敛肝熄风止颤方对帕金森病大鼠内质网应激相关蛋白的影响

目的观察敛肝熄风止颤方对6-羟基多巴胺(OHDA)诱导的帕金森病(PD)模型大鼠黑质内质网应激相关蛋白的影响,探讨其对PD模型大鼠的神经保护作用及可能机制。方法100只SD大鼠随机分为假手术组15只,造模组85只,采用6-OHDA脑左侧纹状体注射制备PD模型,将成模的60只大鼠随机分为模型组、敛肝熄风止颤方低、中、高剂量组(简称低、中、高剂量组)。低、中、高剂量组分别给予低、中、高剂量(0.36、0.72、1.44 g/kg)敛肝熄风止颤方水煎剂灌胃处理4 w,假手术组及模型组用等容积生理盐水灌胃。采用苏木素-伊红(HE)染色检测脑黑质神经细胞形态学,Western印迹检测脑黑质葡萄糖调节蛋白(GRP)78、钙蛋白酶(calpain)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-12相关蛋白表达情况;逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测脑黑质GRP78、calpain、Caspase-12基因表达。结果HE染色结果表明,假手术组脑黑质神经元数目较多,形态结构基本正常;模型组神经元形态与结构明显损伤,数量明显减少。与模型组比较,中、高剂量组神经细胞数目明显增多,形态结构改善。与假手术组比较,模型组及低剂量组脑黑质GRP78、calpain、Caspase-12蛋白及mRNA的表达均明显增高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,中、高剂量组GRP78、calpain、Caspase-12蛋白及mRNA的表达明显下降(P<0.05,P<0.01),而低剂量组仅calpain蛋白及mRNA的表达明显下降(P<0.05)。结论敛肝熄风止颤方可能通过抑制PD模型大鼠中脑黑质神经细胞内质网应激,对PD产生神经保护作用。

基于CaMkkβ/AMPK通路介导线粒体自噬探讨敛肝熄风止颤方的神经保护机制

目的:观察敛肝熄风止颤方对帕金森病(Parkinson Disease,PD)的影响,探讨其神经保护机制。方法:将60只SD大鼠分为假手术组10只,造模组50只,造模组大鼠接受PD模型制备,将成模的40只大鼠随机分为模型组10只、低剂量组(0.36 g/kg)10只、中剂量组(0.72 g/kg)及高剂量组(1.44 g/kg)10只,持续灌胃给药30 d,比较各组大鼠阿扑吗啡诱导旋转次数、圆筒实验,纹状体超微结构以及CaMkkβ、AMPK、p-AMPK水平的变化。结果:1)敛肝熄风止颤方可明显减少大鼠转圈以及肢体碰壁的次数,随着剂量增加次数减少更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。2)造模大鼠纹状体线粒体自噬现象减弱,敛肝熄风止颤方可明显促进脑组织线粒体自噬。3)中药干预后大鼠纹状体CaMkkβ、p-AMPK蛋白表达上调,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组较低剂量组上调明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:敛肝熄风止颤方对帕金森病具有神经保护作用,其机制之一可能是通过激活CaMkk/AMPK通路活性促进线粒体自噬有关。