罗格列酮对散发性老年痴呆模型大鼠认知功能的影响

目的观察罗格列酮对散发性老年痴呆(SAD)模型大鼠认知功能的影响。方法雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、模型组和罗格列酮组。罗格列酮组于造模前1周开始每天按2mg/kg剂量灌服,连续15d。侧脑室注射10%链脲佐菌素(STZ)制备SAD大鼠模型,Morris水迷宫试验测定大鼠的学习记忆能力。结果罗格列酮组第3d起能明显缩短定位航行试验中的逃避潜伏期,提高空间搜索试验中原平台位置的穿越次数。结论罗格列酮对SAD大鼠的认知功能具有明显的改善作用。

复方银思维对散发性老年痴呆模型鼠学习记忆能力及其海马神经元超微结构的影响

目的探讨中药复方银思维提取物对散发性老年性痴呆(SAD)模型大鼠空间学习记忆障碍的作用及其海马神经元超微形态学基础。方法采用侧脑室注射链脲佐菌素方法制备痴呆模型(ICV-SAD)。实验大鼠分为假手术组、模型组、多奈哌齐对照组及银思维小、中、大剂量组,共6组。于造模后第21天开始治疗,各治疗组给予相应的药物灌胃,模型组及假手术组给予等体积的双蒸水灌胃。治疗结束后,以Morris水迷宫进行大鼠空间学习记忆能力测试,测试完毕取动物海马组织,电镜观察海马神经元超微结构。结果定位航行试验第3天开始,多奈哌齐组,银思维小、中、大剂量组与模型组相比,平均逃避潜伏期及总游泳距离差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。空间探索试验中,与模型组相比各治疗组第1象限活动时间明显延长,其中以银思维中、大剂量组差异性最为显著(P<0.01)。假手术组大鼠海马神经元轴突内微管结构完好,排列整齐成束状。模型组大鼠海马神经元轴突内微管结构有明显的断裂或溶解现象,多数区域微管消失,排列紊乱。多奈哌齐组与银思维各治疗组大鼠海马神经元轴突内微管排列整齐,无明显断裂溶解,以银思维大、中剂量组效果最好。结论复方银思维能明显改善SAD模型大鼠的空间学习记忆障碍。其作用的超微形态学基础可能是保护海马神经元微管结构,防止轴突损伤。

洗心汤对散发性老年性痴呆大鼠脑内tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰的影响

目的研究洗心汤(人参、半夏、茯神、附子、菖蒲)对散发性老年性痴呆模型大鼠脑组织tau蛋白O位N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化修饰水平的影响。方法 SPF级健康雄性SD大鼠侧脑室注射链脲佐菌素(ICV-STZ),随机分为模型组、多奈哌齐对照组、洗心汤小、中、大剂量组并设假手术组作为对照。治疗结束及行为学测试之后,以免疫组化及蛋白印迹方法检测大鼠脑组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰水平。结果洗心汤能明显提高散发性老年性痴呆大鼠海马组织以琥珀酸化凝集素富集的O-GlcNAc糖基化蛋白质以及用RL2、CTD110.6检测的O-GlcNAc糖基化tau蛋白表达,组间差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。多奈哌齐对照组与散发性老年性痴呆模型组相比则无显著性差异(P>0.05)。结论洗心汤能够明显提高散发性老年性痴呆大鼠海马组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰水平,从而可能起到抑制tau蛋白在重要位点的过度磷酸化及其tau毒性,防止散发性老年性痴呆病理进展的作用。

载脂蛋白E基因多态性与散发性老年性痴呆病的关系

目的 :探讨载脂蛋白E(apoE)外显子 4和增强子元件基因多态性与散发性Alzheimer病 (AD)的关系。方法 :应用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP)技术分别检测apoE外显子 4和内含子 1内增强子元件 (IE1)基因型。结果 :(1)ApoE外显子 4基因多态性 :AD组ε3/ 4基因型频率 (0 381)和ε4等位基因频率 (0 2 2 6 )显著高于对照组 (P <0 0 5 )。 (2 )ApoEIE1基因多态性AD组G/G基因型频率 (0 5 95 )显著高于对照组 (P <0 0 5 )。 (3)有apoEε4个体患AD风险为无ε4个体的 3倍 ,比值比为 2 932 ,95 %可信区间 1 379～ 6 2 2 6 ;G/G基因型个体患AD风险为G/C、C/C个体的 2倍 ,比值比为 2 2 2 3 ,95 %可信区间 1 0 75～ 4 5 99;经统计分析发现apoEε4与IE1G/G呈非常显著性正相关 (P <0 0 1) ;排除apoEε4后发现IE1G/G与AD发病风险无关。结论 :ApoEε4等位基因是个体发生AD的危险因素 。

SORL1基因敲除小鼠可作为散发性阿尔茨海默病模型

目的通过与正常小鼠、淀粉样前体蛋白(APP)/PSE1双转基因小鼠行为学和病理学的比较,证明SORL1敲除小鼠可作为1种散发性阿尔茨海默病模型。方法 Crispr/Case9技术对小鼠受精卵SORL1基因进行编辑,通过检测小鼠DNA序列和Western blot检测SORL1等方法筛选和鉴定SORL1-/-小鼠。实验分为对照组、SORL1-/-组、APP/PSE1组。Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力、免疫组化和Western blot分别检测小鼠脑组织中APP、β淀粉样蛋白的表达。结果 SORL1-/-小鼠的DNA测序结果是两条染色体SORL1基因CAAT碱基缺失,而正常小鼠SORL1基因无CAAT碱基的缺失;Western blot检测SORL1-/-组小鼠脑组织无SOLR1表达。在Morris水迷宫的定位航行实验中,与对照组比较,SORL1-/-组和APP/PSE1组小鼠平均逃避潜伏期均明显延长(P<0.05),SORL1-/-组和APP/PSE1组比较,小鼠的平均逃避潜伏期差异无统计学意义(P>0.05);在Morris水迷宫的空间探索实验中,与对照组比较,SORL1-/-组和APP/PSE1组小鼠平均穿越平台次数均减少(P<0.05),SORL1-/-组和APP/PSE1组比较,小鼠平均穿越平台次数差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化和Western blot检测结果均显示SORL1-/-组小鼠脑组织中APP和Aβ表达明显较对照组多,SORL1-/-组与APP/PSE1组脑组织的APP和β淀粉样蛋白表达差异无统计学意义。结论SORL1-/-小鼠可出现APP/PSE1小鼠相似的行为学和病理学的改变,可作为一种散发性阿尔茨海默病模型。

老年性痴呆发病过程中内源性甲醛慢性损伤机制

通过原子力显微镜、荧光标记、Congo染色等方法,观察到低浓度甲醛可以诱导人类神经Tau蛋白错误折叠并形成具有细胞毒性的似球状聚积物;气相色谱和液相色谱等分析结果表明,神经鞘磷脂N-Acyl-4-sphingoine-1-phosphocholine(myelin)的过氧化能够产生甲醛分子;脂质过氧化的代谢产物丙二醛(malondialdehyde)在修饰蛋白质(BSA)的过程中,亦可产生甲醛分子.以上结果为内源性甲醛的产生揭示了新的途径.值得注意的是,在生理条件下,血液中内源性甲醛的水平维持在一个动态平衡((0.087±0.004)mmol/L),与体外培养神经细胞时甲醛产生毒性的浓度(～0.1mmol/L)十分接近,甚至已经达到产生一定细胞毒性的水平.随着机体的衰老,内源性甲醛的调节机能下降,在氧化应激等相关因素的诱导作用下,内源性甲醛浓度可能升高,对中枢神经系统一定部位的神经细胞造成慢性损伤,这可能是散发性老年痴呆发病的机制之一.

糖尿病和散发性老年性痴呆

糖尿病和散发性老年性痴呆（sporadic Alzheimer’s disease，SAD）是一组相互关联的复杂性疾病，均可出现认知功能和糖代谢异常。最近两年发现SAD患者与脑认知功能相关的区域如海马、内嗅区、杏仁核、额颞皮层神经元自行合成的胰岛素、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及其受体和受体后信号转导蛋白的表达均明显下降，因此SAD在胰岛素体系的改变同时具有1、2型糖尿病的特征。

甲醛诱导Tau蛋白形成“孔道样”聚集结构

尽管Lin等(University of California,Santa Barbara)就蛋白构象病中细胞死亡的机制提出了"非特异性淀粉样离子通道"(aspecific amyloid ion channels)学说,但到目前为止,尚未发现神经Tau蛋白能形成"孔道样"聚集结构,也未寻找到可以导致蛋白质形成"孔道样"聚集结构的诱导剂.依据本实验室提出的"散发性老年痴呆发生发展中的内源性甲醛慢性损伤"假说,采用一定浓度的甲醛与Tau蛋白进行温育,观察到甲醛可以明显诱导Tau蛋白分子聚集并形成淀粉样沉积物,同时也观察到了Tau蛋白"孔道样"聚集结构.上述结果为探索甲醛诱导Tau蛋白错误折叠形成的产物导致细胞代谢障碍和死亡的机制提供了新的研究思路.

铝神经毒性的线粒体机制

探讨铝致神经毒性的机制。铝具有神经毒性,其毒性作用的确切机制目前尚不清楚。本文综述了国内外关于铝致神经毒性的作用机制研究,提出了新的研究设想并阐述其研究意义。

洗心汤对SAD大鼠脑内tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰相关酶的影响

目的建立SAD动物模型,研究名方洗心汤对SAD模型大鼠脑组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰中蛋白质O位N-乙酰葡萄糖胺糖基转移酶(OGT)、和糖苷酶(O-GlcNAcase)的影响,探讨名方洗心汤防治SAD的可能作用机制。方法将SPF级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐对照组、名方洗心汤小、中、大剂量组。治疗结束及行为学测试之后,以免疫组化及蛋白印迹方法检测大鼠脑组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰过程中OGT、O-GlcNAcase酶表达的变化。结果名方洗心汤能显著提高SAD大鼠海马OGT的表达,降低O-GlcNAcase的表达,组间差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。多奈哌齐对照组与SAD模型组相比无显著性差异(P>0.05)。结论名方洗心汤能够调节O-GlcNAc糖基转移酶和糖苷酶的表达,从而提高SAD大鼠海马组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰水平。