达下调,说明该基因参与了大豆早期防御胞囊线虫的侵染过程,对植物抗性反应及解除胁迫诱导的氧化损害起了很重要的作用。

橡胶树白粉病拮抗放线菌的筛选及田间防效评价

为筛选对橡胶树白粉病菌具有拮抗作用的生防放线菌,本研究从云南省主要植胶区橡胶树根际土壤中分离放线菌,以橡胶树主要病害病原菌为靶标菌,采用平板对峙培养法初步筛选出1株抑菌效果良好的放线菌菌株,命名为DL5C,其对橡胶树尖孢炭疽菌Colletotrichum acutatum、胶孢炭疽菌C.gloeosporioides、橡胶树白根病病菌Rigidoporus lignosus、橡胶树褐根病病菌Phellinus noxius的抑菌率分别为58.35%、60.97%、60.03%、74.00%;DL5C菌株发酵滤液对橡胶树白粉病菌Oidium heveae孢子萌发的抑制率达72.40%;田间试验结果表明,处理7 d后,DL5C菌株发酵液对橡胶树白粉病的相对防效为80.93%。通过菌株形态特征、培养特征、生理生化特性以及16S rRNA基因序列分析,放线菌菌株DL5C被鉴定为不吸水链霉菌Streptomyces ahygroscopicus。

防控花生白绢病的根际放线菌分离鉴定及防效评价

花生白绢病是由齐整小核菌Sclerotium rolfsii Sacc.引起的发生在花生茎基部的真菌病害,严重制约花生的品质与产量。本研究利用稀释涂布法从怀牛膝根际土壤中分离纯化了116株放线菌,并从中筛选鉴定了能够防控花生白绢病的菌株。通过平板对峙试验筛选得到两株抑菌活性较好且稳定的菌株Soil-1-5和Soil-3-28,它们对齐整小核菌的抑制率分别为80.43%和92.34%。根据形态学观察、生理生化试验及16S rRNA基因序列分析鉴定,两株菌分别被鉴定为疮痂链霉菌Streptomyces scabiei和藤黄灰链霉菌Streptomyces luteogriseus。采用菌丝生长速率法测定了拮抗菌株无菌发酵滤液对植物病原菌的抑制作用。结果表明,菌株Soil-1-5和Soil-3-28的无菌发酵滤液稀释5倍后对齐整小核菌的抑制率分别为73.67%和57.11%,且对禾谷镰孢菌等6种植物病原菌均有不同程度的抑制作用。此外,两菌株的无菌发酵滤液对齐整小核菌菌核萌发和菌核形成也有较好拮抗作用。盆栽试验结果表明,菌株Soil-1-5和Soil-3-28对花生白绢病的防治效果分别为51.92%和31.74%,其中菌株Soil-3-28对花生生长有促进作用。综上,菌株Soil-1-5和Soil-3-28对花生白绢病有较好的防治效果,具有潜在应用价值。

放线菌聚酮类化合物生物合成体系重构研究进展

放线菌因其丰富的次级代谢产物而成为候选药物发掘的宝贵资源库,其蕴含的活性化合物包含聚酮类、非核糖体肽类、氨基糖苷类、萜类等,其中聚酮类化合物占比最大。大环内酯是聚酮类化合物的典型,常常被用作抗生素、抗肿瘤剂、免疫抑制剂、抗寄生虫剂等,具有重要的生物学意义。本文立足聚酮类大环内酯的生物合成过程,提出了从基因组重塑、调控通路重组、组合代谢工程及聚酮类化合物结构的衍生与多样化等多角度,实现放线菌聚酮类生物合成体系的优化,为工业规模生产聚酮类药物及其新型衍生物提供技术支撑。通过这种多维度的方法,结合最新的合成生物学使能技术,遵循绿色、环保、高效和可持续的策略,可以更有效地优化和增强放线菌中聚酮类化合物的生产,为未来药物的开发和生产提供新的可能性。

库姆塔格沙漠可培养放线菌多样性及抑菌潜力评估

沙漠土壤蕴藏丰富的放线菌资源,尤其是稀有放线菌类群,是挖掘新放线菌资源的理想生境。本研究开展库姆塔格沙漠可培养放线菌抑菌活性筛选,以期为该地区放线菌资源开发和利用提供菌株资源。根据分离菌株的16S rRNA基因序列分析放线菌多样性;从库姆塔格沙漠4份土样中分离纯化到370株放线菌,分布于11个目12个科的22个属,其中链霉菌属和糖丝菌属为优势菌属,分别占分离放线菌菌株的63%和13.8%。对14株放线菌潜在新种(16S rRNA基因序列相似性低于98.65%)进行高氏一号、ISP2、TSB培养基液体发酵,获得提取浓缩物样品进行抑菌活性筛选,发现11株潜在新种的发酵产物有广谱抗菌活性。本研究表明,库姆塔格沙漠中含有丰富的放线菌资源,具有从中发现放线菌新菌种和抗生素的潜力。

放线菌LA-5主要抑菌成分及对灰葡萄孢的抑制作用

灰葡萄孢引起的灰霉病是葡萄采后重要病害之一。为筛选拮抗葡萄灰霉病的生防菌并明确其主要抑菌成分,本研究采用生长速率法分析了拮抗链霉菌LA-5发酵提取物的抑菌活性,测定了菌株LA-5发酵液提取物拮抗活性和稳定性,利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析了代谢产物的主要成分。结果表明,LA-5发酵提取物对灰葡萄孢具有明显的抑制作用,其对灰葡萄孢的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC)分别为9和14 mg·L^(-1)。LA-5发酵液提取物耐高温、酸和紫外照射,对病原菌具有较稳定的拮抗活性。GC-MS分析结果显示,LA-5发酵液中的主要活性成分有17种,其中邻苯二甲酸二丁酯(DBP)含量高达52.87%。DBP对灰葡萄孢菌丝生长及分生孢子萌发均具有强烈的抑制作用。本研究为灰霉病的生物防治提供了理论基础。

羊放线菌病的诊治

羊放线菌病作为牛羊的常见多发病,呈地方性流行,在生产实际中较普遍。该文详细介绍1例绵羊放线菌病的诊疗经过,探讨其发病的原因,诊断要点、实验室检查及治疗措施,以供相关人员参考。

生防放线菌Sc-7的分离、鉴定、抑菌活性及其对水稻的促生作用

为了筛选出能够显著抑制水稻白叶枯病菌Xanthomonas oryzae pv. oryzae (以下简称Xoo)和水稻细菌性条斑病菌X. oryzae pv. oryzicola (以下简称Xoc)的放线菌,本研究从不同植物根际采集土壤,采用稀释涂布法和平板划线法共分离得到60株放线菌,通过共培养法和牛津杯法筛选得到对Xoo和Xoc具有显著抑制作用的1株放线菌Sc-7。依据形态和显微结构观察、生理生化试验和多基因聚类分析,构建系统发育进化树,鉴定菌株Sc-7为淡紫灰链霉菌Streptomyces lavendulae。盆栽防效试验结果表明:先喷洒菌株Sc-7发酵稀释液(2倍),再接种病原菌对水稻白叶枯病和水稻细菌性条斑病的防治效果分别为74.57%和65.33%,并且病斑长度明显变短。Xoo和Xoc病菌经过菌株Sc-7发酵滤液处理后,细胞大面积溶胀、皱缩和穿孔,细胞膜通透性增加,胞外多糖分泌量减少。浸种促生试验结果表明:不同浓度的菌株Sc-7发酵稀释液皆能促进水稻种子的芽和根生长。与无菌水对照相比,菌株Sc-7发酵稀释液10倍和50倍处理,使芽长分别增加32.79%和37.70%,使根长分别增加75.00%和97.00%。试管促生试验结果表明:菌株Sc-7发酵稀释液10倍和50倍处理,使水稻幼苗株高增长幅度分别为16.68%和10.53%。盐胁迫缓解试验结果表明:菌株Sc-7发酵稀释液10倍处理,在一定程度上能够缓解水稻盐胁迫后的症状。上述结果表明,菌株Sc-7具有显著的促生和防病潜能,有望开发成为一种生物农药和生物肥料。

龋齿放线菌致乳腺炎1例

龋齿放线菌(Actinomyces odontolyticus)是一种罕见的兼性厌氧革兰阳性杆菌,属于放线菌的一个亚种。它属于口咽部的正常菌群,发生感染可累及全身各个部位,包括胸部、头颈部、盆腔及四肢皮下软组织等[1-3]。乳腺龋齿放线菌病罕见,既往仅见1例文献报告[4]。本文对昆明市第一人民医院收治1例龋齿放线菌感染乳腺炎病例情况进行报告,总结和分享诊治经验。

放线菌剂对南疆沙区枣树生长生理及产量果品的影响

为探究放线菌剂在南疆沙漠土壤条件下对枣树生长生理及产量果品的影响,选择南疆洛浦县典型沙区枣园,以嫁接4年生‘七月鲜’枣树为研究对象,设置15、30和45g·株^(-1)3种不同用量放线菌剂处理,0g·株^(-1)作为对照,测定了枣树生长、生理、产量及果实品质等相关指标。结果表明,各放线菌剂处理下,枣树新发枣头枝基径在8、9月均较对照有所增加,尤其30g·株^(-1)处理较显著,而二次枝基径始终与对照无明显差异,叶面积在30和45g·株^(-1)处理下7、8月均较对照显著增加,而叶片厚度仅30g·株^(-1)处理在7月有明显增厚;各放线菌剂处理下,叶片叶绿素相对含量在8月,净光合速率在7、8和9月均较对照显著提高,而叶片相对含水量仅30g·株^(-1)处理表现持续高于对照;7月各放线菌剂处理下的叶片超氧化物歧化酶(SOD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均较对照显著上升,而多酚氧化酶(PPO)活性除15g·株^(-1)处理外也都显著上升,至8月叶片PAL活性均趋于对照,SOD活性除15g·株^(-1)处理外仍显著高于对照,而PPO活性则全部显著提升;各放线菌剂处理下枣树单株产量和优果重量均较对照有所提高,其中15和30g·株^(-1)处理下差异显著,优果率均明显提高,而病果率则均无明显差异;各放线菌剂处理下,鲜枣可溶性固形物含量在白熟、脆熟和完熟期均较对照有一定提高,尤其30和45g·株^(-1)处理一直表现显著增加,而对于干枣,总糖含量与糖酸比均较对照显著提高,其中30g·株^(-1)处理还显著降低了可滴定酸含量。综上,放线菌剂可促进枣树生长,增强枣树重要生理功能,并提高产量和改善枣果品质。在南疆沙区枣园实际生产中,可每株配施30g放线菌剂,需结合春季施农家肥为主的基肥施用。

采用实时荧光定量PCR法检测大曲中的3种高温放线菌

建立实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)方法对大曲中3种高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris、T.intermedius和T.daqus)进行特异性定量检测。根据T.vulgaris、T.intermedius、T.daqus全基因组中特异性单拷贝核心基因recA、mdH、gyrA为参考序列分别设计了一对可扩增278、233、291 bp片段的引物;经特异性、有效性、准确性实验显示,在常见的13种白酒酿造微生物中,引物TV、TI、TD分别可特异性检测T.vulgaris、T.intermedius、T.daqus,检测范围为2.82~8.82 lg copies/μL,加标回收率95%~105%。进一步对大曲发酵过程样品检测,结果显示,T.vulgaris含量在呈现波动趋势,在第5天达到最高,为(6.06±0.02)lg copies/g;T.intermedius含量呈现先上升后下降的趋势,在第7天达到最高,为(6.33±0.13)lg copies/g;T.daqus含量在0~12 d呈现波动趋势,在12~14 d下降,随后一直上升,发酵结束时含量最高,为(7.62±0.02)lg copies/g。该研究建立的RT-qPCR方法可对大曲发酵过程中3种高温放线菌进行特异性鉴定和快速定量,为进一步监测高温放线菌在白酒酿造过程中的功能提供了方法。

拮抗柑桔致病菌的放线菌筛选及其活性物质分析

为筛选出防治柑桔病害的菌株,以柑桔果实采后危害最大的病原意大利青霉为指示病原菌,利用平板梯度稀释法从土壤中分离出具有拮抗作用的放线菌,通过形态学观察和16S rDNA测序鉴定该菌株,进一步对该菌株所产抑菌活性物质的稳定性分析。结果表明,从土壤中筛选获得对意大利青霉菌的抑菌圈直径达到(16.69±1.74)mm的浑圆链霉菌菌株tz13,菌株tz13所产抑菌活性物质对温度、紫外线、酸和弱碱都有较强的耐受性,同时对引起柑桔果实采后另一种重要病原微生物——指状青霉及其他植物病原真菌(辣椒疫病菌、西瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌和烟草黑胫病菌)具有抑制作用。菌株tz13在防治柑桔病害方面具有商用开发价值。

16例肺放线菌病的临床特征及误诊经验总结

目的分析肺放线菌病的临床特征表现和误诊经验。方法回顾性分析2008年1月至2019年10月航天中心医院收治的16例肺放线菌患者的临床资料,分析肺放线菌病的临床特征、影像学表现、诊断、治疗及预后情况。结果16例肺放线菌患者中,发病部位:右肺上叶4例,占比25.0%;右肺中叶1例,占比6.3%;右肺下叶2例,占比2.5%;右肺中下叶2例,占比12.5%;左肺上叶5例,占比31.3%;左肺下叶2例,占比12.5%。临床表现:咳嗽16例,占比100.0%;咳痰16例,占比100.0%;咯血10例,占比62.5%;发热3例,占比18.8%;胸痛1例,占比6.3%。影像学表现:周围型11例,占比68.8%;中央型5例,占比31.3%。诊断情况:9例为肺楔形切除或肺叶切除后病理确诊;4例为支气管镜检查取活检病理确诊;3例为CT引导下肺穿刺活检病理确诊。影像学表现:16例患者镜下均见典型的放线菌菌团,且多伴有不同程度的肺组织炎症反应。治疗及预后情况:16例患者确诊后均于早期行足量足疗程青霉素治疗,病情均得到好转。结论肺放线菌病临床表现缺乏特异性,临床医师应引起高度重视,及时明确诊断,早期足量足疗程使用抗生素疗效显著。

类风湿关节炎合并宫颈放线菌病及输尿管梗阻1例并文献复习

放线菌病是一种少见的慢性肉芽肿性疾病,以肉芽肿及组织纤维化窦道的形成为特点,其症状与许多传染性和非传染性疾病相似,临床上经常被误诊。现报告1例长期使用免疫抑制剂及生物制剂治疗的类风湿关节炎合并放线菌感染的患者。该患者为60岁女性,类风湿关节炎病程10余年,既往使用氨甲蝶呤、艾拉莫德、英夫利昔单抗等多种免疫抑制剂及生物制剂治疗,关节肿痛反复发作,对类风湿关节炎疾病活动度的控制不佳,白细胞计数持续升高。全腹部CT示盆腔占位,右侧输尿管扩张。对宫颈管刮出组织进行病理检查,可见大量中性粒细胞浸润和硫磺样颗粒,考虑放线菌感染。予多西环素抗感染治疗18个月,以及艾拉莫德、硫酸羟氯喹及托法替布抗风湿治疗后,患者关节肿痛好转,白细胞计数正常。随访2年,患者病情稳定,无复发。类风湿关节炎患者使用较强免疫抑制剂、生物制剂时,应警惕合并发生感染,一些慢性、隐匿部位及少见病原体的感染也应当引起临床医生的重视,并尽早进行相关筛查以明确诊断。

洛阳地区烟株内生放线菌的分离鉴定及其生物学功能测定

为明确洛阳地区烟株内生放线菌的种类及其生物学功能,采用稀释涂布平板法分离健康烟株内生放线菌,通过形态学观察、生理生化测定并结合16S rDNA序列分析鉴定其种类;采用平板对峙法、菌丝生长速率法测定内生放线菌株对烟草疫霉的拮抗作用;采用紫外分光光度计法测定菌株产IAA含量。结果表明,从健康烟株体内共分离获得10株内生放线菌,菌株LBY2、LBY3、LTJ4、LTG2、SG4为淀粉酶链霉菌(Streptomyces diastaticus),菌株SG3、RG4、LTJ5、LBY4为嗜热一氧化碳链霉菌(S.thermocarboxydus),菌株RG3为娄彻氏链霉菌(S.rochei)。淀粉酶链霉菌与娄彻氏链霉菌对烟草疫霉菌的抑制率均达到50%以上;所有菌株均可产生吲哚乙酸,其中娄彻氏链霉菌发酵液中吲哚乙酸含量高达20.43 mg/L。由此说明洛阳地区烟株内生放线菌主要为淀粉酶链霉菌、娄彻氏链霉菌与嗜热一氧化碳链霉菌,其中淀粉酶链霉菌与娄彻氏链霉菌对烟草疫霉菌菌丝生长具有较强的抑制作用与产吲哚乙酸功能。

食管放线菌感染1例

背景食管放线菌病是一种罕见的食管感染性疾病,常见症状包括吞咽困难和吞咽痛,这些症状通常是非特异性的,易导致误诊或延迟诊断.病例简介85岁女性,有9年的吞咽困难症状,加重9 d.她合并了高血压病、慢性阻塞性肺疾病及脑梗塞病史.胃镜发现食管多发溃疡并狭窄,后续组织病理报告确诊为食管放线菌病.抗菌治疗临床缓慢改善.结论食管放线菌病临床表现非特异性,组织病理学是目前临床确诊放线菌感染的主要检查方法.高效抗生素长期治疗,本病预后良好.

放线菌酮对小球藻的毒性效应及其机制研究

为探究抗生素对藻类的毒性效应与机制,以放线菌酮(cycloheximide,CHX)为潜在污染物,以小球藻为受胁迫对象,通过检测小球藻细胞密度、叶绿素a(chlorophyll a)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和PSⅡ最大光化学量子产量(optimal/maximal quantum yield of PSⅡ,F_(v)/F_(m))等生长及生理生化指标,探究抗生素对藻类的毒性效应.研究结果表明CHX对于小球藻的96 h EC_(50)为1.229 mg/L.在该质量浓度下作用96 h后,CHX对小球藻细胞密度的抑制率为49.7%,使叶绿素a的含量降低了36.2%,对F_(v)/F_(m)的抑制率为13.0%.此外,与对照相比,CHX暴露使小球藻的ROS和MDA分别上升了533.7%和618.6%.因此,CHX对小球藻的毒性效应主要体现为生长抑制,其可能的机制是引起氧化应激(如产生ROS和MDA),进而抑制细胞的光合作用(降低F_(v)/F_(m)).

剖宫产术后苏黎世放线菌感染导致腹壁多发窦道1例

放线菌病是由放线菌引起的亚急性或慢性感染性疾病,常见的感染部位主要为面颈部、肺部,发病率约为1/30万到1/10万[1]。由于其临床表现缺乏特异性,实验室检出率低或因存在混合性感染而易导致漏诊、误诊。现报道1例剖宫产术后腹壁切口苏黎世放线菌感染导致腹壁多发窦道形成的病例,以提高临床医师对该病的认识。

放线菌4-1的鉴定及其发酵液抑菌作用和稳定性探究

旨在挖掘盐碱地菌种资源并对其抑菌功能进行检测。以自行分离的放线菌4-1为候选菌株,利用形态学、生理生化以及分子生物学手段对其种属地位进行综合鉴定;采用琼脂扩散法和菌丝生长速率抑制法对其发酵液抑菌活性和稳定性进行评价。结果表明,菌株4-1与紫赤链霉菌(Streptomyces puniceus)最为相似,同源性高达99.93%,建立的系统发育树中二者亲缘关系最为相近;菌株4-1发酵液的抑菌谱比较广泛,对病原性细菌(6株)和病原性真菌(5株)都具有一定的抑制效果;酸碱、热、紫外线对发酵液稳定性影响较小,但当温度高于90℃或pH<4时,发酵液抑菌活性下降。该菌种资源的获得及功能评价,为进一步扩大根际促生细菌种类及应用奠定了菌种基础。

海南红树林底泥海洋放线菌的抗菌及抗群体感应活性筛选

采用滤纸片法以紫色色杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等为指示菌对84株分离自红树林底泥的海洋放线菌进行抗菌及抗群体感应活性筛选,再对高活性菌株进行活性复筛以及薄层层析化学多样性分析。结果显示,菌株HN2-56具有很强的抗群体感应活性及较弱的抗菌活性,且代谢产物较为丰富。对该菌的代谢产物进行初步分离及GC-MS分析,从其活性组分中鉴定出13个可能的化合物,且多个化合物具有一定的生物活性。活性验证试验发现,化合物4(二乙基甲苯甲酰胺)和12(莪术烯醇)具有抗群体感应活性。经16S rDNA序列分析,结合形态观察和系统发育分析,将菌株HN2-56鉴定为链霉菌(Streptomyces chumphonesis)。该菌株在抗群体感应方面有一定的应用潜力,具有进一步研究的价值。