两个跨多属感染的放线菌噬菌体

以吸水链霉菌应城变种10-22菌株为指示菌,从土壤中分离得两个温和性噬菌体,φHAU3和φHAU4。多次单斑分离纯化证明φHAU3的噬菌斑为小斑,φHAU4为大斑;SalGⅠ酶切分析结果表明此两株噬菌体DNA酶切片段完全不同,分属两个不同的噬菌体;它们的寄主范围很广,在49个菌株(分属于7个属,38个种)中,φHAU3可以感染28个,φHAU4可以感染34个;均可感染链霉菌属以外另外两个属的放线菌菌株——地中海拟无枝酸菌和吸水孢囊放线菌;不能感染限制性内切酶SalGⅡ产生菌——白色链霉菌G,但可以感染其限制酶缺陷型突变株J1074。两株噬菌体的pH适应范围都较广(在pH4～9之间);pH4时φHAU3存活率为96.6％,φHAU4为79.9％;pH达到10时,两株噬菌体的存活率都降至40％;pH11时全部致死。最适温度均为28～37℃,50℃处理30分钟φHAU3成活率仍为57％,而φHAU4则只有9％。用37种限制性内切酶对两种噬菌体DNA进行了单酶切分析,发现它们的DNA均为双链,也均具有粘性末端。两个噬菌体DNA的限制性内切酶片段之和表明,φHAU3和φHAU4的分子量均在50kb左右。两个噬菌体的DNA可转染变铅青链霉菌,但尚不能转染10-22菌株。

南昌链霉菌与放线菌噬菌体ΦC31相互关系的研究

经点滴法和平板法检测 ,放线菌噬菌体ΦC31及大部分衍生噬菌体能感染南昌链霉菌 ,但这些噬菌体的DNA却不能转染南昌链霉菌 .通过比较来自不同宿主的KC5 15噬菌体悬液对变铅青链霉菌和南昌链霉菌的侵染效率 ,发现南昌链霉菌对ΦC31及衍生噬菌体具有很强的限制性 .Southern杂交实验表明 ,ΦC31衍生噬菌体KC30 1(C+ attP+ )可以整合到南昌链霉菌NS - 32 - 2 6的染色体上形成溶源 ,其溶源菌自发释放KC30 1,但热激诱导后并没有提高释放频率 .通过脉冲电泳技术和Southern杂交的方法定位了KC30 1在南昌链霉菌NS - 32 - 2 6染色体上形成溶源的附着位点 (attB) .这些结果均有利于利用以ΦC31为基础的载体对南昌链霉菌进行分子生物学的研究 .

放线菌噬菌体重组酶Sre在大肠杆菌内高效介导位点特异性重组

目的 证明放线菌噬菌体重组酶Sre在大肠杆菌细胞内介导高效的位点特异性重组。方法 在大肠杆菌内构建分子内重组分析系统。质粒pBZP含有方向相同的attB和attP位点,分别位于lacZ基因的两侧。将pBZP电击导入含有sre基因的大肠杆菌细胞。结果 重组的发生导致lacZ基因的切除,使含有X- Gal成分的培养基上细菌菌落从蓝色变成白色。整合后DNA经酶切、PCR和DNA测序证实。发生10 0 %重组率的attB和attP最小片段分别是5 0bp和4 7bp。结论 在大肠杆菌宿主环境中放线菌噬菌体重组酶Sre高效催化位点特异性重组。本分子内重组分析系统是一个简便而有效的方法。

变铅青链霉菌对噬菌体φHAU3抗性与异常修饰之间的相互关系

变铅青链霉菌异常修饰突变菌株ＺＸｌ同时丧失了对噬菌体ＨＡＵ３的抗性，遗传学杂交结果揭示，ＤＮＡ降解和对ＨＡＵ３抗性这两种表型从不发生分离。以ＺＸｌ为宿主和链霉菌低拷贝质粒ＳＣＰ２衍生的载体ｐＩＪ９２２为载体，构建了变铅青链霉菌ＪＴ４６的基因组文库。在８０００多个转化子中获得了一个能使ＺＸ１对ＨＡＵ３显示抗性的杂合质粒，命名为ｐＩＪ８３１０。它除了含有完整的ｐＩＪ９２２外，还携带了大约１１ｋｂ的外源片段。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实，这个外源片段来源于ＪＴ４６，但在ＺＸ１中完全消失。利用转座子Ｔｎ４５６０对该克隆进行诱变定位，获得了中断噬菌体抗性基因表达的衍生质粒，并已证实Ｔｎ４５６０插入在一个２．５ｋｂ的ＢｄｍＨＩ一ＥｃｏＲＩ片段上。