益气活血法对脑出血大鼠脑内凝血酶敏感蛋白-1及其受体CD36表达的影响

目的通过观察益气活血法对脑出血大鼠脑内损伤区凝血酶敏感蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)及其受体CD36表达的影响,初步探讨益气活血法治疗脑出血的机制。方法将155只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组和活血组;用Ⅶ型胶原酶诱导脑出血大鼠模型,再对相应的组分别灌服补阳还五汤及该方的益气药组和活血药组,在不同的时间点取脑组织并用免疫印迹(Western-blotting)分析鼠脑TSP-1及CD36的表达。结果正常组和假手术组不同时间点TSP-1和CD36表达无明显变化。模型组TSP-1在脑出血后4 d达高峰,CD36分别在脑出血后4、28 d达高峰。益气活血组1 d TSP-1表达低于模型组(P<0.01),4 d TSP-1和CD36表达均低于模型组(P<0.01),28 d CD36表达高于模型组(P<0.01)。结论益气活血法有可能通过影响脑出血后损伤区TSP-1及其受体CD36的表达,降低其对血管新生的抑制作用,促进新生血管成形、成熟和脑组织修复。

颅脑损伤患者血浆凝血酶敏感蛋白-1、血浆组织因子水平与迟发性颅内血肿的相关性

目的分析颅脑损伤患者血浆凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)、血浆组织因子(TF)水平,探讨二者与迟发性颅内血肿的关系。方法回顾性分析2017年8月至2019年8月本院收治的行开颅手术治疗的重型颅脑损伤患者115例,根据术后颅脑CT复查是否发生迟发性颅内血肿分为非迟发性颅内血肿组85例,迟发性颅内血肿组30例。收集比较患者一般资料;采用ELISA法测定并比较受试者血浆TSP-1、TF水平;采用COX分析影响颅脑损伤患者发生迟发性颅内血肿的危险因素;绘制ROC曲线分析血浆TSP-1、TF水平对颅脑损伤患者发生迟发性颅内血肿的诊断价值。结果非迟发性颅内血肿组与迟发性颅内血肿组创伤至手术时间、舒张压、GCS评分、颅骨骨折发生比例、基底池受压发生比例、血浆凝血酶时间水平比较差异有统计学意义(均P<0.05)。迟发性颅内血肿组患者血浆TSP-1、TF水平明显高于非迟发性颅内血肿组(均P<0.05)。创伤至手术时间久、颅骨骨折、TSP-1及TF水平高(HR=4.027,HR=1.708,HR=2.356,HR=2.267;均P<0.05)是颅脑损伤患者发生迟发性颅内血肿的独立危险因素。血浆TSP-1、TF水平单独检测及二者联合检测诊断颅脑损伤患者术后发生迟发性颅内血肿ROC曲线下面积分别为0.752、0.837、0.897。结论血浆TSP-1、TF水平异常增高可能与颅脑损伤患者术后发生迟发性颅内血肿有关,且二者联合检测对患者发生迟发性颅内血肿有较高诊断价值。

血浆凝血酶敏感蛋白-1在肾间质纤维化中的表达

目的:观察不同时间点血浆凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)在蛋白超负荷肾病大鼠中的表达,分析其与肾小管间质纤维化的关系。方法:45只雄性SD大鼠右肾切除后,随机分成牛血清蛋白(BSA)组和对照组,BSA组大鼠予以腹腔注射牛血清白蛋白,对照组注射生理盐水。分别在第1,5,9周末,检测血常规及生化指标,各时相尿蛋白定量;肾组织行光镜、免疫荧光及电镜检查。采用免疫印迹法检测血浆TSP-1蛋白表达。分析血浆TSP-1表达与肾小管间质病理损害积分之间的相关性。结果:BSA组大鼠24 h尿蛋白定量和肾功能均较对照组有明显差异;肾小管间质病理积分和肾小球硬化指数明显增高;IgG荧光强度明显高于对照组;与对照组比较,BSA组大鼠血浆TSP-1蛋白均明显增高。BSA组血浆TSP-1的蛋白表达水平与肾小管间质病理积分呈正相关(r=0.836,P<0.01)。结论:血浆TSP-1与肾间质纤维化呈正相关,血浆TSP-1可能是临床判断肾间质纤维化程度的重要指标。

恶性血液病患者骨髓微血管密度与凝血酶敏感蛋白-1的表达及意义

目的探讨恶性血液病患者骨髓微血管密度(MVD)和凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)的表达及意义。方法选择恶性血液病患者48例(观察组),其中急性白血病(AL)23例、慢性粒细胞白血病(CML)10例、多发性骨髓瘤(MM)15例;正常对照组20例。利用SP免疫组化法检测观察组治疗前后及对照组骨髓组织标本中MVD、TSP-1的表达情况。结果①恶性血液病在不同疾病的同一阶段比较,骨髓MVD、TSP-1表达均无统计学差异(P均>0.05)。②初诊组与未缓解组的骨髓MVD值高于对照组及缓解组(P均<0.01),TSP-1阳性率低于对照组及缓解组(P均<0.01)。③相关性分析显示,MVD、TSP-1与年龄、性别、血细胞计数等无显著相关性(P>0.05)。结论 MVD是分析恶性血液病病情的独立指标,TSP-1是血管生成负性调节分子,联合检测有助于更准确地评价病情及疗效,指导临床治疗。

凝血酶敏感蛋白-1对人肝癌细胞株HCCLM3生长增殖的作用

目的:研究凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)及受体CD36、CD47对人肝癌细胞株HCCLM3生长及细胞周期的作用,初步探讨TSP-1可能的作用途径。方法:根据处理因素将细胞株分为:TSP-1组(加入TSP-1蛋白,40mg/L)、空白对照组、CD36阻断组、CD47阻断组。阻断组细胞接种后先加入5mg/L对应的单抗,待单抗与细胞充分结合后再加入40mg/LTSP-1。用四唑盐比色法(MTT)、流式细胞术和ELISA法分别观察TSP-1及CD36、CD47单抗对细胞生长、细胞周期、增殖指数(PI)及TGF-β1分泌的影响。结果:TSP-1组、CD36阻断组、CD47阻断组细胞生长受抑,且CD36阻断组的细胞生长抑制率低于CD47阻断组。TSP-1组G0/G1期细胞数增加,S期和G2/M期细胞数减少,与对照组和CD36阻断组相比差异有统计学意义。对照组、TSP-1组、CD36阻断组及CD47阻断组PI分别为:(42.70±2.09)%、(27.85±0.71)%、(38.04±1.35)%和(31.78±0.43)%,各组之间两两比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。各组TGF-β1的含量差异无统计学意义。结论:TSP-1主要通过与受体CD36的结合对人肝癌细胞株HCCLM3的生长增殖有抑制作用。TSP-1对HCCLM3的抑制可能不是通过调节TGF-β1的分泌而发挥作用。

脓毒症肝损伤中凝血酶敏感蛋白-1的变化及意义

目的探讨凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）在脓毒症肝损伤中的变化及意义。方法雄性Balb／c小鼠通过盲肠结扎穿刺（CLP）成功制作脓毒症模型，分为对照组，CLP后0．5、1、3、6、12、24h七个组（每组5只），观察腹腔及肝脏大体解剖，检测血清转氨酶含量、肝脏TSP-1mRNA及TSP—l蛋白表达水平，从而探讨脓毒症时肝脏TSP-1的变化规律。结果与对照组相比，制作脓毒症模型后6h肝脏TSP-1mRNA及TSP—l蛋白表达明显增高，同时伴有肝脏炎症加重、血清ALT和AST含量明显升高，在制模24h观察期内TSP-1维持于较高水平。结论脓毒症时肝脏TSP-1表达增加，TSP-1作为炎症介质可能参与介导脓毒症肝损伤发生、发展。

凝血酶敏感蛋白-1介导脓毒症肝损伤中ERK通路的作用研究

目的观察凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)介导的脓毒症肝损伤中细胞外调节激酶(ERK)通路的作用.方法选用雄性Balb/c小鼠随机分为4组(n=5):假手术(sham)组、CLP对照组、阴性片段对照组、有效片段组.利用流体尾静脉注射法予以TSP-1特异性的siRNA片段进行RNA干扰(RNA)i,下调肝脏TSP-1表达,采用盲肠结扎穿刺(CLP)制作脓毒症模型,检测肝脏TSP-1表达变化,检测血清转氨酶和TNF-α含量,检测肝脏ERK蛋白表达变化.结果有效片段组中肝脏TSP-1的表达明显下调,验证RNAi有效.与假手术组相比,CLP组和阴性对照组转氨酶ALT和AST含量、TNF-α含量明显升高(P<0.05),磷酸化ERK蛋白表达明显降低(P<0.05),予以有效片段进行RNAi后,ALT和AST含量、TNF-α含量明显降低(P<0.05),磷酸化ERK蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 TSP-1参与介导脓毒症肝损伤,导致血清转氨酶及TNF-α含量升高,ERK通路的抑制是其分子机制之一.

雄激素受体、凝血酶敏感蛋白-1与前列腺良、恶性疾病血管生成的关系

目的:探讨雄激素受体(Androgen receptor,AR)、凝血酶敏感蛋白-1(Thrombosopndin-1,TSP-1)在良性前列腺增生(Benign prostatic hyperplasia,BPH)、前列腺癌(Prostate cancer,Pca)中的表达及与血管生成的关系。方法:良性前列腺增生20例;前列腺癌60例,前列腺癌组中根据Gleason分级,Gleason评分<7为低评分组前列腺癌(35例),Gleason评分≥7为高评分组前列腺癌(25例);无骨转移者47例,有骨转移者13例。运用免疫组化二步法检测各组中AR、TSP-1的表达水平及微血管密度(Microvesel density,MVD)。结果:BPH组中AR、TSP-1的表达高于Pca组(P<0.01),MVD值低于Pca组(P<0.01);在Pca中低评分组AR、TSP-1的表达高于高评分组(P<0.01),MVD值低于高评分组(P<0.01);无骨转移组AR、TSP-1的表达高于骨转移组(P<0.01),MVD值低于有远处转移组(P<0.01)。AR、TSP-1阳性组的MVD值分别小于阴性组的MVD值(P<0.01)。TSP-1与AR呈正相关(r=0.722,P<0.05)。结论:AR、TSP-1在前列腺癌中均为低表达,且与肿瘤的Gleason评分及有无骨转移密切相关。前列腺癌中AR突变使TSP-1减少,从而促进血管生成。

凝血酶敏感蛋白-1与多囊卵巢综合征血管生成的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是最常见的妇科内分泌疾病,严重影响女性的生殖健康。PCOS的病理生理机制目前尚未明确,因此对于PCOS的治疗仍存在争议。PCOS患者常出现卵巢血流改变和血管生成异常,而这些改变可能与PCOS患者排卵率降低、激素异常以及卵巢多囊样改变相关。作为一种抗血管生成因子,凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)在PCOS患者血清中低表达,且与PCOS卵巢血管异常生成有关。因此,以TSP-1为治疗靶点,恢复卵巢正常的血管生成可改善PCOS患者的卵泡发育和排卵率,为PCOS的治疗提供新思路。

凝血酶敏感蛋白-1与肿瘤相互关系的研究新进展

凝血酶敏感蛋白-1是一种多功能的细胞外基质糖蛋白,参与多种重要的生物过程,在细胞黏附、迁移、增殖、凋亡、血管生成、肿瘤细胞转移、炎症和血栓形成中起重要作用。它的编码基因是潜在的抑癌基因,基因启动子的高甲基化与肿瘤的发生密切相关。深入分析凝血酶敏感蛋白-1异常表达与肿瘤的相互关系为肿瘤的早期诊断和预后评价提供新的依据。

凝血酶敏感蛋白-1活化TGF-β_1在糖尿病肾病中作用的实验研究

目的测定糖尿病肾病中活性TGF-β1的水平,研究阻断TSP-1介导的TGF-β1活化能否延缓糖尿病肾病的纤维化进程。方法采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病模型,将30只SD大鼠随机分为3组,正常对照组(NC组)、糖尿病肾病组(DM组)、多肽干预组(DT组,给予人工合成多肽LSKL 100μg/d),每组10只。每隔4周,测定24小时尿蛋白、血肌酐;16周取肾标本,行病理组织检查,ELISA法检测肾组织中活性及总体TGF-β1的水平,免疫组化检测TSP-1及TGF-β1的表达。结果 DT组24小时尿蛋白、血肌酐明显低于DM组(P<0.01),肾组织病理改变也明显较轻;DM组、DT组与NC组相比,肾组织总体TGF-β1、活性TGF-β1水平明显增高;DT组与DM组相比,总体TGF-β1含量差别不明显(P>0.05),但活性TGF-β1含量明显下降,差别显著(P<0.05)。NC组肾组织TSP-l无阳性表达、TGF-β1少量表达,而DT组与DM组两者的阳性表达面积显著增强;DT组与DM组TSP-l、TGF-β1阳性表达差别不明显(P>0.05)。结论在糖尿病肾病发病进程中,TSP-1是活化TGF-β1的重要因子,阻断TSP-1介导的TGF-β1活化,能延缓肾纤维化进程。

凝血酶敏感蛋白-1及其受体CD36在支气管肺发育不良患儿中的表达及临床意义

目的:探讨凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)及其受体CD36在支气管肺发育不良(BPD)患儿血清、支气管肺泡灌洗液中的表达及临床意义。方法:采用ELISA法检测45例BPD患儿与32例非BPD新生儿血清、支气管肺泡灌洗液的TSP-1及CD36表达水平并进行比较,同时对BPD患儿的TSP-1及CD36表达进行相关性分析。结果:BPD患儿血清、支气管肺泡灌洗液的TSP-1及CD36水平均高于正常儿童(P<0.05);BPD患儿血清、支气管肺泡灌洗液的TSP-1与CD36表达均呈正相关性关系(P<0.05)。结论:TSP-1及其受体CD36可能参与了新生儿BPD的发病过程并起协同致病作用,具体机制有待进一步研究。

P53、凝血酶敏感蛋白-1与膀胱移行细胞癌中血管生成的关系

目的:检测人膀胱移行细胞癌组织中P53蛋白、凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)表达及微血管密度(MVD),探讨P53蛋白、TSP-1与膀胱移行细胞癌临床病理特征之间的关系。方法:以免疫组化法检测膀胱移行细胞癌50例以及正常膀胱组织10例石蜡标本中P53蛋白、TSP-1表达及MVD。结果:膀胱移行细胞癌组织中,P53蛋白表达及MVD随病理分级的升高和临床分期的进展而增高(P<0.05),TSP-1表达随病理分级的升高和临床分期的进展而降低(P<0.05);TSP-1表达与P53表达呈负相关(r=-0.4223,P<0.01),MVD在TSP-1阳性表达组明显低于TSP-1阴性表达组(P<0.01)。结论:膀胱移行细胞癌组织中P53蛋白过表达及TSP-1低表达与肿瘤血管生成及侵袭进展密切相关。

银屑病患者血小板凝血酶敏感蛋白-1及CD36分子的表达

目的 探讨血小板活化与银屑病发病的关系。方法 采用流式细胞仪对银屑病患者血小板凝血酶敏感蛋白 1(thrombospondin 1,TSP 1)及CD3 6分子的表达进行研究。结果 患者血小板TSP 1及CD3 6表达量较对照组显著增高 (P均 <0 .0 1)。进行期患者血小板TSP 1及CD3 6表达量明显高于静止期患者 (P均 <0 .0 1)。患者血小板TSP 1及CD3 6表达量与病程无关 (P均 >0 .0 5 )。结论 血小板活化在银屑病发病过程中具有重要作用。

凝血酶敏感蛋白-1在液压冲击损伤体外培养大鼠海马神经细胞中的表达及意义

目的探讨凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)在液压冲击损伤大鼠体外培养海马神经细胞中的表达。方法建立体外原代培养神经细胞液压冲击损伤模型,采用甲苯胺蓝染色观察神经细胞损伤程度,免疫细胞化学染色和Western blot技术检测神经细胞中TSP-1的表达水平。结果液压冲击后,甲苯胺蓝染色显示,损伤组部分神经细胞胞体浓缩,细胞核固缩,呈深蓝色,多为坏死型损伤细胞。免疫细胞化学染色显示,对照组神经细胞内有一定量的TSP-1表达,损伤组神经细胞内TSP-1表达增多,阳性细胞数目增多。Western blot结果显示,对照组和损伤组光密度值分别为0.937±0.194与2.318±0.495,损伤组神经细胞TSP-1蛋白表达显著强于对照组(P<0.01)。结论体外培养大鼠海马神经细胞中TSP-1高表达可能在液压冲击损伤过程中起重要作用。

大肠腺癌组织中凝血酶敏感蛋白-1和微血管密度检测

目的:探讨大肠腺癌组织中凝血酶敏感蛋白 1 (thrombospondin 1, TSP- 1)的表达及其临床意义。方法:利用免疫组织化学SP法检测 45例大肠腺癌组织中TSP- 1的表达及微血管密度 (microvesseldensity, MVD),并以15例正常大肠黏膜组织为对照。结果:正常大肠黏膜组织中未见TSP- 1阳性表达;大肠腺癌组织中TSP- 1的阳性率为 42. 2% (19 /45)。TSP- 1阳性组MVD为(14. 37±4. 86 ),低于TSP- 1阴性组的 ( 29. 80±6. 35 ) (t=2. 735,P<0. 01);TSP- 1的阳性表达率随肿瘤Dukes分期的增加而降低(χ2 =4. 62,P<0. 05),与MVD呈负相关 (r=-0. 783,P<0. 01)。结论:TSP 1的阳性表达抑制了大肠癌新生血管的形成,从而阻止其发展及转移。

凝血酶敏感蛋白-1对脓毒症肝损伤影响的实验研究

目的利用RNA干扰(RNA)i方法探讨凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)对脓毒症肝损伤的影响及机制.方法选用雄性Balb/c小鼠随机分为4组(n=10):假手术组(sham)、CLP对照组、阴性片段对照组、有效片段组.利用流体尾静脉注射法予以TSP-1特异性的siRNA片段进行RNAi,下调肝脏TSP-1表达,采用盲肠结扎穿刺(CLP)制作脓毒症模型,检测血清转氨酶、血清TNF-α含量,观察肝细胞凋亡,检测肝脏JNK蛋白表达变化.结果与假手术组相比,CLP组和阴性对照组转氨酶ALT和AST含量、TNF-α含量、凋亡细胞比例明显升高(P<0.05),磷酸化JNK蛋白表达明显降低(P<0.05),予以有效片段进行RNAi后,ALT和AST含量、TNF-α含量、凋亡细胞比例明显降低(P<0.05),磷酸化JNK蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 TSP-1参与介导脓毒症肝损伤,导致血清转氨酶及血清TNF-α含量升高、肝细胞凋亡增加,其机制与JNK通路的抑制有关.

凝血酶敏感蛋白-1对胆囊癌细胞凋亡的实验研究

目的研究凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)对胆囊癌细胞GBC-SD凋亡的体外诱导作用及其可能的作用机制。方法采用流式细胞术检测TSP-1及其受体CD36,CD47作用后HCCLM3的凋亡率,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)Caspase-3 mRNA表达的变化。结果TSP-1组凋亡率(10.56±0.63)%显著高于对照组(3.17±0.33)%和CD47阻断组(4.05±0.27)%(P<0.01)。CD36阻断组(8.49±0.37)%高于对照组或CD47阻断组,低于TSP-1组,差异有统计学意义(P<0.01)。TSP-1组Caspase3 mRNA的表达TSP-1组(0.575±0.026)和CD36阻断组(0.583±0.023)显著高于对照组(0.336±0.031)和CD47阻断组(0.412±0.017),差异有统计学意义(P<0.01)。结论TSP-1在体外可诱导胆囊癌细胞GBC-SD的凋亡,TSP-1与受体CD47结合后上调Caspase3的表达可能是作用途径之一。

凝血酶敏感蛋白-1在慢性移植肾病大鼠肾组织中的表达及意义

目的:探讨大鼠肾组织凝血酶敏感蛋白-1的表达与慢性移植肾病的关系。方法:依照国际标准CAN实验大鼠模型,以F344大鼠作供者,Lewis大鼠作受者,行原位异体肾移植,建立大鼠CAN模型,作为CAN组。以Lewis大鼠做供、受体,行原位异体肾移植,作为对照组。16周后,观察两组大鼠肾功能、肾组织学改变;免疫组织化学法检测肾组织TSP-1及TGF-β1的表达。结果:与对照组比较,CAN组大鼠24h尿蛋白定量、血肌酐明显升高(P<0.01);根据Banff 97评分标准,对照组未见明显病理改变,而CAN组肾小球硬化率达24%以上,可见明显的肾小管萎缩、间质纤维化及严重的血管内膜纤维化,两组移植肾Banff评分结果差异显著(P<0.01);TSP-1在对照组弱表达,TGF-β1仅有少量表达,而CAN组TSP-1、TGF-β1阳性表达面积显著增强,可见于肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞、肾间质细胞。结论:TSP-1在CAN大鼠移植肾组织中高表达,可能作为TGF-β1的上游分子参与TGF-β1介导的慢性移植肾病变的发生发展。