基于敏感生物标志物的苍耳子生品与炒品肝毒性实验研究

目的:应用敏感生物标志物探讨苍耳子生品与炒品之间的肝毒性变化规律。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、苍耳子生品组、苍耳子炒品组(16.70g(原生药)/kg),每组6只,每日灌胃1次,连续7d。经腹主动脉取血后检测血清肝毒性传统生物标志物及敏感生物标志物,检测肝组织miRNA-122的表达,光镜下观察肝脏病理形态学变化。结果:苍耳子生品16.70g/kg组、苍耳子炒品16.70g/kg组大鼠血清肝毒性传统生物标志物ALT、AST、ALP、TBIL均未出现明显异常;两组动物血清肝毒性敏感生物标志物GLDH、ArgⅠ、α-GST出现不同程度的升高但无差异;肝组织中miRNA-122表达均较对照组显著下降;光镜下未观察到苍耳子生品组与苍耳子炒品组肝组织出现明显病理形态学异常。结论:GLDH、ArgⅠ、α-GST、miRNA-122均可作为研究苍耳子肝毒性变化规律的敏感生物标志物,其中miRNA-122以其特异性和灵敏度极高的优势具有较高的应用价值。

28d苯染毒小鼠血清生物标志物的研究

目的观察28 d苯染毒小鼠血清蛋白的表达变化,寻找其敏感生物标志物。方法选择4~5周龄雄性无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级昆明小鼠40只,将其随机分为苯中毒组和对照组,苯中毒组30只,给予苯皮下注射,1次/d,剂量为每千克体质量150 mg(即150 mg/kg),每周5 d,连续4周。对照组10只,按同样方法给予玉米油。染毒期间记录小鼠皮毛外形、精神、饮食状况和体质量变化。实验结束时采集血液,进行血常规检测、血清生化肝功能指标检测、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)、载脂蛋白A1(APOA1)及补体C3的检测;收集小鼠肝脏组织并称重,计算肝脏脏器系数,采用HE染色进行病理分析。结果与对照组比较,苯中毒组实验期间小鼠皮毛外形、精神、饮食状况未见明显异常,染毒4周后,苯中毒组小鼠体质量低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);苯中毒组血红蛋白以及白细胞计数、红细胞计数和血小板计数均低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);苯中毒组的总蛋白、白蛋白、球蛋白、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶与对照组比较,差异无统计学意义(P> 0.05);肝脏组织病理学检查显示,两组小鼠均有不同程度的肝细胞糖原蓄积;苯中毒组APOA1水平高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论皮下注射是建立苯染毒小鼠模型的简单可行的方法。在苯中毒小鼠模型中,APOA1蛋白表达上调,可能是潜在的苯中毒敏感生物标志物。

苍耳子致小鼠肝损伤^(1)H-NMR代谢组学分析

目的应用核磁共振氢谱(^(1)H-NMR)代谢组学技术分析苍耳子醇提物和水提物致小鼠肝脏中内源性代谢产物的变化,探索苍耳子致肝损伤的可能作用机制,寻找肝毒性的敏感标志物。方法将56只小鼠随机分为7组,分别为空白组(0.9%氯化钠溶液),苍耳子醇提物高、中、低剂量组(给药剂量分别为生药6、3、1.5 g/kg),苍耳子水提物高、中、低剂量组(给药剂量分别为生药6、3、1.5 g/kg),连续灌胃给药20 d,记录小鼠体质量,对肝脏和血清进行生化指标检测,并对肝脏组织进行病理形态学检查。运用^(1)H-NMR对肝脏样本进行分析,结合多变量统计分析筛选差异代谢物并进行代谢通路和疾病富集分析,利用Venn分析寻找给药组共同的差异代谢物,即潜在的肝毒性敏感标志物。结果除苍耳子醇提物低剂量给药组外其余各组均产生不同程度肝脏病变。代谢组学结果显示筛选出的差异代谢物主要被富集到氨基酸代谢、糖代谢、脂代谢等通路,共筛选出糖原(glycogen)、尿苷(uridine)、苯丙氨酸(phenylalanine)、马尿酸(hippurate)、乙酸(acetate)、丝氨酸(serine)6种敏感代谢标志物。结论苍耳子可能主要通过影响氨基酸、糖类、脂质等代谢对肝脏造成损伤,糖原、尿苷、苯丙氨酸、马尿酸、乙酸、丝氨酸可作为潜在的肝毒性敏感生物标志物。