效应性T细胞分化异质性及调控

初始型CD4+T细胞和CD8+T细胞在宿主体内经过抗原刺激后,出现克隆扩增,形成高频率的抗原特异性T细胞,并迅速拥有效应功能.这种T细胞数目和功能的质、量的变化,伴随抗体反应,形成了免疫记忆,构成了针对感染性疾病及其它有关疾病的基本保护性免疫.疫苗对减少感染引起的发病率和死亡率起了非常重要的作用,其终极目标是发展长效的保护性免疫.

MOR106通过阻断JAK2/STAT3信号通路抑制IL-17C介导的Tfh细胞分化来减轻特应性皮炎小鼠炎症

目的 探讨特应性皮炎(AD)模型中白细胞介素17C(IL-17C)介导滤泡辅助性T(Tfh)细胞分化的意义。方法BALB/c小鼠分为对照组、AD模型组、低剂量MOR106处理组、高剂量MOR106处理组,每组8只。除对照组外,其余各组均用2,4-二硝基氯苯(DNCB)处理建立AD模型,低剂量和高剂量MOR106处理组分别给与5 mg/kg或10 mg/kg MOR106(抗IL-17C huIgG1)处理。通过流式细胞术分析小鼠外周血中Tfh细胞亚群的分化,并采用Western blot法检测皮肤组织中Janus激酶2/信号转导子与转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路蛋白表达。结果 与对照组相比,AD模型组皮炎严重程度评分、两耳之间的质量差异、脾脏质量、脾脏指数均显著增加,AD组小鼠的Tfh细胞亚群显示去调节分化,导致外周血中CD4^(+)CXC趋化因子受体5(CXCR5)^(+)γ干扰素(IFN-γ)^(+)Tfh1细胞、 CD4^(+)CXCR5^(+)IL-17A^(+)Tfh17细胞和CD4^(+)CXCR5^(+)IL-21^(+)Tfh21细胞的百分比显著增加,以及CD4^(+)CXCR5^(+)IL-10^(+)Tfh10细胞和CD4^(+)CXCR5^(+)叉头盒转录因子3(FOXP3)^(+)滤泡调节性T(Tfr)细胞的百分比显著减少,磷酸化的JAK2(p-JAK2)、 p-STAT3蛋白水平显著增加;与AD模型组相比,MOR106处理组皮炎严重程度评分、两耳之间的质量差异、脾脏质量、脾脏指数均显著降低。MOR106处理有效地逆转AD小鼠外周血中Tfh1细胞、 Tfh10细胞、 Tfh17细胞、 Tfh21细胞和Tfr细胞的这些变化趋势。与AD组相比,低剂量和高剂量MOR106处理组小鼠p-JAK2、 p-STAT3蛋白水平显著降低。结论 MOR106通过阻断JAK2/STAT3信号通路、抑制IL-17C介导的Tfh细胞分化来减轻AD小鼠炎症反应。

微小RNA-214靶向调控PTEN对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制研究

目的:探讨微小RNA-214(miR-214)靶向调控第10号染色体丢失性磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为miR-124 mimic组(转染miR-124 mimic)、miR-124 NC组(转染miR-124 NC)、pcDNA3.1-PTEN组(转染pcDNA3.1-PTEN)、miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组(转染miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN)。采用在线生信预测miR-124和PTEN靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因进行验证。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞miR-124和PTEN mRNA表达。采用CCK-8法检测细胞增殖。采用碱性磷酸酶活性测定检测细胞分化能力。采用茜素红染色和骨钙素水平测定检测细胞的矿化。采用Werstern blot检测PTEN、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、骨桥蛋白(OPN)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)水平。结果:与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组野生型PTEN的荧光素酶活性降低(均P<0.05)。与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组miR-124及p-PI3K、p-AKT蛋白表达升高,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平降低,而pcDNA3.1-PTEN组则相反(均P<0.05)。与miR-124 mimic组比较,miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平升高(均P<0.05)。结论:miR-214通过靶向下调PTEN蛋白表达激活PI3K/AKT信号通路,从而调控成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化。

TF3-H4对CD4^+CD25^+调节性T细胞和CD4^+CD25^-效应性T细胞早期活化的影响

目的观察1',2',3',7'-四氢茶黄素-3,3'-双没食子酸酯(TF3-H4)对CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞早期活化的影响,分析TF3-H4对两群功能相反的CD4+T细胞的作用。方法免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞,加入ConA或PDB,和TF3-H4共同孵育12 h后收集细胞,流式细胞仪分析细胞表面早期活化标志CD69的表达。结果在ConA和PDB的作用下,两群细胞早期活化标志CD69的表达均升高。TF3-H4(20 mg.L-1)不能抑制PKC激动剂PDB激活的CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,却能抑制ConA激活的CD4+CD25-效应性T细胞CD69表达;同时,TF3-H4也能明显抑制ConA激活的CD4+CD25+调节性T细胞的CD69表达。结论茶黄素衍生物TF3-H4可能经由TCR活化途径的上游抑制CD4+CD25-效应性T细胞活化;TF3-H4对CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞早期活化的抑制作用,可能是该类化合物发挥抗炎、抗肿瘤作用的机制之一。

TGF-β对T细胞发育分化的影响与运动性免疫抑制

运动员长期从事大强度的运动训练,会发生强烈的运动性免疫抑制现象,表现在运动员免疫功能显著降低,细胞免疫和体液免疫之间的平衡产生明显的漂移或极化,不仅直接影响运动员的运动能力和比赛成绩,而且会影响其运动寿命和身体健康。运动训练影响机体的免疫功能表现在免疫细胞（尤其淋巴细胞）数量、活性及功能的变化。

丙泊酚与七氟醚麻醉对围手术期患者外周血辅助性T淋巴细胞分化的对比研究

目的:探讨丙泊酚与七氟醚麻醉下辅助性T淋巴细胞(helper T lymphocytes,Th)分化的差异性。方法:选择2010年10月—2015年1月择期行腰椎间盘突出症手术患者60例,随机分为丙泊酚全凭静脉麻醉组(丙泊酚麻醉组)和七氟醚吸入麻醉组(七氟醚麻醉组),各30例。所有患者行无创血压、心率、脉搏血氧饱和度、呼气末二氧化碳分压监测。于麻醉前、麻醉后、手术开始前、手术开始后、术后1d采集外周静脉血,检测各组患者T细胞对γ-干扰素、白细胞介素4的表达,测定外周静脉血中Th1细胞与Th2细胞的百分率,及Th1细胞与Th2细胞的比值。结果:2组患者无创血压、心率、脉搏血氧饱和度、呼气末二氧化碳分压差异均无统计学意义。丙泊酚麻醉组患者术后1d外周静脉血Th1细胞百分率明显高于七氟醚麻醉组,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者不同时间点外周静脉血Th2细胞百分率差异均无统计学意义;丙泊酚麻醉组患者术后1d外周静脉血Th1细胞与Th2细胞比值高于七氟醚麻醉组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:与七氟醚相比,丙泊酚能够促进Th细胞向Th1细胞分化,对围手术期患者具有一定的免疫保护作用。

雷帕霉素对诱导nave小鼠效应性T细胞转化为调节性T细胞的影响

目的研究雷帕霉素对诱导naive小鼠效应性T细胞（Teff）体外转化为调节性T细胞（Treg）的影响。方法取6-8周龄C57BL/6小鼠的脾及淋巴结,分离提纯叉头蛋白3（FoxP3）阴性的Teff,分为与成熟树突状细胞（mDC）、B细胞和抗CD3抗体（Anti-CD3）共培养3组,前两组6 d后收获细胞,Anti-CD3组4 d后收获细胞。每组设对照组与实验组,对照组未加入雷帕霉素,实验组加入雷帕霉素,使其浓度分别为1、10、50、100 nmol/L,流式细胞仪检测收获细胞中FoxP3阳性的Treg比率。结果FoxP3阳性的Treg细胞比率：在mDC组中对照组为0.01%,实验组分别为0.39%、0.47%、0.34%、0.26%;在B细胞组中对照组为0.01%,实验组分别为5.56%、5.89%、7.15%、4.72%;在Anti-CD3组中对照组为0.93%,实验组分别为1.35%、1.07%、1.02%、1.19%。mDC组及Anti-CD3组各实验组与对照组相比差异无显著性,B细胞组中各实验组与对照组相比差异具有显著性（P〈0.01）。结论在体外以B细胞作为抗原呈递细胞,雷帕霉素能够诱导naive小鼠Teff转化为FoxP3阳性的Treg。

帕瑞昔布钠超前镇痛对乳腺癌根治术患者外周血辅助性T细胞分化的影响

目的:观察帕瑞昔布钠超前镇痛对乳腺癌根治术患者外周血辅助性T细胞(T helper cells,Th)分化的影响。方法:将50例行乳腺癌根治术的患者随机分为帕瑞昔布钠组(P组)和对照组(C组),P组于术前1 h静脉注射帕瑞昔布钠40 mg(用0.9%氯化钠液稀释至5 mL,下同),术后距首次给药12 h再次静脉注射帕瑞昔布钠40 mg;C组于同时间点静脉注射等剂量的0.9%氯化钠液。术后2组用芬太尼行患者自控静脉镇痛(patient-controlled intravenous analgesia,PCIA)。采用流式细胞术检测2组患者麻醉前(T0)、术后2 h(T1)、术后12 h(T2)、术后24 h(T3)、术后48 h(T4)外周血中Th1、Th2细胞内γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素4(interleukin-4,IL-4)的水平,用CD3+CD8-IFN-γ+标识Th1细胞,用CD3+CD8-IL-4+标识Th2细胞,通过计算IFN-γ+/IL-4+值来得出Thl/Th2值。比较2组患者各时间点的视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)、舒适度(Bruggemann comfort scale,BCS)、芬太尼用量。结果:P组T2、T3、T4时间点VAS评分明显低于C组(P<0.05);P组T1、T2、T3时间点舒适度评分明显高于C组(P<0.05);P组T2、T3时间点芬太尼用量明显少于C组(P<0.05)。与T0比较,2组患者T2、T3、T4时间点Th1/Th2值均明显下降(P<0.05);P组T2、T3、T4时间点Th1/Th2值均高于C组(P<0.05)。结论:乳腺癌根治术后患者Th1/Th2值降低;帕瑞昔布钠超前镇痛辅以芬太尼进行术后PCIA能够抑制Th1/Th2平衡向Th2型偏移。

辅助性T细胞亚群的多样性与分化的可塑性研究

通过选择性表达和分泌专一的转录因子和细胞因子,CD4＋Th细胞分为不同的亚群,分别行使不同的免疫生物学功能。不同的CD4＋Th细胞亚群对于维持宿主的防御功能和机体正常的免疫调节有重要作用。

流式细胞术检测肉桂活性成分对Tfh细胞的影响

滤泡辅助性T细胞(Follicular helper CD4 T cells,Tfh)是重要的CD4^(+)T淋巴细胞亚群之一,与多种疾病的发生和发展密切相关,其参与疾病发生的机制尚有待深入研究。该研究将分离小鼠脾脏细胞,应用贝克曼Moflo分选系统分选出CD4^(+)T淋巴细胞。使用细胞因子刺激Tfh细胞分化并检测其分化比例,同时采用流式细胞术检测和分析肉桂活性成分对滤泡辅助性T细胞分化的影响。结果表明,贝克曼Moflo XDP分选系统可以显著提高CD4^(+)T淋巴细胞的纯度,且肉桂活性成分可以显著抑制Tfh细胞分化。为新药在Tfh细胞的开发提供一定实验基础,并且为研发肉桂作为新的增强免疫疗效药物提供可靠的实验依据。

调节性T细胞通过膜结合转化生长因子β1影响效应性T细胞凋亡

目的观察CD4＋CD25＋T细胞（效应性T细胞，Teff）凋亡情况，进-步探讨调节性T细胞（Treg）对Teff凋亡的影响及其作用机制。方法免疫磁珠法分选Balb／c小鼠脾脏的Tregs与Teff，流式细胞仪检测Tregs与抗CD3／CD28抗体刺激的Treg膜表面转化生长因子（TGF）-β1的表达、PCR技术检测其基因表达水平。将Treg与Teff共培养，然后采用抗TGF—β抗体拮抗，观察Tefr的凋亡率、线粒体膜电位变化以及胞内Smad2、磷酸化Smad2（P—Smad2）、Bim、Bcl-2蛋白表达水平。结果抗CD3／CD28抗体刺激后TregTGF—β1＋及其基因表达均明显上调（P均〈0．01）；与Treg共培养的Teff凋亡率升高（P〈0．01）、线粒体膜电位降低（P〈0．01）；胞内P—Smad2（P〈0．01）、Bim（P〈0．05）蛋白表达量增加、Bcl-2蛋白表达量降低（P〈0．01）。加入抗TGF—β1抗体后Teff凋亡率显著降低（P〈0．01）、线粒体膜电位升高（P〈0．01）、胞内P-Smad2（P〈0．01）、Bim（P〈0．05）蛋白表达水平降低、Bcl-2蛋白表达量则升高（P〈0．01），Smad2蛋白表达水平在三组之间均未见明显差异（P〉0．05）。结论调节性T细胞可通过膜结合型TGF-β1促进效应性T细胞的凋亡。

异位性皮炎患者外周血Th2细胞分化偏态性分析

为了探讨异位性皮炎患者外周血辅助性T(Th)细胞亚群分化表达及其在异位性皮炎发病过程中的作用,采用三色流式细胞术测定20例异位性皮炎患者和30例健康对照者外周血趋化性细胞因子受体CCR4+CD4+T和CXCR3+CD4+T细胞的表达水平。异位性皮炎患者外周血CCR4+CD4+T细胞水平明显高于对照组(P<0.01);异位性皮炎患者外周血CCR4/CXCR3比率明显高于对照组(P<0.01);异位性皮炎患者外周血CXCR3+CD4+T细胞的水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。异位性皮炎患者外周血T细胞亚群分化失衡,Th2细胞和异位性皮炎发生、发展有关。

辅助性T细胞功能分化的分子机制

TH1和TH2 的失衡是哮喘的重要特征。探讨同一前体细胞向不同亚型分化的分子机制有助于阐明哮喘炎症反应形成的本质。胞外信号分子、胞内信号传递、核转录因子三个环节调控着TH 细胞的分化 ,其中转录因子T bet、GATA3、C Maf,胞外信号分子IL 12、IL 4和胞内信号分子STAT4。

利妥昔单抗治疗对特发性膜性肾病患者外周血T淋巴细胞亚群影响的研究进展

膜性肾病(MN)是一组以肾小球基底膜上皮细胞下免疫复合物沉积伴基底膜弥漫增厚为病理特征的疾病,其中70%~80%因病因不明被称为特发性膜性肾病(IMN)。近年来,随着抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体、Ⅰ型血小板反应蛋白7A域(THSD7A)等自身抗体在IMN患者外周血中被发现,B淋巴细胞在IMN中的致病作用已逐渐引起重视。利妥昔单抗(RTX)是一种人/鼠嵌合型单抗,可耗竭CD20+B淋巴细胞,以减少自身抗体的产生。T淋巴细胞与B淋巴细胞在功能上相辅相成,IMN患者已被证实亦存在T淋巴细胞亚群数量和功能紊乱,故纠正T淋巴细胞亚群失衡可能是RTX发挥作用的另一重要机制。本文综述利妥昔单抗对IMN患者外周血T淋巴细胞的影响及其临床意义,以期为多靶点治疗IMN提供理论依据。

效应性T细胞促进MN9D细胞的凋亡

目的:利用多巴胺合成细胞系MN9D,观察活化的效应性T(effector T,Teff)细胞对MN9D细胞活力和凋亡的影响,探讨Teff细胞对MN9D细胞的损伤作用。方法:免疫磁珠分选获得Teff细胞,经体外活化后,与MN9D细胞株共培养,然后用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测MN9D细胞的活性;TUNEL和Hoechst染色观察MN9D细胞的凋亡及细胞数目的变化;Western Blot法检测MN9D细胞中活化的caspase-3和caspase-9的表达。结果 :经体外活化的Teff细胞与MN9D细胞共培养后,MN9D细胞的活性明显降低,MN9D细胞的数目显著降低、凋亡率明显增加;且MN9D细胞中促凋亡酶caspase-3和caspase-9的活化水平升高。结论:活化的Teff细胞促进了MN9D细胞的凋亡,具有损伤作用。

儿童EB病毒T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病诊治进展

EB病毒(EBV)T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病(Epstein-Barr virus positive T/NK cell lymphoproliferative diseases,EBV+T/NK-LPDs)是一组T细胞和(或)NK细胞感染EBV后克隆性增殖、浸润组织器官的异质性疾病。在儿童及青少年中,EBV+T/NK-LPDs与恶性肿瘤相关的疾病主要包括T/NK细胞型慢性活动性EBV感染(chronic active EBV infection,CAEBV)和儿童系统性EBV阳性T细胞淋巴瘤(systemic EBV-positive T-cell lymphoma of childhood,STLC)。

表观遗传学调控滤泡辅助性T细胞分化的研究进展

滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)定位于淋巴滤泡的辅助性T细胞亚群,主要功能为辅助B细胞参与体液免疫应答,对免疫球蛋白的产生有着重要作用。表观遗传学主要研究在基因的核苷酸序列不发生改变的情况下,基因表达的可遗传性变化,是免疫细胞的分化调控机制之一。研究发现Tfh细胞的分化具有可塑性,本文主要综述了表观遗传学调控在Tfh细胞分化方面的研究进展。

辅助性T细胞亚群分化机制及临床意义研究进展

辅助性T淋巴细胞是机体免疫系统的重要组成部分,由来源于胸腺的CD4^+纯真T细胞,在不同强度抗原刺激、不同细胞因子以及其他一些内环境因素的共同作用下,进一步分化出的多个功能亚群的混合体。这些功能亚群根据其激活所需的特异性转录因子、表达的不同细胞因子和归巢受体而定义。它们在机体感染、炎症反应、肿瘤、自身免疫性疾病以及过敏性疾病的发生发展中发挥重要的调节作用。本文将就辅助性T淋巴细胞亚群的分化机制、临床意义做一综述。

IL-10联合二甲双胍对CD8^(+)T细胞记忆分化及抗肿瘤效应的影响

目的:探讨IL-10联合二甲双胍对CD8^(+)T细胞记忆分化及抗肿瘤效应的影响。方法:采用密度梯度离心法和细胞免疫磁珠分选法从健康供者外周血中获得CD8^(+)T细胞。将CD8^(+)T细胞分为对照组(未处理)、IL-10处理组(100μg/L人IL-10重组蛋白处理)、二甲双胍处理组(200μmol/L二甲双胍处理)和联合处理组(100μg/L人IL-10重组蛋白和200μmol/L二甲双胍共同处理)。分组处理7 d后,采用流式细胞术分别检测各组CD8^(+)T细胞记忆亚群比例、表面标志物、功能性细胞因子及增殖标志物的表达水平。结果:IL-10和二甲双胍均可有效增加CD8^(+)T细胞向干细胞样及中心记忆性CD8^(+)T细胞的分化(P均<0.05),促进表面激活型标志CD28、CD69表达(P均<0.05),并有效提高功能性细胞因子IFN-γ、颗粒酶B和增殖标志物Ki-67的表达(P均<0.05);两者联合具有一定的协同作用(P<0.05)。结论:IL-10联合二甲双胍能够促进CD8^(+)T细胞记忆分化,同时增强其抗肿瘤效应。