ATF6在转基因敲除鼠人工诱导蜕膜化模型中的研究

目的利用小鼠人工诱导蜕膜化模型,探讨转录活化因子6(ATF6)在小鼠子宫内膜中的作用机制。方法构建繁育野生型(Atf6^(+/+))和ATF6敲除型(Atf6^(-/-))小鼠,并构建小鼠人工诱导蜕膜化模型。雌鼠交配后见阴栓第1天记为Day 1。Day 4进行诱导蜕膜化,蜕膜化后48 h和72 h(即Day 6和Day 7)收集小鼠子宫进行相应指标检测,实时荧光定量PCR方法和蛋白质免疫印迹法检测Atf6 mRNA与蛋白质在蜕膜化子宫中的表达情况;免疫组织化学方法检测野生型(Atf6^(+/+))和ATF6敲除型(Atf6^(-/-))小鼠人工诱导蜕膜化模型中ATF6和催乳素(PRL)在子宫中的阳性信号表达情况。收集人子宫内膜生理周期中不同时相子宫内膜组织,进行石蜡包埋切片,免疫组织化学方法检测ATF6在子宫内膜中的阳性信号表达情况。结果与小鼠未蜕膜子宫相比,Day 6和Day 7蜕膜化子宫中的Atf6 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),细胞核内的蛋白水平也显著增高(P<0.05);Day 7时子宫大体形态学显示子宫较粗且均匀。野生型和敲除鼠诱导蜕膜化子宫HE染色显示,绝大部分子宫基质细胞变大变圆,表明诱导蜕膜化的子宫内膜蜕膜化充分;PRL免疫组化染色结果表明,在野生型(Atf6^(+/+))和敲除型(Atf6^(-/-))小鼠蜕膜化子宫内膜中,PRL染色阳性信号分布范围无显著性差异(P>0.05)。不同月经周期时相人子宫内膜组织的免疫组化结果提示,ATF6在月经期和增殖早期的表达水平较高,显著高于其余周期时相(P<0.05)。结论ATF6能够参与子宫内膜蜕膜化,但不是蜕膜化发生的必要条件;ATF6可能通过参与子宫内膜的生理修复过程参与子宫内膜生理周期。

ApoE基因敲除鼠12周游泳运动前后纤溶激活功能的改变

目的：探讨ＡｐｏＥ在长期有氧运动中影响纤溶激活作用中的有关机制。方法：以ＡｐｏＥ基因敲除（ＡｐｏＥ－／－）鼠为实验组、以相同遗传背景的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ鼠为对照组建立运动模型。结果：１２周游泳后，对照组鼠ＴＧ（０．９６±０．３０ｖｓ０．５４±０．０７０ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０１）和ＰＡＩ（０．９２±０．０７ｖｓ０．８０±０．０９ＡＵ／ｍｌ，Ｐ＜０．０５）降低，ｔＰＡ升高（０．６０±０．１２ｖｓ１．０４±０．２３ＩＵ／ｍｌ，Ｐ＜０．０１）；而ＡｐｏＥ－／－鼠的ＴＧ（１．２８±０．３４ｖｓ１．２９±０．３２ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＞０．０５）和ＰＡＩ（０．７４±０．１０ｖｓ０．７９±０．０４ＡＵ／ｍｌ，Ｐ＞０．０５）均没有显著变化，ｔＰＡ（０．７１±０．１５ｖｓ０．９７±０．１７ＩＵ／ｍｌ，Ｐ＜０．０１）升高。结论：长期有氧运动使对照小鼠纤溶激活作用明显改善，其机制与ＴＧ和含ＡｐｏＥ脂蛋白水平降低导致ＬＲＰ清除ｔＰＡ－ＰＡＩ作用加强、ＰＡＩ抑制作用减弱及ｔＰＡ合成水平增加有关。Ａｐ ｏＥ－／－鼠运动后，ＰＡＩ水平稳定而ｔＰＡ活性增加，提示ｔＰＡ合成作用增强。

利用IGF-1基因敲除鼠乳腺癌模型研究IGF-1对血管生成的影响

目的探讨在低血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平与正常IGF-1水平的小鼠乳腺癌模型中应用血管生长抑制剂人参皂甙(GS)Rg3后,IGF-1对血管生成的影响。方法应用7,12-二甲基苯蒽(DMBA)诱导肝脏特异性IGF-1基因敲除鼠(LID鼠)及对照鼠建立原发乳腺癌模型,应用GSRg3进行干预治疗,利用免疫组化法检测乳腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和Ⅷ因子相关抗原(F8-RAg)表达水平,同时利用基因芯片技术检测小鼠乳腺癌及正常乳腺组织中相关基因的表达情况。结果LID鼠乳腺癌的发生率低于对照鼠(P<0.05);LID鼠乳腺癌组织中VEGF表达水平与微血管密度均低于对照组(P<0.05)。LID鼠乳腺癌组织中IGF-1、成纤维细胞生长因子(FGF)-1、肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子(TGF)-β1基因较对照组上调,成纤维细胞生长因子受体(FGFR)-2、血小板源性生长因子(PDGF)-A和PDGF-B基因较对照组下调;应用GSRg3后,LID鼠乳腺癌组织中VEGFa、表皮生长因子(EGF)、表皮生长因子受体(EGFR)、PDGF-A和FGFR-2基因较对照组上调,而IGF-1和TGF-β1基因较对照组下调。结论IGF-1促进小鼠乳腺癌的发生、发展,且与血管生长密切相关。血管生长抑制剂可能通过IGF-1及TGF-β1发挥抗肿瘤作用。

载脂蛋白E基因敲除鼠不同部位动脉粥样硬化病变病理形态学分析

目的通过建立载脂蛋白E基因敲除鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)动物模型,分析其不同部位AS病变的病理形态学特征。方法用高脂高胆固醇饲料喂养载脂蛋白E基因敲除鼠,并行右颈总动脉套环术建立AS动物模型。连续石蜡切片,HE染色观察套环侧和未套环侧颈总动脉及主动脉粥样硬化病变,进行病变分型。结果未套环侧颈总动脉未见病变,套环侧颈总动脉粥样硬化病变明显,属于Ⅰ、Ⅱ型病变的共10例,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型病变的共14例;主动脉无病变的共8例,属于Ⅰ、Ⅱ型病变的共10例,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型病变的共6例。结论载脂蛋白E基因敲除鼠套环形成的AS病变严重且发生、发展迅速,主动脉自发形成的AS病变发展缓慢。

雌激素对D-半乳糖去卵巢小鼠及其apoE基因敲除鼠认知能力的影响

目的观察雌激素对D-半乳糖去卵巢C57BL/6 J小鼠及其apoE基因敲除鼠两组动物的认知能力的影响。方法采用D-半乳糖腹腔注射和双侧卵巢切除术制备D-半乳糖去卵巢动物模型(D-gal+OVX),1 w后补充雌激素组开始每周腹腔注射EB(EB)2次,6w后应用Morris水迷宫观察各组小鼠行为学改变。对apoE基因敲除鼠进行同样的处理。结果EB对模型组小鼠有改善认知功能的作用,而对apoE基因敲除组小鼠的认知功能没有改善作用。结论EB可能通过apoE依赖机制而发挥其改善认知功能的作用。

牙本质涎磷蛋白、Ⅰ型胶原蛋白在vps4b基因敲除鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的研究vps4b基因突变对牙齿发育相关蛋白——牙本质涎磷蛋白(DSPP)和Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)表达的影响。方法取胚胎E13.5 d、E14.5 d、E16.5 d的胎鼠头部及出生后P2.5 d、P7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,采用免疫组织化学染色法检测野生型小鼠和vps4b基因敲除小鼠牙胚中DSPP、COL-Ⅰ的表达。结果野生鼠蕾状期和帽状期DSPP、COL-Ⅰ均未表达;钟状期DSPP在内釉上皮和牙乳头中有表达,COL-Ⅰ表达于牙乳头和牙囊;分泌期和矿化期DSPP、COL-Ⅰ在成釉细胞、成牙本质细胞、牙囊内均有表达,COL-Ⅰ在牙乳头内亦可见表达。小鼠vps4b基因敲除后,DSPP在钟状期牙乳头和分泌期牙乳头及牙囊内未见表达,COL-Ⅰ在钟状期及矿化期表达部位与野生型小鼠一致,分泌期在牙乳头的表达发生改变。结论 vps4b基因在牙胚发育中发挥重要作用;DSPP、COL-Ⅰ的表达可能受vps4b基因的调控,并与vps4b共同调节牙齿牙本质的发育。

高脂饮食诱导APOE和LDLR基因敲除鼠AS斑块形成的分子病理学特征

目的观察在高脂饮食条件下,载脂蛋白E(ApoE)和低度密度脂蛋白受体(LDLR)基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块形成的病理学特征与基质金属蛋白酶(MMP-2,9)和Mac-3表达水平。方法用C57BL/6J小鼠普通饮食作对照,用ApoE基因敲除和LDLR基因敲除两种小鼠,每种分为普通饮食和高脂饮食两组,8只/组。连续喂养120d后,分离获得各组小鼠主动脉,用Masson染色,油红O染色法观察小鼠动脉粥样斑块病理形态学变化,用免疫组织化学检测AS斑块内炎症以及基质金属蛋白酶(MMP-2,9)表达水平,用免疫双荧光抗体法分析AS斑块巨噬细胞和平滑肌细胞内MMP-9表达的差异。结果与普通饮食的基因敲除鼠比,高脂饮食的ApoE和LDLR基因敲除鼠的动脉粥样硬化斑块显著增大,炎性细胞增多,纤维帽中基质纤维成分减少,纤维帽形状变薄和大量中性脂滴沉积。其中,以ApoE基因敲除鼠的最为严重。AS斑块形成大小与Mac-3表达水平和炎症细胞增加呈正相关。斑块内MMP-9表达在巨噬细胞内占50%～70%,在平滑肌细胞内占30%。结论高脂饮食可加重ApoE和LDLR基因敲除小鼠AS斑块形成和Mac-3表达及炎症细胞增加,MMPs水平亦相应增加,其病变呈现出不稳定性斑块特征。

运动对ApoE基因敲除鼠动脉粥样硬化形成的干预作用及机制

探讨运动对动脉粥样硬化形成的延缓作用及抗氧化作用途径、脂代谢途径,以ApoE建立动脉粥样硬化(AS)模型,观察有氧运动对ApoE-/-小鼠主动脉斑块面积、血脂、血氧化低密度脂蛋白、肝MDA、肝SOD的影响。结果:ApoE-/-小鼠形成明显斑块,存在氧化水平的升高和血脂紊乱,运动可使斑块面积减少,使ApoE-/-小鼠血oxldl、肝MDA降低,肝SOD升高,但运动没有影响ApoE-/-小鼠的血脂水平,且运动均不影响正常状态,即C57小鼠的脂代谢和氧化水平。结论:运动可通过调节机体的氧化抗氧化水平,发挥抗动脉粥样硬化的作用,可能独立于降血脂途径。

补体3干预补体3基因敲除鼠神经病理性疼痛模型的研究

目的:观察补体3(C3)在神经病理性疼痛模型中的作用。方法:36只C3基因敲除小鼠随机分3组:A组:假手术组;B组:慢性坐骨神经结扎(CCI)模型组;C组:CCI模型干预组。测定小鼠的热痛阈值和机械痛阈值、脊髓SOD活力和MDA的组织含量。结果:与A组相比,B、C组痛阈均明显下降,P<0.05;C组与B组相比,C组痛阈下降幅度更大,差异具有显著性。与A组相比,B组小鼠术后第3、7天脊髓组织SOD活力明显降低而MDA显著升高;C组SOD和MDA变化幅度显著大于B组;C组内第7天与第3天相比,SOD活力增加且MDA含量减少。结论:C3显著增加了补体C3基因敲除小鼠痛敏状态,促进和维持了神经病理性疼痛状态。

基因敲除鼠在动脉粥样硬化研究中的应用

ApoE和LDL-R基因敲除鼠可自发形成动脉粥样硬化斑块,是动脉粥样硬化研究的常用模型。在此基础上应用基因打靶技术建立的白介素-1、C反应蛋白、清道夫受体、IgGFc、补体C1q及CD44等模型对研究动脉粥样硬化中炎症和免疫因子的作用机制起了重要作用。

蜂胶及其主要成分乔松素对载脂蛋白E基因敲除鼠动脉粥样硬化的抑制作用

目的在家兔做动物模型取得初步数据的基础上,本研究使用公认的自发产生动脉粥样硬化(As)的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)鼠喂以高脂食物,探讨蜂胶及其主要黄酮成分乔松素对As的作用。方法蜂胶为泰山松柏蜂胶,根据本实验室常规方法提取制备蜂胶乙醇浸膏(EEP),EEP中总黄酮含量为30.5%,乔松素以硅胶柱层析、半制备液相色谱法制备,熔点测定和质谱法鉴定。8周龄雄性C57BL/6J背景的ApoE-/-鼠,平均体重22 g,购于北京大学医学院动物实验中心。饲以含脂肪21%、胆固醇0.15%的饲料。EEP组为70%乙醇蜂胶浸膏160 mg/(kg.d),另分乔松素低剂量组(10 mg/kg)、高剂量组(20mg/kg)和联合用药组(乔松素20 mg/kg和辛伐他汀粉剂10 mg/kg)。每天1次,连续14周。全自动生化分析仪检测血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)。硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO);酶联免疫双抗体夹心法检测内皮素(ET)和血管内皮生长因子(VEGF)。小鼠心脏OCT包埋,冰冻切片,油红O染色,观察主动脉根部粥样硬化斑块。小鼠主动脉弓到髂动脉分叉的整条主动脉,油红O染色,观察主动脉内表面粥样硬化斑块,图像系统分析斑块大小。免疫组织化学染色法观察As斑块VEGF表达。结果与对照组相比,EEP降低了TG、TC、LDLC和HDLC含量,增加血清NO含量,降低ET水平;油红O染色显示EEP组主动脉斑块面积显著降低,斑块面积与整条动脉内表面积的比值降低了16.15%,主动脉根部斑块面积与管腔横截面面积的比值降低了20.93%,免疫组织化学结果表明EEP降低了血管内皮生长因子(VEGF)的表达,血清VEGF含量也相应降低。析因分析结果显示,乔松素或辛伐他汀钠单一药物预处理组与未用药物组比较,均降低了血清中TG、TC、HDLC和LDLC的含量,升高了NO含量,降低了ET和VEGF的含量,减少了As斑块的面积。乔松素和辛伐他汀联合组与单一药物组比较,血清中TG、TC、HDLC和LDLC的含量均降低,NO升高,血清ET降低,血浆VEGF和斑块内VEGF均降低,粥样硬化斑块面积减少。

外膜炎症诱发载脂蛋白E基因敲除鼠冠状动脉粥样硬化病灶

研究载脂蛋白E基因敲除(载脂蛋白E°)小鼠冠状动脉内粥样硬化病灶的分布、组成与动脉外膜炎症的关系.取载脂蛋白E°小鼠心脏作连续切片,Movat法染色,追踪冠状动脉主干及其心肌内的小分支;寻找病灶,观察病灶内组成,分析其分布规律.复制小鼠股动脉外膜无菌性炎症模型,用免疫组织化学方法检查内膜粘附分子的表达.结果发现,冠状动脉主干内有延伸病灶,在主干以下分支(包括心肌内小分支)内有在原位生成的病灶,在两类病灶相邻的外膜有炎性细胞浸润,外膜炎症面积大于动脉粥样硬化病灶累及的内膜面积,亦发现一些部位血管外有炎性细胞浸润,而尚无病灶形成.原位病灶均发生于心室壁,大的原位病灶多发生在左室壁心肌内、血管分支处和乳头肌附近的冠状动脉分支内.股动脉外膜炎症可诱发内膜表达细胞间粘附分子1和血管细胞粘附分子1,同时伴白细胞的附壁.以上提示:血管外膜炎症是小鼠冠状动脉内病灶的一个始动环节.

运动对载脂蛋白E基因敲除鼠oxldl及其内皮受体lox-1表达的影响

目的:观察氧化低密度脂蛋白(oxldl)及其受体血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(lox-1)在运动影响动脉粥样硬化形成中的变化。方法:对8周龄ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠饲以"西方饮食"饲料建立动脉粥样硬化模型,随机分为ApoE-/-安静组和ApoE-/-运动组。C57BL/6J小鼠为同源对照鼠,分为正常安静组和正常运动组。每组15只。运动小鼠进行12周中等强度跑台运动(10米/分×30分钟/天～13米/分×60分钟/天,每周5天)。采用ELISA及免疫组化方法检测血oxldl、lox-1的表达。结果:和正常安静组相比,ApoE-/-小鼠oxldl显著升高(P<0.01);ApoE-/-运动组oxldl较ApoE-/-安静组降低(P<0.05)。正常安静组和正常运动组血oxldl无显著性差异。正常安静组主动脉lox-1弱表达,ApoE-/-安静组病变内皮层、斑块中可见明显的棕黄色颗粒、棕黄色弧线,ApoE-/-运动组表达较ApoE-/-安静组明显减弱。经图像分析,正常安静组、正常运动组主动脉弓lox-1阳性表达面积和阳性面积百分比组间比较均无显著差异。和正常安静组相比,ApoE-/-安静组阳性表达面积显著增大(P<0.01)。ApoE-/-运动组阳性表达面积显著低于ApoE-/-安静组(P<0.01)。结论:12周有氧运动可下调ApoE-/-小鼠血oxldl水平,显著降低其受体lox-1表达。

利用CRISPR/Cas9构建敲除小鼠模型研究PPP2R3A基因对心脏功能的影响

目的 应用CRISPR/Cas9技术构建蛋白磷酸2调节亚基B″家族α亚型(PPP2R3A)基因敲除小鼠,从分子水平及组织水平上研究PPP2R3A缺失对心脏的影响。方法 将Cas9 mRNA和两个靶向PPP2R3A第3外显子翻译起始密码子附近区域的单导向RNA微注射到C57BL/6小鼠受精卵中。小鼠出生后取其基因组DNA进行聚合酶链反应(PCR)和测序以鉴定基因型,鉴定后,基因PPP2R3A缺失型小鼠为KO组,野生型C57BL/6小鼠为WT组(雄性3只,雌性2只)。小鼠心脏组织经甲醛固定并制成切片后分别进行苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色。提取小鼠心脏组织总RNA和蛋白,应用荧光定量PCR和Western印迹验证基因敲除小鼠的有效性和检测互作蛋白表达。结果 获得F1代PPP2R3A杂合小鼠,PCR和测序结果表明突变小鼠的基因型存在113 bp的缺失突变。与WT组相比,KO组心脏组织中PPP2R3A mRNA和蛋白表达量明显下降(均P<0.05),参与心脏发育的G蛋白信号转导调控因子(RGS)19表达量明显升高(P<0.05)。PPP2R3A蛋白表达受损引起了心脏组织病理学变化。结论 PPP2R3A在体内可能通过与RGS19蛋白互作来参与心脏的发育并对心脏功能产生影响。

叔丁醇暴露对HSPA1L敲除型雄性小鼠甲状腺的影响

以HSPA1L基因敲除(HSPA1L^(-/-))雄性小鼠为研究对象,观察甲状腺组织形态和细胞凋亡情况,分析Caspase-3蛋白表达,探讨叔丁醇(TBA)的毒性以及HSPA1L在此过程中的作用机制.结果表明,HSPA1L^(-/-)小鼠甲状腺的重量随TBA剂量增加而显著降低(P<0.05);甲状腺上皮滤泡细胞随TBA剂量增加而增大,高剂量组甲状腺滤泡甚至发生融合现象;甲状腺细胞凋亡增强,甲状腺组织Caspase-3表达量极显著增加(P<0.01).HSPA1L^(-/-)小鼠对TBA暴露更为敏感,TBA造成的伤害显著增强,提示HSPA1L可能通过负调控Caspase-3表达,抑制细胞凋亡,维持细胞稳态.

巨噬细胞特异性敲除KLF2基因小鼠模型构建与鉴定

目的 建立巨噬细胞特异性敲除Kruppel样因子2(kruppel-like factor 2,KLF2)基因小鼠模型,探讨KLF2对巨噬细胞炎症反应的调控作用。方法 运用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建KLF2~(flox/+)小鼠。通过与Lyz2-Cre~(+/+)小鼠繁育得到目的基因型小鼠,通过基因型鉴定、实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western Blot从DNA、RNA、蛋白水平验证KLF2敲除效率。分离培养小鼠骨髓源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages, BMDMs),检测脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的炎症相关因子mRNA变化。结果 建立了KLF2~(flox/flox)/Lyz2-Cre~+基因型小鼠,即巨噬细胞特异性敲除KLF2基因。小鼠骨髓、BMDMs的KLF2 mRNA及蛋白水平显著低于对照组小鼠,而心脏、肝、肾组织中KLF2 mRNA表达较对照组小鼠无显著变化。两组小鼠的体重、进食、进水、形态无显著性差异。在LPS作用下,缺失KLF2的BMDMs炎症相关基因IL-6 mRNA表达水平较对照组显著下降,而IL-1、iNOS、CD86 mRNA表达水平较对照组显著升高。结论 本研究成功构建了巨噬细胞特异性敲除KLF2小鼠模型,为进一步研究巨噬细胞KLF2对临床炎症相关疾病的调控作用及机制奠定基础。

基于CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法的Ddx3x肝脏条件性敲除小鼠模型的构建与鉴定

目的采用CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法构建DEAD-box RNA解旋酶3X连锁(DEAD-box RNA helicase 3X-linked,Ddx3x)肝脏条件性敲除小鼠。方法设计特异的sgRNA序列,在Ddx3x基因外显子4~10两端插入LoxP序列,构建Ddx3x-flox小鼠。采用PCR方法对F0代和F1代小鼠进行基因鉴定。将Ddx3x-flox F1代小鼠与特异性表达Alb-Cre的工具鼠交配,获得肝脏条件性敲除Ddx3x基因小鼠(Ddx3x^(Δhep))。采用PCR方法和Western blotting方法分别检测Ddx3x^(Δhep)基因小鼠目的基因与蛋白的表达。选取8周龄雄性野生型C57/6J小鼠、Ddx3x^(Δhep)小鼠、Ddx3x^(fl/fl)小鼠,测定血清ALT、AST水平评价肝脏肝损伤情况。结果对F1代小鼠基因PCR鉴定的结果表明,基因型符合Ddx3x^(fl/fl);F1代小鼠与Alb-Cre小鼠杂交,子代与Ddx3x^(fl/fl)小鼠杂交,即获得Ddx3x^(Δhep)小鼠;PCR与Western blotting结果显示,目的小鼠肝组织中Ddx3x基因和蛋白表达显著降低。此外,Ddx3x^(Δhep)小鼠无胚胎致死现象,出生后生理状况良好。正常饲养条件下,Ddx3x^(Δhep)小鼠与Ddx3x^(fl/fl)小鼠及野生型小鼠相比,血清ALT、AST指标及体质量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论基于CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法成功构建了Ddx3x^(Δhep)小鼠动物模型,为后续研究Ddx3x在肝脏中的生物学功能及作用机制奠定了良好的基础。

miR-155敲除小鼠乳腺癌肺转移模型的外周免疫细胞分型分析

目的:以miR-155基因敲除(miR155^(-/-))小鼠为对象,比较其与C57BL/6J野生型(WT)小鼠乳腺癌肺转移模型的外周血免疫细胞分型。方法:生物信息学分析miR-155在乳腺癌组织和外周血清中的表达水平及与预后的关系;采用尾静脉注射方式建立小鼠乳腺癌肺转移模型,流式细胞术对外周血免疫细胞进行分型分析;通过病理检查观察肺组织肿瘤转移情况。结果:miR-155^(-/-)小鼠T细胞和单核细胞百分比较WT小鼠显著降低(P<0.05),髓源性抑制细胞(MDSCs)百分比显著升高(P<0.01),其中单核细胞亚群(M-MDSC)显著减少(P<0.05),粒细胞亚群(G-MDSC)显著增多(P<0.05);在乳腺癌肺转移模型中,miR155^(-/-)小鼠的T淋巴细胞较WT小鼠明显增多(P<0.05),NK细胞明显减少(P<0.05),中性粒细胞明显减少(P<0.001),T细胞中Th细胞明显减少(P<0.05),M-MDSCs显著减少(P<0.01),而G-MDSCs显著增多(P<0.01)。结论:miR-155基因缺失导致外周免疫细胞分型的显著差异,使小鼠更易发生乳腺癌肺转移。

Trappc11诱导型基因敲除小鼠模型的构建及鉴定

目的建立转运蛋白颗粒复合物亚基11(Trappc11)诱导型基因敲除小鼠模型。方法和结果在Trappc11基因外显子3~5的两侧分别引入loxP位点,利用CRISPR/Cas9技术获得F0代C57BL/6J小鼠;将通过PCR扩增及测序鉴定阳性的F0代C57BL/6J小鼠与C57BL/6J野生型小鼠交配、繁殖,获得F1代Trappc11flox/+小鼠;再将Trappc11flox/+小鼠与UBC-CreERT2小鼠交配,经过2代繁殖,最终获得Trappc11诱导型全身性基因敲除小鼠模型。结论通过CRISPR/Cas9和Cre-loxP技术成功建立了Trappc11诱导型基因敲除小鼠模型,为揭示Trappc11在多器官系统疾病中的病理生理学作用提供了重要工具。

蛋白激酶D3血管内皮细胞条件性敲除小鼠的构建及表型分析

目的构建Prkd3血管内皮细胞条件性敲除小鼠并分析其表型,探讨血管内皮细胞上Prkd3条件性敲除小鼠的敲除效率及可能的表型。方法利用Cre/LoxP系统构建血管内皮细胞条件性基因敲除小鼠模型,即分别构建Prkd3flox/flox小鼠和Cdh5-Cre工具小鼠,再将两者进行交配,筛选得到Prkd3血管内皮条件性敲除小鼠(Cdh5-Cre;Prkd3flox/flox,简称Prkd3ΔEC)。在血管内皮细胞内特异性敲除Prkd3,通过鼠尾PCR法进行基因型鉴定;分离肝血窦内皮细胞并用Western blot检测敲除效率,通过功能学及组织病理学方法评估内皮细胞中Prkd3缺失对肝脏的影响。结果成功构建Prkd3ΔEC,敲除效率大于90%。表型分析发现,Prkd3ΔEC小鼠表现出自发性肝纤维化,随年龄增长逐渐加重(P<0.05);通过HE染色和天狼星红染色发现肝脏中胶原纤维增多,血管周围的纤维成分明显增多(P<0.05)。表明血管内皮细胞中Prkd3缺失能够诱发自发性肝纤维化。结论成功构建了Prkd3ΔEC,该条件性敲除小鼠的肝脏存在自发性肝纤维化情况。