SKA2基因通过EMT调节人骨肉瘤细胞侵袭和迁移

目的:探究SKA2基因在人骨肉瘤细胞中敲低表达后对细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)产生的影响,以及对细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法:培养人骨肉瘤saos-2和143B细胞系。再用设计合成SKA2基因的siRNA,将siRNA转染到saos-2和143B细胞中,构建SKA2低表达细胞。通过qRT-PCR法检测siRNA转染后SKA2以及EMT相关基因E-cadherin、Vimentin、Snail2在mRNA水平上的变化。Western blot方法检测siRNA转染后SKA2、E-cadherin、Vimentin、Snail2在蛋白水平的变化。Transwell实验检测SKA2基因差异表达后细胞侵袭能力变化,CCK-8实验检测增殖能力变化,划痕实验检测迁移能力变化。结果:siRNA转染建立了SKA2低表达的细胞,并且逆转了EMT过程,其相关基因Vimentin、Snail2表达减少,E-cadherin表达增加。siRNA转染后骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力受到抑制。结论:SKA2基因能通过EMT过程调节人骨肉瘤细胞侵袭和迁移,并且能影响细胞增殖情况。

巨噬细胞中毛状样蛋白1敲低减轻脂多糖诱导的炎症反应

目的初步探讨巨噬细胞中毛状样蛋白1(COTL1)敲低对炎症反应的影响及可能的分子机制。方法构建特异性敲低COTL1慢病毒载体,转染RAW264.7细胞,同时加脂多糖(LPS)刺激诱导炎症反应细胞模型。通过Western印迹和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别在蛋白和mRNA水平检测RAW264.7细胞中COTL1敲低效果;Western印迹检测LPS刺激RAW264.7细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)和核因子κB抑制因子激酶(IKK)的磷酸化水平;Western印迹检测LPS刺激COTL1敲低的RAW264.7细胞中ERK、JNK和IKK磷酸化水平的变化;一氧化氮(NO)检测试剂盒检测LPS诱导的一氧化氮的分泌;酶联免疫吸附法(ELISA)检测LPS刺激COTL1敲低的RAW264.7细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6的分泌。结果RAW264.7细胞中敲低COTL1可在一定程度上抵抗LPS等外界刺激导致的JNK、NF-κB炎症信号通路的激活,减少下游炎症细胞因子和活性氮的表达,继而减轻整体的炎症反应。结论巨噬细胞中COTL1敲低通过减少JNK、NF-κB通路的激活和下游炎症细胞因子的分泌、NO的生成继而减轻炎症反应。

抑制细丝蛋白A促进前列腺癌C4⁃2细胞迁移

目的探讨细丝蛋白A(FLNA)对前列腺癌细胞迁移的影响。方法设计并构建靶向FLNA的shRNA敲低质粒pSIH⁃H1⁃shFLNA。包装慢病毒后感染前列腺癌C4⁃2细胞,获得敲低FLNA的稳定细胞系C4⁃2⁃shFLNA。Western印迹检测前列腺癌C4⁃2细胞中FLNA蛋白表达和PC⁃1蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)检测FLNA以及PC⁃1 mRNA表达水平;Western印迹检测敲低FLNA对磷脂酰肌醇⁃3⁃激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响;划痕实验和Transwell实验检测C4⁃2细胞体外迁移能力。结果前列腺癌C4⁃2细胞敲低FLNA后FLNA mRNA和蛋白水平明显下调,PC⁃1 mRNA水平和蛋白水平表达增加,同时AKT磷酸化水平显著升高。划痕及Tran⁃swell实验证实在前列腺癌C4⁃2细胞中敲低FLNA后细胞迁移能力增强。结论前列腺癌细胞中敲低FLNA能够激活PI3K/AKT信号通路,促进前列腺癌细胞迁移。