血清基质金属蛋白酶-9、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体及纤溶酶原激活物抑制因子-1联合检测预测老年慢性心力衰竭患者预后的价值

目的 探讨血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)及纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达与老年慢性心力衰竭(CHF)患者心功能分级及预后的关系。方法 选取廊坊市中医医院收治的108例CHF患者及同期50例健康体检者分别作为研究组和对照组。采集受试者血液标本,测定血清MMP-9、suPAR及PAI-1水平。比较不同纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级患者及不同预后患者的血清指标差异,并分析各血清指标对不良预后的预测价值。结果 与对照组相比,研究组血清MMP-9、suPAR、PAI-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。NYHA分级Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级CHF患者的血清MMP-9、suPAR、PAI-1水平呈逐渐升高趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访1年的结果显示,预后良好65例,预后不良43例,预后不良率为39.81%(43/108)。与预后良好患者相比,预后不良患者的年龄更大,合并高血压率更高,左室射血分数(LVEF)更低,左室舒张末期内径(LVEDD)、MMP-9、suPAR及PAI-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、MMP-9、suPAR、PAI-1均是老年CHF患者预后不良的危险因素,LVEF是老年CHF患者预后不良的保护因素(P<0.05)。血清MMP-9、suPAR、PAI-1单独检测及3项联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.711、0.829、0.768和0.840,3项联合检测的敏感度为88.21%,特异度为79.46%。结论 老年慢性CHF患者的血清MMP-9、suPAR、PAI-1表达水平与心功能分级及预后不良密切相关。

微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物(miR-223-3p agomir)组和阴性对照miRNA模拟物(agomir-NC)组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC(给药剂量为每只200 nmol/L),每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(Alb)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)表达水平,采用苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析(GO)、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达情况。结果与模型组相比,miR-223-3p agomir组血清TBIL[(24.32±3.24)比(62.21±4.52)]、Alb[(34.12±7.32)比(59.21±8.21)]、HA[(136.12±10.25)比(298.56±32.14)]、PCⅢ[(39.52±4.25)比(78.32±14.21)]、Ⅳ-C[(50.25±6.32)比(165.85±12.35)]表达均明显降低(P<0.05),小鼠肝组织损伤得到明显改善,浸润的炎性细胞明显减少,纤维化程度明显减轻。GO、KEGG富集及miRNA-mRNA-KEGG关联分析结果显示,miR-223-3p可在炎症、免疫等的59个生命进程中发挥作用。靶点预测结果显示NLRP3可能为miR-223-3p的反向靶点。与模型组相比,miR-223-3p agomir组小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达[(1.24±0.12)比(2.17±0.14)、(1.44±0.11)比(2.65±0.18)、(1.31±0.13)比(1.97±0.21)]及蛋白表达[(0.89±0.05)比(1.93±0.04)、(1.29±0.07)比(2.15±0.09)、(1.50±0.05)比(2.52±0.12)]水平均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-223-3p可抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路的激活,降低机体炎症反应,改善小鼠肝组织损伤,进而发挥其抗肝纤维化作用。

MMP9、AEG-1及EphA7蛋白在中耳鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、星形细胞提升基因-1(AEG-1)、络氨酸蛋白激酶受体A7(EphA7)蛋白在中耳鳞癌组织中的表达及其意义。方法选取65例中耳鳞癌患者作为研究对象,均行手术治疗,术中采集癌组织及癌旁正常组织送检,检测MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白表达情况,比较癌组织与癌旁正常组织内上述表达差异;并分析MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白表达与年龄、性别、肿瘤分期、淋巴结转移、分化程度等病理特征的关系。结果癌组织内MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白阳性表达患者Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移占比高于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白在中耳鳞癌组织内呈高表达状况,且其表达与肿瘤分期、淋巴结转移关系密切,或可作为临床治疗的新靶点。

血清网膜素、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1及胰岛素受体底物-1水平与妊娠期糖尿病发生的关系

目的探讨血清网膜素(Omentin)、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(SerpinB1)及胰岛素受体底物-1(IRS-1)水平与妊娠期糖尿病(GDM)发生的关系。方法选取2019年1月至2021年1月在本院收治的GDM孕妇103例作为GDM组,另随机选择健康孕妇103例作为对照组,记录两组孕妇孕前BMI值、孕期增重、糖尿病家族史、血红蛋白水平、日常运动量等一般资料;检测两组孕妇血糖、胰岛素抵抗相关指标;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清Omentin、SerpinB1及IRS-1水平;采用受试者工作特征曲线(ROC)评价三种指标对GDM孕妇的诊断价值。结果GDM发生与孕前BMI值、孕期增重、糖尿病家族史有关(P<0.05);GDM组孕妇血清Omentin、IRS-1水平均显著低于对照组,同时SerpinB1水平显著高于对照组(P<0.05);GDM孕妇血清Omentin-1、IRS-1与空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均呈负相关,SerpinB1与甘油三酯(TG)、HOMA-IR均呈正相关(均P<0.05);Omentin、SerpinB1、IRS-1及其联合检测预测GDM孕妇发病的曲线下面积(AUC)分别为0.657、0.748、0.700、0.902(均P<0.05)。结论GDM孕妇血清Omentin、SerpinB1、IRS-1存在异常表达,临床可根据其水平变化预测GDM的发生。

六味地黄丸介导RAGE抑制MMP-2/MMP-9对Aβ_(1-40)损伤bEnd.3细胞紧密连接蛋白的影响

目的探讨六味地黄丸对β淀粉样蛋白1-40(Aβ_(1-40))损伤的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的保护作用及其机制。方法采用CCK8法检测Aβ_(1-40)和六味地黄丸含药血清(MSLDP)对细胞活性的影响,筛选合适的作用浓度。将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、MSLDP+Aβ_(1-40)组和MSLDP组,采用Western blot检测低密度脂蛋白相关蛋白1(LRP1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,免疫荧光检测LRP1、RAGE、ZO-1表达;再将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、FPS-ZM1(RAGE抑制剂)+Aβ_(1-40)组和FPS-ZM1+Aβ_(1-40)+MSLDP组,Western blot检测RAGE、MMP-9、MMP-2、ZO-1蛋白表达。结果Aβ_(1-40)呈剂量依赖性降低bEnd.3细胞活性(P<0.01),MSLDP对Aβ_(1-40)损伤的细胞活性具有保护作用(P<0.05,P<0.01),因此选择10μmol/L Aβ_(1-40)和10%MSLDP进行后续实验。与对照组比较,Aβ_(1-40)组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.01),LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),并且LRP1、ZO-1荧光强度降低(P<0.01),RAGE荧光增强(P<0.01);与Aβ_(1-40)组比较,MSLDP组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达和RAGE荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),而LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达和LRP1、ZO-1荧光强度升高(P<0.05,P<0.01)。与Aβ_(1-40)组比较,Aβ_(1-40)+FPS-ZM1组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.05);Aβ_(1-40)+FPS-ZM1+MSLDP组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.01),FPS-ZM1和MSLDP联合使用的效果更佳。结论六味地黄丸能够保护Aβ_(1-40)损伤的脑微血管内皮的细胞紧密连接,减轻血脑屏障障碍,保护神经血管单元防治阿尔茨海默病,可能通过调节RAGE途径抑制MMP-2/MMP-9途径实现。

温针灸对兔膝骨关节炎软骨中ASC、Caspase-1和P2X7蛋白表达的影响

目的 观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型兔关节软骨组织中凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、嘌呤能离子通道型受体7(P2X7)表达的影响,研究温针灸治疗KOA的作用机制。方法 取40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、抑制剂组和温针灸组,每组10只。除空白组外,其余各组采用经典右后肢膝关节伸直位,用石膏管型固定4周制备兔KOA模型。造模成功后,各组给予相应干预措施。应用Lequesne MG评分量表评估兔膝关节状态改变与行为学改变,HE染色观察膝关节软骨病理形态学改变,免疫组织化学法和Western blot法检测软骨组织中ASC、Caspase-1、P2X7蛋白的表达,免疫荧光检测Caspase-1蛋白的表达。结果 造模前,各组实验兔Lequesne MG评分差异无统计学意义(P>0.05);造模后,与空白组相比,其余组Lequesne MG评分均上升(P<0.05);干预治疗后,与模型组比较,温针灸组和抑制剂组评分降低(P<0.05)。HE染色显示,空白组软骨表面结构完整,软骨细胞排列均匀;模型组软骨表面粗糙不平,软骨受损明显,软骨细胞形态大小不一,排列紊乱;抑制剂组和温针灸组软骨表面相对光滑、完整,软骨细胞分布较为均匀,软骨层结构相对清晰。与空白组比较,模型组Mankin’s评分升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组Mankin’s评分降低(P<0.05)。免疫组织化学法、免疫荧光及Western blot检测结果显示,与空白组比较,模型组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均降低(P<0.05);温针灸组和抑制剂组相比,ASC、Caspase-1、P2X7表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 温针灸可减轻兔KOA软骨损伤,其机制可能与ASC、Caspase-1、P2X7表达降低及细胞焦亡抑制有关。

VEGFR-3、MMP-9、nm23-H1蛋白在口腔癌组织中的表达及其临床价值研究

目的:探讨血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、nm23-H1蛋白在口腔癌组织中的表达及其临床价值。方法:选取行手术治疗的口腔鳞状细胞癌患者70例,收集癌组织标本。另选取同期体检健康者70例,采集口腔黏膜组织。采用免疫组织化学染色法检测样本组织VEGFR-3、MMP-9、nm23-H1蛋白表达,分析其与患者临床病理特征的相关性。术后随访5年,记录患者生存情况。分析VEGFR-3、MMP-9、nm23-H1蛋白表达与患者术后5年预后的关系。结果:口腔癌组织VEGFR-3、MMP-9蛋白阳性表达率高于口腔黏膜组织,nm23-H1蛋白阳性表达率低于口腔黏膜组织(均P<0.05)。VEGFR-3、MMP-9蛋白阳性表达患者淋巴结转移比例较高(均P<0.05)。nm23-H1蛋白阳性表达患者淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期-Ⅳ期及肿瘤浸润深度>5 mm比例较低(均P<0.05)。口腔癌组织VEGFR-3、MMP-9蛋白表达与淋巴结转移呈正相关(均P<0.05)。m23-H1蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤浸润深度呈负相关(均P<0.05)。VEGFR-3、MMP-9蛋白阳性表达患者5年生存率低于阴性表达患者(均P<0.05)。m23-H1蛋白阳性表达患者5年生存率高于阴性表达患者(P<0.05)。结论:口腔癌组织VEGFR-3、MMP-9蛋白高表达,nm23-H1蛋白低表达,三者与淋巴结转移以及口腔癌患者预后有关。

人α1-抗胰蛋白酶对小鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及相关机制

目的:探讨人α1-抗胰蛋白酶(hAAT)对小鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及相关机制。方法:采用随机数字表法将SPF级健康雄性C57BL/6野生型小鼠和hAAT转基因过表达小鼠分为四组:野生型假手术组(Sham组)、野生型缺血再灌注组(I/R组)、hAAT转基因假手术组(hAAT-Tg+Sham组)、hAAT转基因缺血再灌注组(hAAT-Tg+I/R组),每组18只。建立小鼠MIRI模型,假手术组只开胸不结扎。再灌注24 h后,每组随机取6只小鼠,通过伊文思蓝和2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC)双染色法测定心肌梗死面积。再灌注7 d后,应用小动物超声系统测量各组小鼠心功能指标,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学改变,Masson染色观察心肌纤维化程度。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠血清标志物心肌肌钙蛋白I (cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及白细胞介素-1β(IL-1β)的浓度变化。蛋白免疫印迹法和免疫组化染色法检测各组心肌组织中核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、活化半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、IL-1β蛋白表达。结果:(1)与Sham组比较,I/R组和h AAT-Tg+I/R组心肌梗死面积均显著增加(P均<0.01),与I/R组比较,hAAT-Tg+I/R组心肌梗死面积显著减小(P<0.05)。(2)hAAT-Tg+I/R组小鼠左心室射血分数和左心室短轴缩短率均明显高于I/R组(P均<0.05),左心室舒张末期内径和左心室收缩末期内径均明显低于I/R组(P均<0.05)。(3)与Sham组比较,I/R组炎性细胞浸润明显、心肌纤维排列紊乱、纤维化程度较重;与I/R组比较,hAAT-Tg+I/R组炎性细胞浸润减少、心肌纤维排列相对整齐、纤维化程度较轻。(4)与Sham组比较,I/R组和hAAT-Tg+I/R组再灌注后24 h和7 d血清中cTnI、CK-MB及IL-1β水平均明显升高(P均<0.05);hAAT-Tg+I/R组血清cTnI、CK-MB及IL-1β水平均明显低于I/R组(P均<0.05)。(5)与Sham组比较,I/R组心肌组织中NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白水平均明显上调,而hAAT-Tg+I/R组NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白水平均明显低于I/R组(P均<0.01)。结论:hAAT对小鼠MIRI具有保护作用,其机制可能与抑制炎性小体NLRP3/caspase-1/IL-1β通路有关。

急性冠脉综合征患者血小板蛋白酶活化受体-1的表达及普伐他汀体外干预的影响

目的:观察急性冠脉综合征(ACS)患者血小板蛋白酶活化受体-1(PAR-1)的表达,探讨普伐他汀对血小板PAR-1表达的影响。方法:临床研究共纳入110例研究对象,分为急性冠脉综合征(ACS)组、稳定型心绞痛组和正常对照组,通过ELISA方法检测富血小板血浆PAR-1的表达。体外研究给予不同浓度普伐他汀干预及ADP刺激AMI患者和正常对照者血小板,采用流式细胞仪检测血小板PAR-1和LOX-1表达的变化。结果:ACS组PAR-1浓度显著高于稳定型心绞痛组和正常对照组;稳定性心绞痛组PAR-1浓度显著高于正常对照组。体外研究证实普伐他汀呈浓度依赖的方式抑制ADP诱导的血小板PAR-1和LOX-1表达。结论:ACS患者血小板表达PAR-1明显增加,普伐他汀体外干预能明显降低ADP诱导的进一步血小板PAR-1的表达。

蛋白酶活化受体-1在鼻咽癌中的表达及意义

目的检测PAR1在鼻咽癌中的表达,探讨PAR1在鼻咽癌中表达的意义。方法免疫组织化学(SP法)检测28例良性鼻咽组织、61例鼻咽癌组织中PAR1中的表达;采用RT-PCR、Western Blot检测鼻咽癌细胞系CNE-1、CNE-2中PAR1表达并比较其表达差异。结果PAR1在鼻咽癌组织及两种鼻咽癌细胞株中均表达。PAR1在28例良性鼻咽组织表达为10例,61例鼻咽癌组织中表达48例。PAR1在鼻咽癌组织中的表达率明显高于在良性鼻咽组织中的表达率(P<0.01),高度恶性细胞株中PAR1的表达明显高于其低度恶性细胞株。结论PAR1的表达与鼻咽癌的发生、生长方式、分期、恶性程度等有关。PAR1在鼻咽癌中的表达可能介导鼻咽癌侵袭转移等恶性生物学行为。

蛋白酶激活受体-1拮抗剂降低心脏骤停后综合征兔血清炎性细胞因子的水平

目的：观察蛋白酶激活受体-1（PAR-1）拮抗剂对心脏骤停后综合征（PCAS）兔血清TNF-α、MCP-1和IL-8的影响。方法大耳白兔30只，随机分为假手术组、PCAS组、PAR-1拮抗剂组。采用窒息性心脏骤停制备兔PCAS模型。 PAR-1拮抗剂组在自主循环恢复后15 min给予PAR-1拮抗剂SCH79797（25μg／kg）静脉滴注，每天一次，其余各组给予等量生理盐水。48 h取股静脉血测定血清 ALT、cTnT、Cys -C 及 NSE，以监测器官功能的变化。采用ELISA测定血清TNF-α、MCP-1及IL-8水平。结果 PAR-1拮抗剂SCH79797可明显减轻心、脑、肝、肾功能障碍。 PCAS组血清TNF-α、MCP-1和IL-8水平均明显高于假手术组（ P＜0．01）。 PAR-1拮抗剂组TNF-α、MCP-1和IL-8水平均明显低于PCAS模型组（ P＜0．05）。结论 PAR-1拮抗剂SCH79797可降低PCAS兔血清TNF-α、MCP-1和IL-8水平，改善心肺复苏后多器官功能障碍。

宫颈癌组织中蛋白酶活化受体-1的表达与盆腔淋巴结转移的关系

目的:探讨宫颈癌组织中蛋白酶活化受体-1(PAR-1)的表达与盆腔淋巴结转移的关系。方法:采用免疫组织化学方法,检测PAR-1在宫颈鳞癌组织(35例)、腺癌组织(25例)及正常组织(20例)中的表达情况。结果:PAR-1在正常宫颈组织中不表达,在宫颈癌组织中有较高的阳性表达(P<0.01),有淋巴转移的癌组织中PAR-1的阳性表达率明显高于无淋巴转移的癌组织(P<0.01)。结论:PAR-1在宫颈癌组织中的表达与盆腔淋巴结转移密切相关。

脑血康对脑出血蛋白酶激活受体-1表达的影响

目的:探讨脑出血后蛋白酶激活受体1(PAR1)的动态表达及脑血康的干预作用。方法:72只大鼠随机分为正常组、脑出血模型6h、24h、3d、7d组和脑血康治疗6h、24h、3d、7d组。用S型胶原酶诱导大鼠脑出血模型。免疫组化方法测定各时间点大鼠脑出血后血肿周围水肿组织PAR1蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测PAR1mRNA表达。结果:正常组大鼠大脑PAR1蛋白和PAR1mRNA表达轻度阳性;模型组6h时PAR1蛋白和PAR1mRNA表达强度开始增强,24h表达进一步增加,于3d达到高峰,然后开始下降,7d时明显下降。在6h、24h、3d、7d各时间点,模型组和脑血康组PAR1阳性细胞数、PAR1mRNA吸光度(A)比值升高,与正常组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);脑血康组PAR1阳性细胞数、PAR1mRNAA比值降低,与模型组各时间点比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论:脑出血后PAR1受到凝血酶的持续活化,脑出血后凝血酶的作用可能通过PAR1介导;脑血康可抑制PAR1活化,这可能是脑血康治疗脑出血的主要机制之一。

蛋白酶激活受体-1拮抗剂对兔心脏骤停后综合征中肾损伤的保护作用及机制

目的:探讨蛋白酶激活受体-1(PAR-1)拮抗剂对心脏骤停后综合征(PCAS)中肾损伤的影响及机制。方法:将日本大耳白兔随机分为假手术组(n=5)、PCAS组(n=10)、PAR-1拮抗剂组(n=10)。采用窒息性心脏骤停法制备兔PCAS模型。PAR-1拮抗剂组于心肺复苏后10 min给予静脉滴注PAR-1拮抗剂SCH79797(25μg/kg),其余各组给予等量生理盐水静脉滴注。72 h后取股静脉血检测血清肌酐和胱抑素C水平;取肾组织制备石蜡切片后行HE染色;采用TUNEL法测定肾脏细胞凋亡情况;应用Western blot测定肾组织半胱天冬酶(casepase)-3、细胞外调节蛋白激酶(ERK)活化情况。结果:与假手术组相比,PCAS组血清肌酐和胱抑素C水平明显上升,肾组织有大量炎性细胞浸润,凋亡细胞数显著增多,有催化活性的caspase-3裂解片段(cleaved caspase-3)表达增高,磷酸化ERK(p-ERK)表达减少(P<0.05)。与PCAS组相比,PAR-1拮抗剂组肾组织损伤减轻,血清肌酐和胱抑素C水平明显下降,凋亡细胞数减少,cleaved caspase-3表达降低,而p-ERK表达显著增高(P<0.05)。结论:PAR-1拮抗剂SCH79797能抑制PCAS兔肾组织的炎症反应和细胞凋亡,可能与ERK信号通路激活有关。

蛋白酶活化受体2对大鼠肝星状细胞分泌MCP-1的诱导作用

目的探讨蛋白酶活化受体2(PAR2)对大鼠肝星状细胞(HSC)分泌单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的调控作用。方法选用培养7d的SD大鼠HSC并接种于培养板各孔内,分别用不同浓度PAR2激动剂、活性肽、反活性肽和抑制剂刺激,ELISA法检测培养上清MCP-1水平。结果PAR2激动剂和活性肽可引起HSCMCP-1释放增加,抑制剂可抑制HSC促MCP-1的释放作用,其反活性肽不引起MCP-1释放增加。结论在大鼠肝纤维化炎症反应中,PAR2可促进HSC分泌MCP-1,促进炎症反应,其反活性肽和抑制剂可能具有抗炎作用。

大鼠脑出血后蛋白酶激活受体-1与细胞凋亡关系的实验研究

目的研究大鼠脑出血(ICH)后血肿周围蛋白酶激活受体-1(PAR-1)、神经细胞凋亡等的表达。方法将60只SD大鼠分为假手术组和ICH组,采用立体定位仪定位注射自体不凝血制造大鼠ICH模型,分别于术后6h、1d、2d、3d、5d、7d处死,免疫组织化学法检测血肿周围PAR-1、TUNEL阳性细胞(凋亡细胞)数及小胶质细胞的表达。结果假手术组PAR-1少量表达,偶见凋亡细胞;ICH组自6h起PAR-1、凋亡细胞及小胶质细胞数量大量增加,3d达高峰,PAR-1在7d基本降至假手术组水平,但凋亡细胞、小胶质细胞仍处于较高水平,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ICH后血肿周围存在大量PAR-1表达上调、神经细胞凋亡、小胶质细胞增加。

尖锐湿疣中蛋白酶激活受体-1表达与血管增生的关系及意义

目的:探讨尖锐湿疣(CA)组织中蛋白酶激活受体(protease-activated receptor,PAR)-1的表达与血管生成的关系及意义。方法:对28例CA患者病变组织行常规组织病理切片和苏木精-伊红染色,并对其进行血管计数,应用反转录(RT)-PCR和免疫组化法检测PAR-1的表达情况,同时以17份正常包皮组织作为对照。结果:CA皮损组织的血管数比正常包皮组织明显增多(t=5.192,P<0.001);CA皮损组织中PAR-1mRNA平均表达水平显著高于正常包皮组织(t=7.26,P<0.001);PAR-1蛋白在CA组织中的表达较正常包皮组织显著增强(χ2=16.218,P<0.001),PAR-1在CA皮损中从基底层至角质层下方均有表达,而正常包皮仅在基底层有弱阳性表达,且PAR-1蛋白表达与血管数存在显著正相关(r=0.823,P<0.001)。结论:PAR-1在CA皮损组织中的过度表达以及与血管数的正相关提示PAR-1与血管生成有关,PAR-1在CA发病中起一定的作用。

蛋白酶激活受体-1在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察并探讨蛋白酶激活受体-1(proteinase activated receptor-1,PAR-1)在结肠癌组织中表达的临床意义。方法:用免疫组织化学方法检测65例结肠癌及其癌旁肠组织中PAR-1的表达情况。结果:PAR-1的表达在结肠癌组织中高于癌旁肠组织,随肌壁癌组织浸润度和淋巴结转移程度的提升而增高,均有显著差异(P<0.01);PAR-1的表达虽随着癌分化程度降低而增高,但无显著差异(P>0.05)。结论:PAR-1的表达与结肠癌发展及临床病理分期有关,可作为结肠癌临床预后指标之一。

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h。用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平。结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍。凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用。时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。

蛋白酶活化受体1诱导大鼠肝星状细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶活化受体1(proteinase-activated receptors 1,PAR1)激动剂和活性肽对大鼠肝星状细胞(hepatic stellatecell,HSC)分泌单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)的调控作用。方法应用改良的Friedman方法和Nycodenz一步密度梯度离心法分离SD大鼠HSC,选用生长7天的HSC,接种于12孔培养板各孔内,分别用不同浓度的PAR1激动剂-凝血酶、凝血酶抑制剂水蛭素、PAR1活性肽SFLLR和反活性肽RLLFS进行刺激,刺激时间为2、8、16 h,用ELISA方法检测培养细胞上清液中的MCP-1水平。结果经过16 h的培养,PAR1激动剂-凝血酶和活性肽SFLLR可引起HSC MCP-1的释放增加,凝血酶抑制剂水蛭素及PAR1反活性肽RLLFS不能引起MCP-1的释放增加。结论PAR1活性肽和凝血酶可促进SD大鼠HSC分泌MCP-1及肝纤维化大鼠肝脏炎症反应,PAR1反活性肽和凝血酶抑制剂在肝纤维化炎症反应中可能具有抗炎作用。