利用激光扫描共聚焦显微术对同源四倍体水稻胚囊形成与发育的进一步观察

应用改进的整体染色透明激光扫描共聚焦显微术(WCLSM),对同源四倍体水稻PDER-2B-4x胚囊的形成与发育过程进行观察。发现其胚囊的形成发育过程与二倍体的一致,可以清楚地划分为8个发育时期,即孢原细胞形成期、大孢子母细胞形成期、大孢子母细胞减数分裂期、功能大孢子形成期、单核胚囊形成期、胚囊有丝分裂期、八核胚囊发育期和成熟胚囊期。除正常发育的过程外,大孢子发育的各个过程均出现一些异常现象,包括:细胞退化、核位置异常、核数目异常和细胞分化异常等。这些异常可能最终导致多种结构异常成熟胚囊的形成。

基于激光共聚焦显微镜研究细胞核标识技术

本文利用激光扫描共聚焦显微镜研究实验室常用细胞核标记方法,对细胞成像相关实验技术进行进一步优化。首先用DNA荧光标记法、组蛋白荧光标记法以及微分干涉术(DIC)分别对贴壁培养的细胞进行成像;然后结合核仁蛋白标记和核内非编码RNA杂交标记对细胞核结构进行解析,进一步挖掘常规核染色标记所能带来的深度信息;最后针对实验平台日常细胞影像实验需求进行研究,对几类常用核标识技术的优势与不足进行讨论。基于影像实验数据,可以发现染色质相关荧光标记不仅仅可用于细胞核标识,其展示的核内染色质密度分布同时暗含了细胞核的亚结构信息,我们在此予以初步实验论述。另外,利用共聚焦DIC成像同样能清晰识别细胞核及其内部核仁结构,因而DIC在一定程度上与染色质荧光标记成像是等效的。总之,本文对常用几种细胞核标识技术进行了全面介绍,有望为细胞成像相关实验的研究与分析提供新的思路。

广东高州普通野生稻生殖特性的研究 Ⅱ.胚囊育性、胚囊发育、胚胎发生和胚乳发育

利用整体染色激光扫描共聚焦显微镜术(WCLSM),对采自广东省高州市6个地点共141个编号的高州普通野生稻的成熟胚囊育性和胚囊形成发育特点等进行研究。结果表明,供试的绝大多数高州普通野生稻材料成熟胚囊均存在不同程度的育性异常现象,包括雌性生殖单位退化、极核位置异常、极核数目异常、胚囊退化等。这些异常结构的胚囊由于没有正常的卵细胞,不能正常受精,影响子粒结实。141个编号平均异常胚囊频率为11.11%,最高异常率为67.86%。高州普通野生稻胚囊发育过程与正常栽培稻一致,属蓼型。对一些结实率偏低材料的研究,发现在胚囊发育过程的不同时期存在一些异常现象,包括功能大孢子退化,二至八核胚囊发育异常等。对柱头上的花粉量调查,发现观察的69个编号中,多数编号柱头上花粉量偏少。研究表明,花粉量偏少影响受精是导致结实率偏低的最主要原因之一。本文对导致结实率偏低的综合因素进行了讨论。

比较3种形态学方法观察成骨细胞矿化结节的应用价值

背景:矿化结节是成骨细胞分化成熟的标志,以往观察方法多采用茜素红等特殊染色法。目的:比较茜素红染色-光镜、四环素荧光标记-激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜3种形态学观察成骨细胞矿化结节的方法,分析各自的特点及在骨病研究中的应用价值。方法:将大鼠成骨细胞株UMR-106正常培养、每天换液,连续培养14 d,分别采用茜素红染色-光镜、四环素荧光标记-激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜观察矿化结节的形态结构,并利用扫描电镜结合能谱仪原位定量分析钙元素;此外,在培养中加入可抑制成骨细胞增殖、分化的肿瘤坏死因子α作为对照实验。结果与结论:3种观察方法均可观察到正常成骨细胞矿化结节的形态结构。对于肿瘤坏死因子α抑制成骨细胞产生矿化结节的情况,经茜素红染色-光镜观察法,未见明显的矿化结节;而四环素荧光染色-激光扫描共聚焦显微镜观察法,可见清晰、稀少的矿化结节;扫描电镜观察法明显可见较少而细小的矿化结节,提示后二种方法灵敏度较高。此外,扫描电镜可将观察成骨细胞分泌钙质、形成矿化结节的亚细胞结构,与能谱元素分析结合,可实现矿化结节的定位与定量,在骨病研究中值得推广应用。

广东高州普通野生稻与粳稻杂交F1胚囊育性及发育特点

利用整体染色激光扫描共聚焦显微术(WE-CLSM),对广东高州普通野生稻与粳稻台中65杂交F1的成熟胚囊育性、胚囊形成发育及受精特点进行研究。杂种F1成熟胚囊平均育性为64.61%。不同杂种的成熟胚囊均存在不同程度的异常现象,异常的主要类型有:胚囊退化、小胚囊、雌性生殖单位退化、卵器退化、极核数目或位置异常及其他异常等类型。其中频率最高的异常类型为雌性生殖单位退化(10.49%),其次是胚囊退化(9.80%)。杂种F1的胚囊发育过程与高州野生稻原种基本一致,育性低的杂种F1胚囊发育过程出现多种异常现象。对3个杂种F1受粉后1 d的胚囊进行观察发现,除正常受精膨大的胚囊外,还存在结构正常未受精和结构异常未受精等异常现象。受粉后7 d的胚囊基本上与受粉后1 d的相似。研究结果表明,广东高州普通野生稻可能具有决定杂种F1胚囊育性的不同基因,包括中性基因等。

噁二唑罗丹明荧光染料对Hela细胞和U937细胞染色效果研究

以合成的含噁二唑杂环的罗丹明荧光染料(Rh-M)对Hela和U937细胞进行了活体染色实验.荧光显微镜下观察该荧光染料可以在5 min内进入Hela细胞,染色后的细胞发光面积较大,强度较高,Rh-M浓度在10-20μmol/L,染色15 min效果最佳.激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)下,浓度在20μmol/L染色15 min的Hela细胞,可以清晰看出染料在细胞质中均匀分布.流式细胞术((flow cytometry,FCM)检测U937细胞,表明Rh-M与肿瘤细胞的亲和能力强,在100μmol/L内荧光亮度与荧光染料浓度呈现增加趋势.