TNF-α缺失减少抗李斯特菌CD8~＋T细胞应答并增加效应记忆细胞形成

目的探讨TNF-α在李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)感染模型中对CD8^+T细胞应答的影响。方法采用尾静脉注射重组OVA的李斯特菌株感染TNF-α基因敲除(TNF-αKO)小鼠和野生型(WT)对照小鼠建立系统性感染模型。运用流式细胞术检测不同时相点TNF-αKO小鼠和WT小鼠中内源性和外源性特异性CD8+T细胞应答反应情况。采用体内细胞杀伤实验和检测细菌滴度的方法评估TNF-αKO小鼠和WT小鼠感染后记忆期CD8^+T细胞的效应功能。接着分析记忆期和增殖期CD8^+T细胞的KLRG-1和CD127等分子的表达变化。结果与WT对照小鼠相比,TNF-αKO小鼠中CD8^+T细胞应答减少,记忆细胞增多;TNF-αKO小鼠中记忆CD8^+T细胞的效应功能正常;TNF-αKO小鼠记忆CD8^+T细胞中含有更多比例的KLRG-1+CD127-CD62L-效应记忆细胞,而第7天TNF-αKO小鼠特异性CD8^+T细胞的KLRG-1和CD127的表达与对照组无明显差别。结论TNF-αKO小鼠初次应答降低,形成更多记忆细胞,且效应记忆细胞增多。其机制与早期效应CD8^+T细胞分化无关,可能是TNF-αKO小鼠更多的KLRG-1+CD127-细胞在应答收缩期存活所致。

吉兰-巴雷综合征患者外周血记忆性T细胞和记忆性B细胞亚群的变化及其临床意义

目的探讨吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barrésyndrome,GBS)患者外周血记忆性T细胞和记忆性B细胞亚群的变化及其临床意义。方法选取2018年6月至2020年12月于徐州医科大学附属医院神经内科住院的16例GBS患者作为研究组,并选取同期16名来院的健康体检者作为对照组。流式细胞术检测两组入选者的外周血T细胞亚群,包括CD4^(+)初始T细胞(naive T cells,TN)、CD4^(+)中央记忆性T细胞(central memory T cells,TCM)、CD4^(+)效应记忆性T细胞(effector memory T cells,TEM)和CD4^(+)终末分化效应记忆性T细胞(terminally differentiated effector memory T cells,TEMRA)及记忆性B细胞、浆母细胞的占比并分析其临床价值。结果与对照组相比,研究组患者的CD4^(+)TN及CD8^(+)TN均明显下降(P<0.05),CD4^(+)TEM及CD8^(+)TEM均明显升高(P<0.05),TCM及TEMRA在CD4和CD8上的比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,研究组记忆性B细胞比例明显升高(P<0.05),两组患者间浆母细胞占比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。GBS患者外周血CD4^(+)TEM及CD8^(+)TEM占比与Hughes残疾评分、脑脊液蛋白、脑脊液免疫球蛋白G及记忆性B细胞占比均呈正相关(P<0.05)。结论GBS患者存在记忆性T细胞和记忆性B细胞亚群免疫紊乱,CD4^(+)TEM细胞、CD8^(+)TEM细胞及记忆性B细胞占比升高,这很可能是GBS发病过程中重要的外周免疫机制。

维生素C对CD4＋效应记忆性T细胞体外扩增的影响

目的:探讨小分子药物维生素C(VC)对CD4+效应记忆性T细胞(TEM)体外扩增的影响从而改善过继免疫治疗的效果。方法:体外分离正常人的外周血CD4+T淋巴细胞,将细胞分为2组(实验组和对照组)进行细胞培养。实验组加入VC后,通过细胞计数仪和流式细胞仪对2组细胞中TEM的扩增情况进行检测。结果:(1)在CD4+T细胞体外扩增实验中,VC对CD4+T细胞的总数无显著影响。(2)VC使TEM在CD4+T细胞中的比例显著升高,100 mg/L为扩增的最佳浓度。(3)在CD4+T细胞扩增的第10天检测其中TEM的细胞数量,对照组TEM的数量为(1.22±0.15)×106,实验组TEM的数量为(3.56±0.35)×106,两者的差异有统计学意义(P<0.01)。结论:VC可有效地促进CD4+TEM的体外扩增,为过继免疫治疗提供简单、安全及有效的体外扩增方法。

中央记忆T细胞和效应记忆T细胞亚群在肝癌患者外周血中分布特点分析

目的研究肝癌患者外周血中CD45RO^+记忆T细胞(memory T cells,Tm)表面标志CD45RO、CD62L和CCR7的表达,以了解CD45RO^+CD62L~^+CCR7^+T细胞(中央型记忆T细胞,central memory T cells,TCM)和CD45RO^+CD62L^-CCR7^-T细胞(效应型记忆T细胞,effector memory T cells,TEM)亚群在肝癌患者外周血中的分布特点。方法获取正常人健康志愿者(正常对照组)28例和2011年8月至2013年8月的初诊慢性乙型病毒性肝炎患者(乙肝对照组)28例以及同期患有乙肝的肝癌患者(乙肝肝癌组)30例的外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMC)。用多色流式细胞仪检测技术(polychromatic flow cytometry,PFC)检测外周血PBMC中记忆T淋巴细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD45RO、CD62L、CCR7的表达情况。结果乙肝肝癌组外周血PBMC中,CD4^+T淋巴细胞和CD8^+T淋巴细胞分别占外周血PBMC的比例显著高于乙肝对照组(28.15±12.32 VS 11.56±5.78,29.33±15.54 VS 13.11±6.64)(P<0.001,P=0.019);而较正常对照组无明显差异。乙肝肝癌组外周血PBMC的T淋巴细胞中CD4^+T_(EM)占CD4^+T记忆淋巴细胞比例显著高于乙肝对照组、正常对照组(93.78±5.63 VS 75.82±19.74,93.78±5.63 VS 68.25±15.65)(P=0.001,P=0.018),而CD4+TCM则显著低于乙肝对照组、正常对照组(0.55±1.02 VS 4.87±6.28,0.55±1.02VS 4.16±3.49)(P均小于<0.001)。三组的CD4^+TEM记忆细胞占外周血PBMC中CD4^+T记忆淋巴细胞的比例显著高于CD4^+T_(CM)记忆细胞占外周血PBMC中CD4^+T记忆淋巴细胞的比例(91.78±5.63 VS 0.55±1.02,75.82±19.74 VS 4.87±6.28,68.25±15.65 VS 4.16±3.49)(P值均小于0.001)。乙肝肝癌组外周血PBMC的T淋巴细胞中CD8^+TEM和CD8^+TCM占CD8^+T记忆淋巴细胞比例与乙肝对照组、正常对照组相比,差异均无显著意义。三组的CD8+TEM记忆细胞占外周血PBMC中CD8^+T记忆淋巴细胞的比例显著高于CD8^+TCM记忆细胞占外周血PBMC中CD8^+T记忆淋巴细胞的比例(80.12±13.56 VS 3.25±2.47,79.21±11.34 VS 4.44±7.19,73.33±16.88 VS 2.66±3.10)(P值均小于0.001)。结论在乙肝肝癌组、乙肝对照组和正常对照组中,无论是CD4^+T记忆淋巴细胞,还是CD8^+T记忆淋巴细胞,均以TEM占绝大多数,而TCM比例很小。乙肝肝癌组中,CD4^+TEM显著高于乙肝对照组和正常对照组,CD4^+TCM显著低于乙肝对照组和正常对照组,而CD8^+TEM和CD8^+TCM则与乙肝对照组、正常对照组均无明显差异。

白介素-12及白介素-23对胃癌组织中CD4^+记忆T细胞的影响

目的:探讨胃癌组织中IL-12、IL-23对CD4+记忆T细胞(CD4+Tm)的影响。方法:ELISA检测TNM不同期胃癌组织匀浆中IL-12、IL-23含量;不连续密度梯度离心法分离胃癌组织中的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL),流式细胞仪检测TIL中CD4+Tm及其亚群TEM和TCM在不同期胃癌组织中的分布状况。结果:TNM-Ⅰ、Ⅱ期胃癌组织中IL-12含量差别不明显,但均显著高于TNM-Ⅲ、TNM-Ⅳ期;TNM-Ⅰ期胃癌组织中IL-23的含量高于TNM-Ⅱ、TNM-Ⅲ、TNM-Ⅳ期。胃癌TIL中CD4+Tm及TEM比例随TNM分期增加逐渐降低,而TCM比例逐渐升高。结论:胃癌组织中IL-12、IL-23含量的变化与胃癌TNM分期有关,且影响胃癌TIL中CD4+记忆T细胞及其亚群TCM和TEM的分布。

初始CD4^+T和记忆性Th1细胞在淋巴器官的分布和IFN-γ的表达

目的比较观察抗原特异性初始CD4+T细胞和效应性/记忆性Th1细胞在体内外IFN-γ的产生和在淋巴组织的分布。方法将标记相同数量的OVA-抗原受体转基因小鼠(OVA-TCR-Tg)的初始CD4+T细胞和Th1细胞被动输给正常小鼠后,利用流式细胞仪在单个细胞水平上观察初始CD4+T细胞和Th1细胞在体内淋巴组织器官的分布和IFN-γ的产生。结果体外经抗原刺激后,大于98%的Th1细胞和4.1%的初始CD4+T细胞表达IFN-γ。当被动输入机体后,初始CD4+T细胞主要分布于淋巴结,而Th1细胞主要分布于脾脏。当再次受到抗原的刺激后,记忆性Th1细胞能迅速产生IFN-γ。初始CD4+T细胞与效应/记忆Th1细胞在淋巴结和脾脏不同的分布,可能与CD62L的表达有关。结论本研究在我们以前研究的基础上进一步探讨了CD4+T细胞和记忆性Th1细胞的差异。此结果为进一步揭示初始CD4+T细胞与Th1细胞的差异提供了实验和理论依据。

过敏性紫癜患儿外周血CD4^+记忆T细胞亚群表达的意义

目的探讨CD4+记忆T细胞亚群在过敏性紫癜(HSP)免疫发病机制中的意义。方法收集初发HSP患儿25例,并将其分为HSP无肾脏损害组(N-HSPN组)15例和紫癜性肾炎组(HSPN组)10例,另选取10例本院健康体检儿童作为正常对照组,抽取患儿急性期、恢复期外周血,用梯度密度离心法分离新鲜单个核细胞(PBMC),用流式细胞仪检测PBMC中CD4+效应记忆T细胞(CD4+Tem)、CD4+中央记忆T细胞(CD4+Tcm)水平。结果 HSP患儿急性期外周血CD4+T细胞水平、CD4+/CD8+比例均较正常组降低(均<0.05),而CD8+T细胞数水平与正常组比较差异无统计学意义(>0.05)。急性期N-HSPN和HSPN组患儿外周血CD4+Tem水平均明显高于正常对照组(均<0.05),而N-HSPN和HSPN组比较差异无统计学意义(>0.05);N-HSPN和HSPN患儿CD4+Tcm的表达与正常组比较差异均无统计学意义(均>0.05)。恢复期NHSPN和HSPN组HSP患儿外周血CD4+Tem水平仍明显升高,与急性期比较差异无统计学意义(均>0.05),但仍然明显高于正常组(均<0.05)。结论 HSP患儿存在CD4+T细胞的异常,CD4+Tem的异常升高可能是HSP发生的一个重要因素;CD4+Tem可能只是参与了HSP血管炎的免疫损伤,而与是否导致HSPN的病理过程无关,不能作为检测HSP肾脏损害的有效指标。

记忆性T细胞和HIV疫苗

HIV疫苗被认为是预防艾滋病的最有效工具。以前研制的HIV疫苗,大多数能诱导机体产生记忆性B淋巴细胞和持久的抗体,但并不能保护机体免受HIV的感染。记忆性T细胞的研究给研究HIV疫苗提供了新思路。本文着重描述了记忆性T细胞的分群、分化、形成和维持的一般规律及其在HIV疫苗研制中的意义。

慢性乙型肝炎患者外周血中记忆T细胞亚群分布研究

目的了解慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中CD4+、CD8+T细胞的分布,以及相应记忆细胞亚群的表达水平,为研究记忆T淋巴细胞在抗乙肝病毒感染中的作用提供基础。方法采用多色流式细胞仪检测技术,检测慢性乙肝病例和健康对照外周血单个核细胞(PBMC)中T淋巴细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD45RO、CD62L、CCR7的表达情况。结果乙肝组CD4+、CD8+T淋巴细胞分别占外周血PBMC的(11.56±5.78)%、(13.11±6.64)%,均低于对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。乙肝组和对照组外周血PBMC中,CD4+TEM的表达水平高于CD4+TCM,CD8+TEM的表达水平高于CD8+TCM,差异均有统计学意义(P值均<0.05);CD4+TEM、CD4+TCM所占CD4+Tm的比例,差异均无统计学意义(P值均>0.05);CD8+TEM、CD8+TCM所占CD8+Tm的比例差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论慢性乙肝病例外周血PBMC中,CD4+、CD8+T淋巴细胞均减少。对照组和乙肝组外周血PBMC中,CD4+、CD8+T记忆淋巴细胞均以TEM为主。

记忆性T细胞的产生与维持

适应性免疫应答导致记忆反应的形成。记忆反应的强弱程度和持续时间取决于所形成的记忆性T细胞的性质和数量。本文就记忆性T细胞产生过程中的调控因素、记忆性T细胞亚群的特点及其相互关系、记忆性T细胞维持的细胞学基础做一简要综述。

CD_4^+记忆T细胞与血管炎

系统性血管炎是血管壁的炎症导致组织缺血坏死为特征的一组疾病,临床常见过敏性紫癜、川崎病、抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎、系统性红斑狼疮等,它们的发病机制复杂,T淋巴细胞亚群介导的免疫损伤也一直为人们关注的热点。CD4+记忆T细胞(CD4+Tm)是细胞表型为CD45RO+CD45RA-的T细胞亚群,它们的产生与分化受多种因素的影响,其功能异常与血管炎的免疫病理过程密切相关。

CD4＋CD25＋调节性T细胞与衰老关系的研究进展

衰老伴随着免疫系统多种功能和表型的改变，使机体免疫力下降。CD4＋CD25＋调节性T细胞址体内具有免疫抑制活性的一群细胞，它在维持自身内环境稳定、抑制移植排斥反应以及防止自身免疫忤疾病的发生等方面发挥重要的保护作用，同时也是免疫力衰退的重要因素之一。调节性T细胞在机体衰老过程中发生变化，并发挥重要的作用。现将衰老过程中调节性T细胞的数量、功能、表型等的变化，以及调节性T细胞与老年相关性疾病的关系进行综述。

萸连丸对溃疡性结肠炎小鼠记忆性T细胞CD4/CD8亚群平衡的调节作用

目的明确萸连丸对小鼠溃疡性结肠炎中枢及效应型记忆性T细胞CD4/CD8亚群平衡的调节作用。方法将40只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组(Normal),模型组(DSS),萸连丸组(DSS+YLP),和美沙拉嗪组(DSS+5-ASA),每组10只。除正常组外,采用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立溃疡性结肠炎小鼠模型,给药14天后麻醉处死小鼠,通过体质量、结肠质量、结肠质量指数、结肠长度、单位结肠质量指数及结肠镜下损伤评分评价其疗效;用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结肠组织上清液中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-12(IL-12),白细胞介素-21(IL-21)等促炎因子的表达水平;流式细胞术检测外周血中中枢记忆性T细胞(T_(CM))与效应记忆性T细胞(T_(EM))及其CD4/CD8亚群水平;用蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测各组小鼠结肠黏膜中Janus激酶/信号转导和转录活化因子(janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)信号通路相关蛋白,包括人酪氨酸激酶蛋白1(JAK1)、JAK3、细胞因子信号传导抑制剂1(SOCS-1)、信号转导及转录激活蛋白5(STAT5)、磷酸化信号转导及转录激活蛋白5(p-STAT5)的表达水平。结果经萸连丸治疗后小鼠体重及结肠长度较模型组升高,同时结肠质量、结肠质量指数和结肠镜下病理损伤评分亦显著降低(P<0.01),结肠粘膜明显修复;IL-1β、IL-12及IL-21水平显著降低(P<0.01);T_(CM)及CD8^(+)T_(EM)的比率显著升高(P<0.01),CD4^(+)T_(CM)、CD8^(+)T_(CM)、T_(EM)、CD4^(+)T_(EM)的比率显著降低(P<0.05,P<0.01);JAK1、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01);JAK3、SOCS-1、p-STAT5/STAT5蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。结论萸连丸可能通过抑制JAK/STAT信号通路的激活,调节T_(CM)、T_(EM)水平及其CD4/CD8亚群平衡从而治疗实验性溃疡性结肠炎。

中央型和效应型记忆T细胞亚群在肝癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中的分布

目的研究中央型记忆T细胞（TCM）和效应型记忆T细胞（TEM）在肝癌肿瘤浸润淋巴细胞中的分布特点。方法通过流式细胞仪检测肝脏组织浸润淋巴细胞CD3、CIM、CD8、CIM5RO、CD62L、CCR7表面标志的表达情况。结果乙肝肝癌组、乙肝癌旁组及对照组CD4＋TCM亚群占CD4＋CD45RO＋Tm的比例分别为（0．25±0．17）％、（0．29±0．22）％、（0．37±0．33）％，差异无显著统计学意义（P〉0．05）。CD4＋TEM亚群占CD4＋CD45RO＋Tm的比例分别为（89．7±7．4）％、（98．7±0．6）％、（95．5±3．7）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。其中乙肝肝癌组明显低于乙肝癌旁组及对照组。乙肝肝癌组、乙肝癌旁组及对照组CD8＋TCM亚群占CD8＋CD45RO＋Tm的比例分别为（0．41±0．31）％、（0．55±0．60）％、（0．26±0．25）％，其中乙肝癌旁组显著高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。CD8＋TEM亚群占CD8＋CIM5RO＋Tm的比例分别为（92．4±4．3）％、（98．1±0．7）％、（98．2±1．1）％，乙肝肝癌组显著低于乙肝癌旁组及对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论原发性肝癌患者肿瘤浸润CD45RO＋Tm中，无论是CD4^＋还是CD8＋，主要以TEM亚群为主，TCM亚群所占比例很小。CD4＋TEM亚群及CD8＋TEM亚群占CIM5RO＋Tm的比例在肝癌组织中显著小于非肝癌组织，而CD4^＋TCM亚群及CD8^＋TCM亚群占CIM5RO＋Tm的比例在肝癌组织及非肝癌组织中无差别。

记忆性T细胞亚类的研究进展

T细胞免疫对于调节抗体的生成及清除受感染的细胞均发挥相当重要的作用。记忆性T细胞的特点是在初次免疫反应完成后仍能长期存活,并形成不同的亚类,每一亚类细胞又分为中枢记忆性T细胞和效应记忆性T细胞。这些记忆性T细胞在宿主体内长期存在,当宿主受到再次感染时可提供有效的保护作用。本文结合最新研究进展,对主要的记忆性T细胞(如CD8+和CD4+记忆性细胞)类型及其功能作一综述。

胃癌患者外周血记忆性T细胞的临床意义

[目的]研究胃癌患者外周血记忆性T细胞(TM)的分布特征,分析TM与临床病理特征的关系,探讨其在胃癌治疗中的临床应用价值。[方法]选取2018年7月^2018年12月在我院住院的胃癌患者32例为病例组,同期健康志愿者23例作为对照组。应用流式细胞术检测胃癌患者外周血TM的分布比例,并比较其与对照组的差异,分析TM与临床病理特征的关系。[结果]病例组患者外周血CD8^+T细胞比例明显低于健康对照组,CD8^+中枢性记忆性T细胞(TCM)比例、CD8^+效应性记忆性T细胞(TEM)/CD8^+T细胞值、CD8^+TCM/CD8^+T细胞值均明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CD4^+T细胞比例与肿瘤TNM分期呈负相关,CD4^+TCM比例与组织分化程度呈正相关,CD4^+TEM比例与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、浸润深度呈负相关。[结论]胃癌患者外周血TM可用于评价患者的免疫状态,间接判断患者预后;且记忆性T细胞亚群在胃癌的过继细胞免疫治疗中可能有重要的临床应用价值。

慢性乙型肝炎患者外周血CD8^+T细胞亚群分布和PD-1表达特征研究

目的分析慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血中CD8+T细胞及其亚群表面程序性死亡受体-1(PD-1)表达的变化特征及其临床关联性。方法用流式细胞术检测14例CHB患者和15例健康对照者外周血中CD8+T细胞及其亚群初始T细胞(TN)、中央记忆T细胞(TCM)、效应记忆T细胞(TEM)、终末效应记忆T细胞(TEMRA)的频数及细胞表面PD-1的表达水平,同时收集患者一般资料、生化指标和乙型肝炎病毒(HBV)病毒学指标等临床资料。使用SAS 9.1统计软件分析数据,应用Mann-Whitney U test分析组间差异,应用Spearman秩相关进行相关性分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果与健康对照组相比,CHB患者的TEMRA亚群在CD8+T细胞中的频数显著降低(P=0.012),总CD8+T细胞(P=0.018)及其TEM亚群(P=0.004)表面PD-1的表达水平显著上升。相关性研究显示,CD8+TEM细胞表面PD-1的表达水平与HBV DNA载量呈显著正相关(r=0.554,P=0.040)。结论 CHB患者外周血中PD-1阳性的CD8+TEM频数升高,且与外周血中HBV DNA载量呈正相关,提示慢性乙型肝炎患者机体内HBV复制的活跃性可能与外周血中CD8+T细胞的活化状态,特别是其TEM亚群上PD-1的高表达关联。

Vγ9Vδ2T细胞亚群的建立与功能分析

目的:建立γδT细胞的一个亚群(Vγ9Vδ2 T细胞亚群),分析其免疫学相关功能。方法:对健康人外周血单个核细胞进行磁珠分选,获得富含γδT细胞的细胞群,用异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)、白细胞介素2(IL-2)刺激γδT细胞增殖。通过流式细胞仪检测分析Vγ9Vδ2 T细胞(γδT细胞主要亚群)在IPP刺激后的分化趋势及表面标志,分离出效应型Vγ9Vδ2 T细胞,对其抗原递呈功能进行研究,并分析不同表型的Vγ9Vδ2 T细胞的分泌格局。结果:Vγ9Vδ2 T细胞在IPP作用下可被激活,不断增殖并分化为效应记忆型(TEM、CD45RA-CD27-γδT),该细胞群高表达HLA-DR和CD80/86等分子,呈现出专职性抗原递呈细胞的表型特征;此群效应记忆型Vγ9Vδ2 T细胞能有效递呈PPD、TT等可溶性抗原给CD4+T细胞,具有与B细胞相当的抗原递呈功能。实验还发现,不同表型的Vγ9Vδ2 T细胞具有不同的细胞因子分泌格局,新鲜分离的健康人外周血Vγ9Vδ2 T细胞(非效应型)以分泌IFN-γ为主,而效应记忆型Vγ9Vδ2 T细胞在产生IFN-γ的同时能分泌IL-17。结论:Vγ9Vδ2 T细胞亚群能在IPP的作用下激活、增殖,并分化为具有抗原递呈细胞功能的效应记忆型细胞,其分泌IFN-γ的同时可分泌IL-17。

Vγ9Vδ2T细胞亚群与类风湿关节炎发病关联性分析

目的分析RA患者外周血和关节滑膜液中γδT细胞亚群及其与RA发病的关联性。方法采用流式细胞仪检测健康人外周血、RA患者外周血PBMCs及滑膜液单个核细胞（SFMCs）中Vγ9Vδ2T细胞亚群；ELISA法检测在OA患者滑膜液、RA患者血清和滑膜液、RA患者PBMCs和SFMCs培养上清中IFN-γ／和IL-17的表达水平；氚-胸腺嘧啶核苷（3H—TdR）掺入法检测PBMCs和SFMCs对抗原肽的应答能力，以及18T细胞的抗原递呈能力。采用t检验、单因素方差分析进行统计学分析。结果RA患者外周血中效应记忆型Vγ9Vδ2T细胞占叫8T细胞的（48．2±17．6）％，并有（42．8±17．7）％和（2．2±1．5）％的v19v82T细胞表面分别表达HLA—DR4和CD86分子；关节滑液中效应记忆型Vγ9Vδ2T细胞占18T细胞的（62．9±7．9）％，并有（85．8±1．7）％和（17．3±2．0）％的Vγ9Vδ2T细胞表面分别表达HIJA—DR4和CD86分子。RA患者的PBMCs和SFMCs具有分泌IFN-γ和IL-17炎症因子的特征，且较健康人PBMCs相比，对抗原肽具有更强的免疫反应。同时实验结果还表明RA患者的叮γδT细胞的抗原递呈能力较B细胞强。结论γδT细胞在RA的发病过程中不仅通过分泌细胞因子与炎症细胞协同作用参与炎症反应，而且通过特异性免疫应答的机制发挥树突状细胞样的作用，不断将病毒肽和自身抗原肽递呈给CD4＋T细胞。

IL-15基因佐剂对DNA初始-重组痘苗病毒加强免疫效果的影响

目的比较IL-15在DNA疫苗初始和重组天坛痘苗病毒加强免疫阶段对免疫原性的影响。方法应用PCR方法构建重组片段I8R-pE/L-IL-15-GFP-G1L,通过同源重组将IL-15基因插入到表达HIV-1CN54Gag,Pol和Env基因的重组天坛艾滋病疫苗rTV的基因组中。HIV DNA疫苗在0、3、6周与质粒pIL-15共免疫BALB/c小鼠,或仅使用DNA疫苗,rTV和rTV-IL-15在12周分别进行加强免疫。末次免疫后1、4周应用ICS和ELISPOT方法检测小鼠脾淋巴细胞中HIV特异性细胞免疫。末次免疫后1、4周和12周ELISA方法检测小鼠血清中Gp120特异性抗体。结果 IL-15基因正确插入重组天坛艾滋病疫苗rTV基因组中,成功构建了重组病毒rTV-IL-15。各组免疫小鼠均诱导出HIV特异性细胞和体液免疫。尽管各组诱导的HIV特异性CD8+T细胞免疫反应差异无统计学意义,但加强免疫后4周,DNA-IL-15/rTV-IL-15组分泌IFN-γ、TNF-α以及IFN-γ/TNF-α双因子的CD8+T效应记忆细胞百分比均值显著高于DNA-IL15/rTV组(P<0.05),分别为0.86%,0.37%和0.31%。DNA/rTV-IL-15组的gp120抗体滴度在加强免疫后1周即达到1∶40 381,显著高于DNA-IL-15/rTV组和DNA-IL-15/rTV-IL-15组(P=0.000 1,P=0.020 5),且抗体滴度持续至12周未见明显下降。而DNA-IL-15/rTV组和DNA-IL-15/rTV-IL-15组的抗体滴度则从加强免疫1周后逐渐上升,在12周达到高峰(1∶11 143,1∶16 889),DNA-IL-15/rTV组4周和12周的抗体滴度显著高于1周(P=0.009,P=0.012)。结论在初始和加强免疫阶段使用IL-15佐剂可以提高CD8+T效应记忆细胞应答水平。