敲减ARHGAP30基因对宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡的影响

目的探究敲减Rho鸟苷三磷酸酶激活蛋白30(Rho GTPase-activating protein 30,ARHGAP30)后,宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡的变化。方法设计特异性shARHGAP30引物并连接pLKO.1载体,转化到大肠杆菌感受态细胞中,再与慢病毒辅助质粒转入HEK-293T细胞,收集细胞上清获得的病毒过滤后感染Siha细胞,RT-qPCR和Western blot检测敲减效率,以及转染后Bax及Bcl-2的表达变化;CCK-8法检测敲减后细胞的增殖水平。结果成功构建敲减ARHGAP30基因的慢病毒质粒,并建立Siha稳转细胞,ARHGAP30在Siha细胞中的转录和翻译减少(P<0.01),Bax/Bcl-2明显降低(P<0.01),凋亡减少,细胞增殖水平升高(P<0.01)。结论ARHGAP30参与Siha细胞的增殖与凋亡,调控ARHGAP30基因或将干扰宫颈癌的发生和发展。

柴油机空转加速敲缸异响分析与改进

柴油机的高压缩比致使燃烧粗暴,形成强烈的燃烧敲缸声。对柴油机空转急加速过程中产生的敲缸异响进行详细的原因分析,发现对于自然吸气柴油机,在空负荷急加速的特殊工况下调整预喷提前角和轨压上升速率对改善燃烧敲击异响有较大的好处。当喷油提前角控制在5~11°CA范围,轨压上升速率控制在100 MPa/s时,燃烧噪声变得柔和,敲击异响消失,而预喷量对声品质改善贡献较小。

连续型向上敲出巴黎期权定价三层线性化差分格式及其收敛性分析

针对连续型向上敲出巴黎期权定价问题,给出了一个空间2阶精度的三层线性化差分格式,并利用能量分析法证明了所建差分格式的解存在唯一性和收敛性.数值实验表明,该差分格式是有效和可靠的。

工程机械变速箱敲齿异响故障诊断与分析

针对某工程机械发生变速箱严重异响的问题,开展振动、转速和压力测试及分析诊断。通过分析发动机和变速箱端转速信号,排除发动机转速波动引起变速箱敲齿异响的可能。结合振动和压力信号,以及传动系统各参数,诊断出变速箱发生敲齿异响的来源在于辅助油泵,因油泵处较大幅值的谐次压力,使传动系统产生特定频率下的较大扭转位移,该位移超变速箱空套齿轮的间隙,从而发生敲齿异响;通过加装液压缓冲蓄能器或更换不同品牌的辅助油泵两种方案开展实车验证可解决异响故障,证明诊断有效。分析工作的成果可为变速箱敲齿异响的诊断提供新的案例,对同类故障的诊断工作具有指导意义。

过表达溶质载体家族1成员5和敲低慢病毒载体构建及稳定转染RAW264.7细胞株

背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的:构建小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体,以建立稳定转染的RAW264.7细胞株,为深入探讨SLC1A5在炎症中的作用提供实验基础。方法:根据SLC1A5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应扩增该基因片段。将目的基因定向接入经Age I/Nhe I酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒,对阳性克隆进一步筛选后测序比对结果;pHelper1.0质粒载体、pHelper2.0质粒载体、目的质粒载体与293T细胞共同培养并转染,获得慢病毒原液进行包装和滴度测定;在此基础上,通过体外培养RAW264.7细胞,确定嘌呤霉素工作质量浓度;不同滴度的慢病毒分别与RAW264.7细胞共同培养,根据荧光强度确定转染效率;用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测稳定转染细胞株的SLC1A5基因和蛋白表达水平。结果与结论:(1)测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功;(2)过表达SLC1A5慢病毒的滴度为1×10~9 TU/mL,敲低SLC1A5慢病毒的滴度为3×10~9 TU/mL;(3)确定RAW264.7细胞嘌呤霉素工作质量浓度为3μg/mL;(4)过表达/敲低SLC1A5慢病毒转染RAW264.7细胞的最佳条件皆为HiTransG P转染增强液且感染复数值等于50;(5)过表达SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量明显上调,而敲低SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量显著下调。结果表明,成功构建了小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体并获得稳定转染的RAW264.7细胞株。

基于振动和缸压信号的柴油机敲缸故障识别

针对某型船用柴油机的敲缸故障,提出一种基于振动和缸压信号的联合分析诊断方法。结合上止点传感器的脉冲信号,将振动和缸压时域信号根据柴油机曲轴转角位置转换为曲轴转角域信号。根据在曲轴转角域出现敲缸特征信号时对应的振动加速度判断柴油机敲缸激励源频率范围,在此基础上通过带通滤波降噪提高敲缸特征信号的信噪比。基于四冲程柴油机工作周期与曲轴转角的关系对振动和缸压曲轴转角域信号提取故障特征。经柴油机多工况数据验证,本方法对识别柴油机敲缸故障简便、有效、准确性高。

抱罐车液压敲罐系统的设计及应用

抱罐车液压敲罐系统是一种大大提高价格效益的新型解决方案。该系统是由液压马达、液压油泵、敲打机构、敲打锤和控制阀组成的综合模块,其主要目的是实现垃圾车在装载、卸载时的自动敲打,从而提高效率和生产能力。通过液压马达的工作,驱动液压油泵,产生压力油,再通过控制阀将压力输送到敲打机构,驱动敲打锤敲打罐体,将垃圾紧实或脱落。此系统利用了抱罐车本身的液压系统,无需额外的动力来源,因此显著降低了能源消耗。此外,它通过简化操作过程,减少了工作人员的工作强度和潜在的工作风险。本研究表明,该系统能够有效地提高垃圾处理量和车辆的工作效率,同时减少了维修成本。因此,该液压敲罐系统不仅有助于提升抱罐车的工作效率,也对推动环保事业发展具有积极的推动作用。

基于敲入式施工工艺外墙保温锚栓抗拉承载力研究

为研究外墙保温锚栓抗拉承载力的影响因素,采用室内试验进行了敲入式、旋入式两种施工工艺抗拉承载力检测,并采用数值模拟方法进一步分析了敲入式锚栓的抗拉承载力性能。结果表明,采用敲入式施工工艺锚栓抗拉承载力明显大于旋入式施工工艺;敲入式锚栓抗拉承载力随着锚固深度的增大而增大,锚固深度最佳值为65 mm;锚栓抗拉能力随拔出位移的增加而增大,拔出位移为3.5 mm时抗拉能力达到极限值;锚栓抗拉承载力模拟值变化规律与试验值基本一致,试验值略大于模拟值。

充满智慧的教育创造——论《古庙敲钟录》的教育意义

陶行知的教育小说《古庙敲钟录》集中体现了陶行知的教育思想。1932年连载这部小说的《申报》和陶行知在影响力上相互成就,对陶行知教育思想的表达和传播起到了推动作用。从《古庙敲钟录》的文本载体来看,小说系统地反映了陶行知的教育思想,并借助诗歌更为广传;从接受理论上考察,《古庙敲钟录》在20世纪30年代促进了大量工学团实践的兴起,在如今也有着重要的参考指导和实践意义。

靶向敲降Linc00673对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的靶向敲降长链非编码RNA 00673(Linc00673)基因,观察胃癌MGC-803细胞增殖、凋亡、细胞周期等生物学行为变化,初步探讨其可能的作用机制。方法将重组慢病毒表达质粒Linc00673-sh1和对照空载体质粒PSIH1转染胃癌MGC-803细胞,建立Linc00673敲降的细胞系,MTT实验和克隆形成实验观察细胞的生长增殖、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡、qPCR方法检测增殖相关基因及部分microRNA的表达,Western印迹检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路关键分子的表达。结果建立了Linc00673敲降的MGC-803细胞系,靶向敲降Linc00673可抑制MGC-803细胞增殖和克隆形成,促进细胞凋亡、G2M期细胞比例增加(P<0.05,P<0.01);Linc00673敲降可对MGC-803细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白(MMP)7、p19及miR1254、miR 4491表达产生影响;免疫印迹结果显示,靶向敲降Linc00673不仅抑制PI3K/Akt信号通路关键分子pAKT、核因子(NF)-κB和B细胞淋巴瘤(Bcl)-2的表达,而且降低肿瘤相关β-catenin和Zeste增强子同源物(EZH)2蛋白表达。结论Linc00673可能通过PI3K/Akt信号通路影响胃癌细胞生物学行为。

基于改进自适应CEEMD的柴油机活塞敲缸异响诊断

提出一种改进的自适应互补集合经验模态分解(CEEMD)方法。针对目前互补集合模态分解方法中人为选择无法精准获取白噪声幅值系数、平均次数的问题,通过引入相关系数、相对均方根误差准则,自适应获取白噪声幅值系数和平均次数,使信号分解质量显著提高。采用CEEMD方法对4缸4冲程柴油机气缸振动信号进行分解,提取包含故障特征的分量,采用希尔伯特时频分析并结合试验,诊断出柴油机怠速异响是由于活塞在压缩行程敲缸导致的。

目标成分敲出/敲入技术及其在食品功能领域的应用进展

食品具有多种生物活性成分,并且有些成分间具有协同或拮抗作用,挖掘和发现有效活性成分是研究其健康功能的关键。目标成分敲出/敲入技术通过对比目标成分敲出/敲入前后食品功能的变化,从而可以高效研究目标成分对食品功能的贡献。中药研究中常将两种及以上活性成分有机组合,可以发挥更好的功能效果,因此目标成分敲出/敲入技术在中药研究中应用较多,而在食品领域应用较少。随着化合物分离技术的不断成熟,已有食品中活性成分的研究应用了该项技术的思路,但该技术在食品领域并未得到系统的应用。本文概述了目标成分敲出/敲入技术发展、分析流程及在食品功能领域的应用进展,以期为目标成分敲出/敲入技术在食品功能研究领域的应用提供参考。

混动车型平衡轴齿轮敲击噪声优化

为了优化纵置混动车型平衡轴齿轮敲击噪声,对比横置车型结构差异,识别出飞轮惯量变大,曲轴模态降低,平衡轴驱动齿圈角加速度变大,导致平衡轴齿轮敲击,而常规单级减振器匹配呈现“此消彼长”规律,无法覆盖发动机全转速段角加速度优化目标,因此开发出双级扭转减振器,降低平衡轴驱动齿圈角加速度,可解决齿轮敲击问题;使用Simpack软件搭建了齿轮敲击多体动力学模型,研究了平衡轴齿轮敲击产生和传播机理,进而开发出双消隙平衡轴,通过减小啮合过程中轮齿双侧受力冲击,进一步优化了齿轮敲击噪声。结果表明,综合使用双级减振器和双消隙平衡轴可解决齿轮敲击问题,对平衡轴齿轮设计和敲击问题优化具有重要的工程意义。

基于CRISPR/Cas9构建血管平滑肌细胞特异性Mrjp 1基因敲入小鼠

【目的】探究蜂王浆中含量最高的活性分子——蜂王浆主蛋白1(MRJP1)基因敲入血管平滑肌细胞后,在体内水平上是否具有调节小鼠血压的功能。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,将可识别小鼠Hipp11位点的gRNA、Cas9和包含Sm22α启动子+Mrjp 1 cDNA的载体共显微注射小鼠受精卵,制备在血管平滑肌细胞中特异性表达的Mrjp 1基因定点敲入小鼠,并验证敲入位点的正确性。小鼠背部皮下包埋微渗透压缓释泵,持续将血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导野生型(WT)和纯合子(Mrjp 1^(+/-))小鼠,比较不同时间收缩压和舒张压,以及胸主动脉中膜面积/管腔面积(Media/Lumen area)比值的差异。【结果】F0代嵌合体小鼠与野生型交配,产生杂合子(Mrjp 1^(+/-))小鼠,对Mrjp 1^(+/-)小鼠敲入位点同源重组片段的PCR扩增、测序和Southern blotting检测结果显示,Mrjp 1基因成功整合到小鼠染色体Hipp11位点。Mrjp 1^(+/-)小鼠之间交配产生WT、Mrjp 1^(+/-)和Mrjp 1^(+/-)小鼠,Mrjp 1基因在胸主动脉中能够顺利转录和翻译。持续给予AngⅡ,Mrjp 1^(+/-)小鼠收缩压和舒张压升高趋势整体低于WT小鼠,收缩压在第3、6、9、12天差异显著(P<0.05),舒张压在第3(P<0.05)、6(P<0.01)天差异显著;经AngⅡ刺激后,M rjp 1^(+/-)小鼠胸主动脉Media/Lumen area比值亦显著低于WT小鼠(P<0.05)。【结论】Mrjp 1基因特异性敲入小鼠血管平滑肌细胞,可在体内水平上抑制AngⅡ诱导的高血压,为深入了解MRJP1蛋白功能及精准开发蜂王浆提供了重要的理论依据。

连续型向上敲出巴黎期权定价隐式差分格式及其稳定性和收敛性分析

考虑连续型向上敲出巴黎期权定价问题.首先,针对该类型巴黎期权,给出一个时间1阶、空间2阶精度的隐式差分格式;其次,采用不等式放大方法和Fourier展开方法分别讨论差分格式的稳定性、可解性和收敛性;最后,利用差分格式分析连续型向上敲出巴黎期权的数值定价结果.

载Cas9-RNP细胞膜囊泡仿生纳米粒的制备及其对小鼠巨噬细胞NLRP3基因的敲低作用

目的通过使用小鼠巨噬细胞膜包裹Cas9核糖核蛋白复合物(RNP),制备Cas9-RNP仿生纳米粒Cas9-RNP@MMs,旨在利用此仿生纳米粒递送Cas9-RNP复合物用于基因编辑,并进一步在体外研究小鼠巨噬细胞RAW264.7对Cas9-RNP@MMs的内吞情况及其基因编辑效果,为开发低毒性的抑制NLRP3治疗靶点的仿生纳米粒载体提供证据。方法将提取的小鼠巨噬细胞细胞膜与制备的Cas9-RNP混合,超声后使用脂质体挤压仪挤压得到Cas9-RNP@MMs。使用纳米颗粒跟踪仪检测Cas9-RNP@MMs的颗粒直径,透射电子显微镜下观察Cas9-RNP@MMs的颗粒形态。激光共聚焦荧光显微镜成像分析细胞对Cas9-RNP@MMs的内吞情况。采用MTT法检测Cas9-RNP@MMs生物相容性。通过qPCR和Western blot检测NLRP3表达,来验证Cas9-RNP@MMs敲低NLRP3基因的效果。结果采用巨噬细胞细胞膜制备的Cas9-RNP@MMs平均粒径约为216 nm;激光共聚焦荧光显微镜下,Cas9-RNP@MMs能成功被RAW246.7细胞摄取;MTT检测结果显示Cas9-RNP@MMs处理的小鼠巨噬细胞RAW246.7具有良好的生物相容性;qPCR和Western blot检测显示,有两条NLRP3特异的向导RNA(sgRNA)通过Cas9-RNP@MMs介导,有良好的敲低NLRP3基因表达的效果。结论利用仿生纳米粒成功制备了内腔载有Cas9-RNP复合物的纳米级囊泡Cas9-RNP@MMs,Cas9-RNP@MMs具有良好的生物相容性并且可以被RAW246.7细胞高效内吞;含有NLRP3特异的sgRNA的Cas9-RNP@MMs能够特异性敲低NLRP3基因表达。

一种肺血管基因敲减动物模型的构建及在肺动脉高压中的运用

目的 探讨经大鼠的气道注入1型腺相关病毒(AAV1)携带的KLF4-shRNA能否有效构建肺血管基因敲减动物模型以及其在肺动脉高压中的运用。方法 根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,并以细胞计数和细胞迁移实验加以验证,然后进一步构建AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体。将44只清洁级SD大鼠随机分为4组:健康对照组、盐水模型组、对照病毒载体组、基因敲减组。后3组大鼠分别气管内注入生理盐水(盐水模型组)、AAV1-control vector(对照病毒载体组)、AAV1-KLF4-shRNA(基因敲减组)。1个月后对后3组进行烟熏造模,烟熏4个月后麻醉各组大鼠,分别检测右心室收缩压和平均右心室压,并取肺组织以免疫荧光法观察病毒载体在肺血管中的表达情况,通过PCR方法测定肺动脉中KLF4水平,通过HE染色比较肺小血管中膜厚度评估肺血管肥厚程度。取大鼠心脏计算右心肥厚指数。结果 细胞计数和细胞迁移实验证实选用的KLF4-siRNA链有效。免疫荧光实验显示,经大鼠气道注入的1型腺相关病毒载体均沿肺血管分布。荧光定量PCR实验显示,基因敲减(AAV1-KLF4-shRNA)组大鼠肺小动脉中KLF4的mRNA表达量明显低于其他两组。血流动力学检测结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的右心室收缩压和平均右心室压均明显高于健康对照组,而接受肺血管KLF4基因敲减的大鼠的右心室收缩压和平均右心室压均明显低于盐水模型组及对照病毒载体组。HE染色及右心肥厚指数结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的肺小血管重构及心室重构程度明显高于健康对照组,而接受肺血管KLF4基因敲减的大鼠的肺小血管重构及心室重构程度明显低于盐水模型组及对照病毒载体组。结论 肺血管特异性KLF4基因敲减模型构建成功并成功地在肺动脉高压中发挥作用,为进一步深入研究肺动脉高压的发病机制提供了平台和实验基础。

摆锤敲入法检测砌筑砂浆抗压强度测强曲线建立的试验研究

摆锤敲入法检测是现场检测砌体工程中的砌筑砂浆抗压强度的一种新方法。摆锤敲入法检测砌筑砂浆抗压强度测强曲线的建立是在大量试验研究的基础上,通过对试验数据的回归分析确定的。采用同盘砂浆分别制作以钢为底模和以烧结普通砖为底模的立方体试件和砌筑墙体,同条件养护后,对立方体试件进行抗压强度试验,对墙体水平灰缝的砂浆进行摆锤敲入法检测,通过对抗压强度试验结果及摆锤敲入法检测结果的统计、回归分析,建立摆锤敲入法检测砌筑砂浆抗压强度测强曲线。

抱罐车液压敲罐系统的设计及应用

针对抱罐车大臂工况,在综合分析其敲罐系统需求的基础上,给出了一种典型敲罐系统设计方案。分析了该设计方案所需元件选型的关键技术。与此同时,结合大臂油缸运行机构的几何模型,给出了敲罐工况的重要参数计算公式,包括补油油箱容积、敲罐加速度、敲罐时间等,揭示了各主要技术参数之间的内在联系。并以某款实际样机参数为例进行相关参数的实例计算,为抱罐车大臂液压敲罐系统的设计及其计算方法提供了理论参考依据。

体外定点突变体或CRISPR/Cas9介导的敲入突变体快速筛选方法的建立

目的 探讨建立一种体外定点突变体或CRISPR/cas9介导的敲入突变体的快速筛选方法,以提高突变体筛选效率,降低实验成本。方法 针对构建的体外定点突变体或CRISPR/Cas9介导的敲入突变体,采用3′端第1、2和3个核苷酸分别与突变序列相匹配的筛选引物进行聚合酶链式反应(PCR),通过琼脂糖凝胶电泳检测是否有特异性扩增条带。结果 利用特异性突变筛选引物进行PCR在正确的突变体中有效地扩增出了DNA条带,而在未成功突变的样本中则无法扩增,琼脂糖凝胶电泳显示有DNA扩增条带,证明正确突变体筛选成功。结论本研究建立的突变体快速筛选方法能够简便快速地筛选出正确突变体,明显简化了突变体的鉴定过程,可有效降低实验成本,提高工作效率。